7. УМОВИ ВИКОНАННЯ ВИМІРЮВАНЬ
При проведені вимірювань повинні бути забезпечені наступні умови:
7.1. Температура середовища (22+-5) град. С.
7.2. Відносна вологість від 60% до 75%.
7.3. Атмосферний тиск від 84,0 до 106,7 кПа (від 600,0 до 800,3 мм рт.ст).
7.4. Напруга електромережі (220+-22) В.
7.5. Освітленість від 300 до 400 лк.
8. ПІДГОТОВКА ДО ВИЗНАЧЕННЯ
8.1. Усі прилади та допоміжні пристрої привести у робочий стан згідно з інструкцією по експлуатації.
8.2. Приготування розчинів.
8.2.1. Приготування розчину лимоннокислого натрію (3,8 г на 100 г розчину).
Наважку (3,80+-0,01) г натрію лимоннокислого (п. 3.15) розчиняють у 96,2 мл дистильованої води (п. 3.14), яку відміряють циліндром (п. 3.12). Розчин зберігають при температурі від 4 до 6 град. С протягом одного тижня.
8.2.2. Приготування розчину 6-аміногексанової кислоти (є-амінокапронова кислота).
Наважку (325,0+-0,1) мг 6-аміногексанової кислоти (п. 3.13) розчиняють у 25 мл розчину натрію лимоннокислого (п. 8.2.1), який відміряють циліндром (п. 3.12). Суміш готують перед виконанням досліджень.
8.2.3. Приготування 50% розчину етилового спирту.
Спирт етиловий (п. 3.17) розбавляють рівним об'ємом дистильованої води (п. 3.14), точність концентрації перевіряється спиртоміром (п. 3.6).
8.2.4. Приготування розчину (бета)-нафтолу.
Наважку (2,0+-0,1) г (бета)-нафтолу (п. 3.16) переносять у мірну колбу місткістю 100,0 мл (п. 3.8) і розчиняють в 50% розчині спирту етилового (п. 8.2.3). Розчин залишають стояти при кімнатній температурі відкритим 2-3 доби. Подальше збереження реактиву відбувається флаконах темного скла з притертим корком (п. 3.11).
8.3. Одержання плазми крові.
Кров у хворого беруть натщесерце з вени гострою сухою голкою з широким діаметром, без шприца (для запобігання гемолізу). При заборі крові перші 5-6 крапель відкидають. Під час взяття крові не рекомендується накладати джгут і робити масаж передпліччя для запобігання активації зсідання крові і фібринолізу.
У пробірку поліетиленову (п. 3.9) дозатором лабораторним (п. 3.3) вносять 0,5 мл розчину натрію лимоннокислого (п. 8.2.1) та змішують з 4,5 мл крові (співвідношення 1:9). Пробірку з сумішшю щільно закривають корком і повільними рухами обережно декілька разів перемішують (не струшуючи).
Центрифугують (п. 3.5) протягом 10 хв з прискоренням 1200-1400 g. Плазму крові переносять дозатором лабораторним (п. 3.3) у пробірку поліетиленову (п. 3.9). Вимоги до зразків плазми крові установлюються у розділах преаналітики посібників з клінічної лабораторної діагностики.
9. ХІД ВИЗНАЧЕННЯ
9.1. В дві пробірки мірні лабораторні (п. 3.10) вносять дозатором лабораторним (п. 3.3) по 0,5 мл плазми крові, що дсліджується (п. 8.3) і додають в першу пробірку 2 краплі 50% розчину етилового спирту (п. 8.2.3), а в другу пробірку - 2 краплі розчину (бета)-нафтолу (п. 8.2.4). Пробірки струшують і вмикають секундомір (п. 3.4). Пробірки залишають при температурі (20+-2) град. С.
9.2. Через 10 хвилин результати оцінюють візуально, використовуючи збільшувальне скло (п. 3.7).
Перша пробірка контрольна, в її суміші не повинно бути ніяких часток.
Якщо в другій пробірці:
немає часток - реакція негативна,
невеликі гранули - реакція 1+,
невеликі пластівці - 2+,
поява ниток фібрину чи невеликого згустку - 3+,
утворення великого згустку - 4+.
Спостереження проводять протягом 10 хвилин. Більш пізнє утворення гелю не враховується.
10. ОБРОБКА ТА ОФОРМЛЕННЯ РЕЗУЛЬТАТІВ ВИМІРЮВАНЬ
10.1. За результат вимірювання приймають середнє значення
(х , ) двох паралельних вимірювань, яке розраховується за
ср
формулою: х = (х + х )/2,
ср 1 2
де х , х - значення, отримані у двох паралельних вимірюваннях.
1 2
10.2. Результати вимірювань заносяться до облікової медичної документації, затвердженої наказом МОЗ України від 04.01.01 N 1:
- форма 237/о - "Аналіз крові (показники системи згортання)";
- форма 238/о - "Аналіз крові (показники системи згортання - скорочений варіант)";
- форма 250/о - "Журнал реєстрації аналізів і їх результатів";
- форма 262/о - "Журнал обліку аналізів, зроблених в лабораторії".
11. КОНТРОЛЬ ПОХИБКИ ВИМІРЮВАНЬ
11.1. Визначення систематичної похибки вимірювань за даною методикою проводиться методом паралельних проб. Для цього проводять по два паралельних вимірювання 10 проб пацієнтів поточного дня.
11.2. Вимірювання розчинних фібрин-мономерних комплексів проводять відповідно до розділу 9.
11.3. Отримані дані заносять у таблицю 2.
Таблиця 2
------------------------------------------------------------------
| N | Х | Х | Х - Х |( Х - Х ) в степені 2|
| | 1 | 2 | 1 2 | 1 2 |
|---+---------+---------+----------------+-----------------------|
------------------------------------------------------------------
11.4. За отриманими результатами вимірювань розраховується середнє значення показників (п. 10.1), середньоквадратичне відхилення (дельта) та коефіцієнт варіації (V). Результати розрахунків порівнюються з величинами, наведеними в таблиці 1 розділу 2.
11.5. Будують контрольну карту кумулятивних сум.
11.6. Кожного дня різницю між двома паралельними вимірюваннями проб, відмічають на карті. Результати, які попадають за межі контрольних вимірювань (2дельта) вказують на наявність недоліків в системі вимірювання.
11.7. Якщо отримані результати вимірів не задовольняють вимоги розділу 2 та п. 11.6, то виміри необхідно повторити.
11.8. Якщо результати повторного контролю незадовільні, то виконання вимірювань необхідно припинити, виявити та усунути причини, які до цього призвели.
12. ПОСИЛАННЯ НА НОРМАТИВНІ ДОКУМЕНТИ
------------------------------------------------------------------
| Документ | Найменування | N пункту |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 7328-82Е |Меры массы общего назначения | 8.2.1; |
| |и образцовые. Технические | 8.2.2; |
| |условия | 8.2.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 24104-88Е |Весы лабораторные общего | 8.2.1; |
| |назначения и образцовые. | 8.2.2; |
| |Общие технические условия | 8.2.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 28311-89 |Дозаторы медицинские | 8.3; |
| |лабораторные | 9.2 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 25-1819.0021-90 |Секундомір механічний | 9.1; 9.2 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 5-375-4215-77 |Центрифуга ЦЛР-1 | 8.3 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 3-3.741-83 |Лупа складна кругла ЛПК-471 | 8.2.3 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 18481-81 |Спиртометр - ареометр и | 9.1 |
| |цилиндры стеклянные. | |
| |Технические условия | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 13646-68 |Термометр скляний ртутний для | 8.2.1; |
| |точних вимірювань | 8.2.2; |
| | | 8.2.3; |
| | | 8.2.4; |
| | | 9.1; 9.2 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 1770-74 |Посуда мерная лабораторная | 8.3 |
| |стеклянная. Цилиндры, | |
| |мензурки, колбы, пробирки. | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 208 УССР 273-84 |Пробірки поліетиленові | 8.2.1; |
| | | 8.2.2; |
| | | 8.2.3; |
| | | 8.2.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 64-2-407-89 |Банки и флаконы с притертой | 8.2.4 |
| |пробкой | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 6095418 |(бета)-нафтол | 8.2.1; |
| | | 8.2.2; |
| | | 8.2.4; |
| | | 8.2.5 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 6709-79 |Вода дистильована | 8.2.2 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 6-09-4039-75 |6-аміногексанова кислота | 8.2.4 |
| |(є-амінокапронова кислота) | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 22280-76 |Натрій лимоннокислий 5,5 | 8.2.3 |
| |водний | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 5962-67 |Спирт етиловий ректифікований | 8.2.3 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Мінхімпромом СРСР |"Правила техніки безпеки при | 5 |
|від 27.07.77: |експлуатації електроустановок"| |
|НАОП 1.1.10-1.01-85 | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України |"Про подальше удосконалення | 5 |
|від 19.12.97 N 359 |атестації лікарів" | |
|( z0014-98 ) та від | | |
|23.10.91 N 146 | | |
|( v0146282-91 ) | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України від |"Про атестацію середніх | 5 |
|23.10.91 N 146 |медичних працівників" | |
|( v0146282-91 ) | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України |"Про затвердження медичної | 10.2 |
|від 04.01.01 N 1 |облікової документації, що | |
|( v0001282-01 ) |використовується в | |
| |лабораторіях | |
| |лікувально-профілактичних | |
| |закладів" | |
------------------------------------------------------------------
Міністерство охорони здоров'я України
ЗАТВЕРДЖЕНО
Наказ МОЗ України
15.11.2002 N 417
МЕТОДИКА ВИКОНАННЯ ВИМІРЮВАННЯ
АКТИВНОСТІ КОМПЛЕКСУ АНТИТРОМБІНУ III-ГЕПАРИНУ У ПЛАЗМІ КРОВІ ЛЮДИНИ МВВ 42.01-18-2002
ПОГОДЖЕНО
Головний метролог
МОЗ України
А.М.Ніколенко
10.10.2002
ПОГОДЖЕНО
Головний спеціаліст з
клінічної лабораторної
діагностики МОЗ України
В.А.Дєєв
10.10.2002
1. ГАЛУЗЬ ЗАСТОСУВАННЯ
Документ встановлює порядок виконання вимірювання активності антитромбіну III плазми крові людини.
Методика призначена для використання у закладах охорони здоров'я.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА ПОХИБКИ ВИЗНАЧЕННЯ
Методика забезпечує вимірювання активності антитромбіну III за характеристиками, наведеними у таблиці 1.
Таблиця 1
------------------------------------------------------------------
|Діапазон вимірювань, | Межа відносної | Коефіцієнт |
| % | похибки вимірювань, | варіації, V (%)|
| | (дельта, (%) | |
|---------------------+-------------------------+----------------|
| 50 - 120 | +-2,8 | 3 |
------------------------------------------------------------------
3. ЗАСОБИ ВИМІРЮВАЛЬНОЇ ТЕХНІКИ, ДОПОМІЖНЕ ОБЛАДНАННЯ, РЕАКТИВИ ТА МАТЕРІАЛИ
3.1. Ваги 2 кл. точності ГОСТ 24104-88Е
3.2. Важки лабораторні 2 кл. точності ГОСТ 7328-82Е
3.3. Баня водяна лабораторна ТУ 64-1-2850-80
3.4. Дозатори медичні лабораторні ГОСТ 28311-89
3.5. Іономір ЕВ-74 ТУ 25-05.2147-78
3.6. Секундомір механічний ТУ 25-1819.0021-90
3.7. Спектрофотометр СФ-46 ТУ 3-3.1841-84
3.8. Скло збільшувальне (лупа)
3.9. Термометр скляний ртутний для точних вимірювань ГОСТ
13646-68
3.10. Центрифуга ЦЛР-1 ТУ 5-375-4215-77
3.11. Колби мірні місткістю від 100,0 до 1000,0 мл ГОСТ
1770-74
3.12. Палички скляні діаметром 0,3-0,4 мм ГОСТ 20292-74
3.13. Пробірки поліетиленові місткістю (10-15) мл ТУ 208 УССР
273-84
3.14. Пробірки мірні лабораторні місткістю 10 мл ГОСТ 1770-74
3.15. Пробірки скляні діаметром 0,5 см ГОСТ 1770-74
3.16. Флакони із темного скла з притертим корком ТУ
64-2-407-89
3.17. Циліндри ГОСТ 1770-74
3.18. Білогарифмічний папір ТУ 13-0248643-794-89
3.19. Вода дистильована ГОСТ 6709-79
3.20. Натрій 5,5'-диетилбарбітуровокислий ТУ 6-09-2082-78
3.21. Натрій лимоннокислий 5,5 водний ГОСТ 22280-76
3.22. Натрій хлористий ГОСТ 4233-77
3.23. Тромбін ФС 42-2621-89
3.24. Фібриноген ФС 42-1394-80
3.25. Фіксанал соляної кислоти ГОСТ 3118-77
Всі засоби вимірювальної техніки повинні бути повірені у встановленому порядку. Допускається застосування іншого обладнання, лабораторного посуду, а також реактивів і матеріалів з метрологічними та технічними характеристиками не нижчими, ніж наведені.
4. МЕТОД ВИКОНАННЯ ВИМІРЮВАНЬ
Метод визначення активності антитромбіну III плазми крові людини базується на вимірюванні часу утворення згустку фібрину під дією надлишку екзогенного тромбіну.
Одиницею вимірювання номінального значення показника є відсоток, що визначається як відношення часу утворення згустку у стандартній донорській плазмі крові до часу утворення згустку у плазмі крові, що досліджується.
5. ВИМОГИ ТЕХНІКИ БЕЗПЕКИ
При виконанні вимірювань необхідно дотримуватись вимог НАОП 1.3.10-1.06-77 "Загальні правила безпеки роботи в хімічних лабораторіях", затверджених 27.07.77 Мінхімпромом СРСР: НАОП 1.1.10-1.01-85 "Правила техніки безпеки при експлуатації електроустановок", затверджено 10.09.85 Міненерго СРСР та ЦК галузевої профспілки; правил безпеки роботи, що представлені в експлуатаційній документації на засоби вимірювальної техніки та допоміжні пристрої.
6. ВИМОГИ ДО КВАЛІФІКАЦІЇ ВИКОНАВЦЯ
До виконання методики допускаються спеціалісти із спеціальною освітою, які відповідають кваліфікаційним вимогам відповідно до наказів МОЗ України від 19.12.97 N 359, від 23.10.91 N 146, та пройшли курси з клінічної лабораторної діагностики у державних навчальних закладах освіти системи МОЗ України різного рівня акредитації, наукових закладах або таких, що до них прирівняні, і мають право видавати документи державного зразка згідно з чинним законодавством України.
7. УМОВИ ВИКОНАННЯ ВИМІРЮВАНЬ
При проведені вимірювань повинні бути забезпечені наступні умови:
7.1. Температура середовища (22+-5) град. С.
7.2. Відносна вологість від 60% до 75%.
7.3. Атмосферний тиск від 84,0 до 106,7 кПа (від 600,0 до 800,3 мм рт.ст).
7.4. Напруга електромережі (220+-22) В.
7.5. Освітленість від 300 до 400 лк.
8. ПІДГОТОВКА ТА ВИКОНАННЯ ВИМІРЮВАНЬ
8.1. Усі засоби вимірювальної техніки та допоміжне обладнання привести в робочий стан згідно з інструкціями по експлуатації.
8.2. Приготування розчинів.
8.2.1. Приготування буферу Міхаеліса, (рН 7,4+-0,1).
Розчин А. Наважку (20,60+-0,01) г натрію 5,5'-диетилбарбітуровокислого (п. 3.20) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.11), розчиняють у дистильованій воді (п. 3.19) і об'єм розчину доводять до мітки. Розчин зберігається у флаконах з темного скла з притертим корком (п. 3.16) протягом одного місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
Розчин Б. Фіксанал кислоти соляної 0,1 моль/л (п. 3.25) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.11) і об'єм розчину доводять до мітки дистильованою водою (п. 3.19). Розчин зберігається у флаконах з темного скла з притертим корком (п. 3.16) протягом одного місяця при температурі від 4 до 8 град.С.
Розчин В. Наважку (7,30+-0,01) г натрію хлористого (п. 3.22) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.11), відміряють циліндром (п. 3.17) 290 мл розчину А і 210 мл розчину Б, додають в колбу та об'єм доводять до мітки. рН буферу перевіряють на іономірі універсальному (п. 3.5). Буфер зберігають у флаконах з темного скла з притертим корком (п. 3.16) протягом місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
8.2.2. Приготування розчину натрію хлористого з концентрацією 8,5 г/л.
Наважку (8,50+-0,01) г натрію хлористого (п. 3.22) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.11), розчиняють у дистильованій воді (п. 3.19) і доводять об'єм розчину до мітки. Розчин зберігається у флаконах з темного скла з притертим корком (п. 3.16) протягом одного місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
8.2.3. Приготування розчину забуференого фізіологічного, (рН 7,4+-0,1).
Змішують 4 об'єми розчину натрію хлористого (8,5 г/л) (п.8.2.2) з 1 об'ємом буферу Міхаеліса (п. 8.2.1). Зберігати розчин при температурі від 4 до 8 град. С протягом місяця.
8.2.4. Приготування розчину натрію лимоннокислого (3,8 г на 100 г розчину).
Наважку (3,80+-0,01) г натрію лимоннокислого (п. 3.21) розчиняють у 96,2 мл дистильованої води (п. 3.19), яку відміряють циліндром (п. 3.17). Розчин зберігають при температурі від 4 до 6 град. С протягом одного тижня.
8.2.5. Приготування розчину фібриногену з концентрацією 8 мг/мл.
Наважку (40,0+-0,1) мг фібриногену ліофілізованого (п. 3.24) переносять у пробірку мірну лабораторну (п. 3.14), додають дозатором лабораторним (п. 3.4) 2,5 мл дистильованої води (п. 3.19) та розчиняють, підігріваючи на бані водяній (п. 3.3) при температурі 37 град. С (не струшувати!). Розчин фібриногену зберігати при температурі мінус 20 град. С протягом двох тижнів.
8.2.6. Контроль концентрації фібриногену.
Концентрацію розчину фібріногену (С, мг/мл) контролюють на спектрофотометрі (п. 3.7) при довжинах хвиль 280 та 320 нм. Вимірювання проводять у кварцових кюветах з довжиною оптичного шліху 1 см.
Концентрацію розраховують за формулою:
С = (Е - Е ) n/1,5
280 320
де (Е - Е ) - різниця між показниками оптичної густини,
280 320
отриманими при довжинах хвиль 280 та 320 нм, n - ступінь
розведення вихідного розчину білка, 1,5 - коефіцієнт перерахунку.
Виміри концентрації фібриногену проводять двічі і середнє значення розраховується за формулою, наведеною в п. 10.1.
8.2.7. Приготування розчину тромбіну.
Наважку, що відповідає (20,0+0,1) од. активності тромбіну (п.3.23), переносять у пробірку поліетиленову (п. 3.13) та додають дозатором лабораторним (п. 3.4) 1 мл розчину забуференого фізіологічного (п. 8.2.3).
За одиницю активності приймають таку кількість препарату тромбіну, яка здатна за 30 с при температурі 37 град. С згорнути 1 мл стандартної донорської плазми крові.
З метою збереження активності тромбіну, після приготування розчин поміщають у баню водяну крижану (п. 3.3) при температурі град. С, у якій він зберігається протягом виконання вимірювань.
Зберігають розчин при температурі мінус 20 град. С протягом одного місяця.
8.3. Одержання плазми крові.
Кров у хворого беруть натщесерце з вени гострою сухою голкою з широким діаметром, без шприца (для запобігання гемолізу). При заборі крові перші 5-6 крапель відкидають. Під час взяття крові не рекомендується накладати джгут і робити масаж передпліччя для запобігання активації зсідання крові і фібринолізу.
У пробірку поліетиленову (п. 3.13) дозатором лабораторним (п. 3.4) вносять 0,5 мл розчину натрію лимоннокислого (п. 8.2.4) та змішують з 4,5 мл крові (співвідношення 1:9). Пробірку з сумішшю щільно закривають корком і повільними рухами обережно декілька разів перемішують (не струшуючи).
Центрифугують (п. 3.13) протягом 10 хв з прискоренням 1200-1400 g. Плазму крові переносять дозатором лабораторним (п. 3.4) у пробірку поліетиленову (п. 3.13).
Вимоги до зразків плазми крові установлюються у розділах преаналітики посібників з клінічної лабораторної діагностики.
8.4. Одержання стандартної донорської плазми крові.
Для приготування стандартної донорської плазми крові необхідно змішати у рівних співвідношеннях плазму крові більш ніж 7 донорів, отриману, як вказано в п. 8.3, розфасувати по 1-2 мл у пробірки поліетиленові (п. 3.13), заморозити та зберігати протягом двох тижнів при температурі мінус 20 град. С.
Безпосередньо перед виконанням вимірювань плазму крові розморожують у бані водяній лабораторній (п. 3.4) при 37 град. С (до повного відтаювання пробірку не струшувати). Після відтаювання плазма повинна бути абсолютно прозорою.
9. ХІД ВИМІРЮВАННЯ
9.1. 0,5-1,0 мл плазми крові, що досліджується (п. 8.3), поміщають у пробірку скляну діаметром 0,5 см (п. 3.15) та витримують 5 хв на бані водяній (п. 3.3) при температурі 53 град. С при постійному перемішуванні скляною паличкою. Температуру необхідно контролювати термометром (п. 3.9).
9.2. Суміш переносять у центрифужну пробірку (п. 3.14). Денатурований білок осаджують на центрифузі (п. 3.10) з прискоренням 1200-1400 g протягом 10 хв.
9.3. Дозатором лабораторним (п. 3.4) відбирають 0,1 мл отриманої сироватки крові (п. 9.2) та вносять в пробірку поліетиленову (п. 3.13), додають 0,9 мл розчину тромбіну (п. 8.2.7), ставлять у баню водяну (п. 3.3). інкубують при температурі 37 град. С протягом 15 хв. Час інкубації необхідно контролювати секундоміром (п. 3.6).
9.4. Дозатором лабораторним (п. 3.4) відбирають 0,1 мл, отриманої суміші (п. 9.3) та вносять в пробірку мірну лабораторну (п. 3.13), додають 0,1 мл розчину фібриногену (п. 8.2.6), попередньо прогрітого при температурі 37 град. С на бані водяній (п. 3.3) протягом 15-20 с. Секундоміром (п. 3.6) визначають час зсідання суміші "сироватка-фібриноген".
Критерієм закінчення реакції є утворення гелю. З метою фіксації моменту утворення гелю в пробірці за станом суміші рекомендується спостерігати через скло збільшувальне (лупу) (п. 3.8) при боковому освітленні.
9.5. Розраховують активність антитромбіну-III за допомогою градуювального графіку. Антитромбінову активність стандартної донорської плазми крові приймають за 100% (час зсідання її становить, у середньому, 25 с).
Градуювальний графік будують на білогарифмічному папері (п. 3.25), використовуючи розведення стандартної донорської плазми крові (табл. 2). По осі ординат відмічають час зсідання фібриногену (у секундах), по осі абсцис - активність антитромбіну III ( у відсотках).
Таблиця 2
------------------------------------------------------------------
| Стандартна | Розчин натрію | Активність антитромбіну III,|
|донорська плазма| хлористого, мл | % |
| крові, мл | | |
|----------------+-----------------+-----------------------------|
| 0,1 | 0,0 | 100,0 |
|----------------+-----------------+-----------------------------|
| 0,1 | 0,1 | 50,0 |
|----------------+-----------------+-----------------------------|
| 0,1 | 0,3 | 25,0 |
|----------------+-----------------+-----------------------------|
| 0,1 | 0,7 | 12,5 |
------------------------------------------------------------------
10. ОБРОБКА ТА ОФОРМЛЕННЯ РЕЗУЛЬТАТІВ ВИМІРЮВАНЬ
10.1. За результат вимірювання приймають середнє значення
(х , с) двох паралельних вимірювань, яке розраховується за
ср
формулою: х = (х + х )/2,
ср 1 2
де х , х - значення, отримані у двох паралельних вимірюваннях.
1 2
10.2. Результати вимірювань заносяться до облікової медичної документації, затвердженої наказом МОЗ України від 04.01.01 N 1:
- форма 237/о - "Аналіз крові (показники системи згортання)";
- форма 238/о - "Аналіз крові (показники системи згортання - скорочений варіант)";
- форма 250/о - "Журнал реєстрації аналізів і їх результатів";
- форма 262/о - "Журнал обліку аналізів, зроблених в лабораторії".
11. КОНТРОЛЬ ПОХИБКИ ВИМІРЮВАНЬ
11.1. Визначення систематичної похибки вимірювань за даною методикою проводиться методом паралельних проб. Для цього проводять по два паралельних вимірювання 10 проб пацієнтів поточного дня.
11.2. Вимірювання активності антитромбіну III проводять відповідно до розділу 9.
11.3. Отримані дані заносять у таблицю 3.
Таблиця 3
------------------------------------------------------------------
| N | Х | Х | Х - Х |( Х - Х ) в степені 2|
| | 1 | 2 | 1 2 | 1 2 |
|---+---------+---------+----------------+-----------------------|
------------------------------------------------------------------
11.4. За отриманими результатами вимірювань розраховується середнє значення показників (п. 10.1), середньоквадратичне відхилення (дельта) та коефіцієнт варіації (V). Результати розрахунків порівнюються з величинами, наведеними в таблиці 1 розділу 2.
11.5. Будують контрольну карту кумулятивних сум.
11.6. Кожного дня різницю між двома паралельними вимірюваннями проб, відмічають на карті. Результати, які попадають за межі контрольних вимірювань (2дельта) вказують на наявність недоліків в системі вимірювання.
11.7. Якщо отримані результати вимірів не задовольняють вимоги розділу 2 та п. 11.6, то виміри необхідно повторити.
11.8. Якщо результати повторного контролю незадовільні, то виконання вимірювань необхідно припинити, виявити та усунути причини, які до цього призвели.
12. ПОСИЛАННЯ НА НОРМАТИВНІ ДОКУМЕНТИ
------------------------------------------------------------------
| Документ | Найменування | N пункту |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 24104-88Е |Весы лабораторные общего | 8.2.1; |
| |назначения и образцовые. | 8.2.2; |
| |Общие технические условия | 8.2.4; |
| | | 8.2.5; |
| | | 8.2.7 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 64-1-2850-80 |Баня водяна лабораторна | 8.2.5; |
| | | 8.2.7; |
| | | 9.1; 9.3;|
| | | 9.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 28311-89 |Дозаторы медицинские | 8.2.5; |
| |лабораторные | 8.2.7; |
| | | 8.3; 8.4;|
| | | 9.3; 9.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 5.375-4215-77 |Центрифуга ЦЛР-1 | 8.3; 8.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 25-05.2147-78 |Іономір універсальний ЕВ-74 | 8.2.1 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 13646-68 |Термометры стеклянные ртутные | 8.2.5; |
| |для точных измерений | 9.1; 9.3;|
| | | 9.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 25-1819.0021-90 |Секундомір механічний | 9.3; 9.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 3-3.1841-84 |Спектрофотомед СФ-46 | 8.2.6 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 64-2-407-89 |Банки и флаконы с притертой | 8.2.1; |
| |пробкой | 8.2.2; |
| | | 8.2.3 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 208 УССР 273-84 |Пробірки поліетиленові | 8.2.7; |
| | | 8.3; 8.4;|
| | | 9.3 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 1770-74 |Посуда мерная лабораторная | 8.2.1; |
| |стеклянная. Цилиндры, | 8.2.2; |
| |мензурки, колбы, пробирки. | 8.2.4; |
| |Технические условия | 8.2.5; |
| | | 9.1; 9.2;|
| | | 9.3 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 6709-79 |Вода дистильована | 8.2.1; |
| | | 8.2.2; |
| | | 8.2.4; |
| | | 8.2.5 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 6-09-2082-78 |Натрій 5,5'- | 8.2.1 |
| |диетилбарбітуровокислий | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 4233-77 |Натрій хлористий | 8.2.1; |
| | | 8.2.2 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 22280-76 |Натрій лимоннокислій 5,5 | 8.2.4 |
| |водний | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ФС 42-2621-89 |Тромбін | 8.2.7 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ФС 42-1394-80 |Фібриноген | 8.2.5 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 3118-77 |Фіксонал соляної кислоти | 8.2.1 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 13-0248643-794-89 |Билогарифмическая бумага | 9.5 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Мінхімпромом СРСР |"Правила техніки безпеки при | 5 |
|від 27.07.77: |експлуатації електроустановок"| |
|НАОП 1.1.10-1.01-85 | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України |"Про подальше удосконалення | 5 |
|від 19.12.97 N 359 |атестації лікарів" | |
|( z0014-98 ) | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України |"Про атестацію середніх | 5 |
|від 23.10.91 N 146 |медичних працівників" | |
|( v0146282-91 ) | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України |"Про затвердження медичної | 10.2 |
|від 04.01.01 N 1 |облікової документації, що | |
|( v0001282-01 ) |використовується в | |
| |лабораторіях | |
| |лікувально-профілактичних | |
| |закладів" | |
------------------------------------------------------------------
Міністерство охорони здоров'я України
ЗАТВЕРДЖЕНО
Наказ МОЗ України
15.11.2002 N 417
МЕТОДИКА ВИКОНАННЯ
ВИМІРЮВАННЯ ФІБРИНОЛІТИЧНОЇ АКТИВНОСТІ ПЛАЗМИ КРОВІ ЛЮДИНИ МЕТОДОМ ВИМІРЮВАННЯ ЧАСУ ЛІЗИСУ ЕУГЛОБУЛІНОВИХ СГУСТКІВ МВВ 42.01-19-2002
ПОГОДЖЕНО
Головний метролог
МОЗ України
А.М.Ніколенко
10.10.2002
ПОГОДЖЕНО
Головний спеціаліст з
клінічної лабораторної
діагностики МОЗ України
В.А.Дєєв
10.10.2002
1. ГАЛУЗЬ ЗАСТОСУВАННЯ
Документ встановлює методику виконання визначення фібринолітичної активності плазми крові за рахунок вимірювання часу лізису еуглобулінових згустків.
Методика призначена для використання у закладах охорони здоров'я.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА ПОХИБКИ ВИЗНАЧЕННЯ
Методика забезпечує вимірювання часу лізису еуглобулінових згустків в тесті за характеристиками, наведеними у таблиці 1.
Таблиця 1
------------------------------------------------------------------
|Діапазон вимірювань, | Середньоквадратичне | Коефіцієнт |
| хв |відхилення, дельта (хв) | варіації, V (%)|
| | | |
|---------------------+-------------------------+----------------|
| 60-300 | +-23 | 19 |
------------------------------------------------------------------
3. ЗАСОБИ ВИМІРЮВАЛЬНОЇ ТЕХНІКИ, ДОПОМІЖНЕ ОБЛАДНАННЯ, РЕАКТИВИ І МАТЕРІАЛИ
3.1. Ваги 2 кл. точності ГОСТ 24104-88Е
3.2. Важки лабораторні 2 кл. точності ГОСТ 7328-82Е
3.3. Водяна баня лабораторнаТУ 64-1-2850-80
3.4. Дозатори медичні лабораторні ГОСТ 28311-89
3.5. Іономір ЕВ-74 ТУ 25-05. 2147-78
3.6. Секундомір механічний ТУ 25-1819.0021-90
3.7. Термометр скляний ртутний для точних вимірювань ГОСТ
13646-68
3.8. Центрифуга ЦЛР-1 ТУ 5.375-4215-77
3.9. Колби мірні місткістю від 100,0 мл до 1000.0 мл ГОСТ
1770-74
3.10. Палички скляні діаметром 0,3-0,4 мм ГОСТ 20292-74
3.11. Пробірки мірні лабораторні місткістю 10 мл ТУ
98-891-021-91Е
3.12. Пробірки поліетиленові місткістю (10-15) мл. ТУ 208
УССР 273-84
3.13. Флакони з притертим корком ТУ 64-2-407-89
3.14. Циліндр на 100 мл ГОСТ 1770-74
3.15. Папір індикаторний ТУ 6-09-1181-89
3.16. Папір фільтрувальний ГОСТ 12026-76
3.17. Вода дистильована ГОСТ 6709-79
3.18. Кальцій хлористий ГОСТ 4161-77
3.19. Кислота оцтова ГОСТ 61-75
3.20. Натрій 5,5'-диетилбарбітуровокислий (медінал) ТУ
6-09-2082-78
3.21. Натрій лимоннокислий 5,5 водний ГОСТ 22280-76
3.22. Натрій тетраборнокислий ГОСТ 4199-76
3.23. Натрій хлористий ГОСТ 4233-77
3.24. Фіксанал кислоти соляної ГОСТ 3118-77
Всі засоби вимірювальної техніки повинні бути атестовані та повірені у встановленому порядку. Допускається застосування іншого обладнання, лабораторного посуду, а також реактивів і матеріалів з метрологічними та технічними характеристиками не нижчими, ніж наведені.
4. МЕТОД ВИЗНАЧЕННЯ
Метод визначення загальної фібринолітичної активності плазми крові базується на вимірюванні часу спонтанного лізісу згустку, який отримано при додаванні до еуглобулінової фракції плазми крові розчину кальцію хлористого.
5. ВИМОГИ ТЕХНІКИ БЕЗПЕКИ
При виконанні вимірювань необхідно дотримуватись вимог НАОП 1.3.10-1.06-77 "Загальні правила безпеки роботи в хімічних лабораторіях", затверджених 27.07.77 Мінхімпромом СРСР: НАОП 1.1.10-1.01-85 "Правила техніки безпеки при експлуатації електроустановок", затверджено 10.09.85 Міненерго СРСР та ЦК галузевої профспілки; правил безпеки роботи, що представлені в експлуатаційній документації на засоби вимірювальної техніки та допоміжні пристрої.
6. ВИМОГИ ДО КВАЛІФІКАЦІЇ ВИКОНАВЦЯ
До виконання методики допускаються спеціалісти із спеціальною освітою, які відповідають кваліфікаційним вимогам відповідно до наказів МОЗ України від 19.12.97 N 359, від 23.10.91 N 146, та пройшли курси з клінічної лабораторної діагностики у державних навчальних закладах освіти системи МОЗ України різного рівня акредитації, наукових закладах або таких, що до них прирівняні, і мають право видавати документи державного зразка згідно з чинним законодавством України.
7. УМОВИ ВИКОНАННЯ ВИМІРЮВАНЬ
При проведені вимірювань повинні бути забезпечені наступні умови:
7.1. Температура середовища (22+-5) град. С.
7.2. Відносна вологість від 60% до 75%.
7.3. Атмосферний тиск від 84,0 до 106,7 кПа (від 600,0 до 800,3 мм рт.ст).
7.4. Напруга електромережі (220+-22) В.
7.5. Освітленість від 300 до 400 лк.
8. ПІДГОТОВКА ДО ВИЗНАЧЕННЯ
8.1. Усі прилади, засоби вимірювальної техніки та допоміжне обладнання привести у робочий стан згідно з інструкціями по експлуатації.
8.2. Приготування розчинів
8.2.1. Приготування буферу Міхаеліса (рН 7,35+-0,05).
Розчин А. Наважку (20,60+-0,01) г натрію 5,5'-диетилбарбітуровокислого (п. 3.20) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.9), розчиняють у дистильованій воді (п. 3.17) і об'єм розчину доводять до мітки. Розчин зберігається у флаконах з темного скла з притертим корком (п. 3.13) протягом одного місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
Розчин Б. Фіксанал кислоти соляної 0,1 моль/л (п. 3.24) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.9) і об'єм розчину доводять до мітки дистильованою водою (п. 3.17). Розчин зберігається у флаконах з темного скла з притертим корком (п. 3.13) протягом одного місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
Розчин В. Наважку (7,30+-0,01) г натрію хлористого (п. 3.23) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.9), відміряють циліндром (п. 3.14) 290 мл розчину А і 210 мл розчину Б, додають в колбу та об'єм доводять до мітки. рН буферу перевіряють на іономірі універсальному (п. 3.5). Буфер зберігають у флаконах з темного скла з притертим корком (п. 3.13) протягом місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
8.2.2. Приготування розчину натрію хлористого з концентрацією 8,5 г/л .
Наважку (8,50+-0,01) г натрію хлористого (п. 3.22) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.9), розчиняють у дистильованій воді (п. 3.17) і доводять об'єм розчину до мітки. Розчин зберігають у флаконах з темного скла з притертим корком (п. 3.13) протягом одного місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
8.2.3. Приготування розчину забуференого фізіологічного, (рН 7,4+-0,1).
Змішують 4 об'єми розчину натрію хлористого (8,5 г/л) (п. 8.2.2) з 1 об'ємом буферу Міхаеліса (п. 8.2.1). Розчин зберігають при температурі від 4 до 8 град. С протягом місяця.
8.2.4. Приготування розчину лимоннокислого натрію (3,8 г на 100 г розчину).
Наважку (3,80+-0,01) г натрію лимоннокислого 5,5 водного (п. 3.21) розчиняють у 96,2 мл дистильованої води (п. 3.17), яку відміряють циліндром (п. 3.14). Розчин зберігають при температурі від 4 до 6 град. С протягом одного тижня.
8.2.5. Приготування розчину кальцію хлористого 0,025 моль/л.
Наважку (2,77+-0,01) г кальція хлористого обезвожуваного (п. 3.18) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.9) та розчиняють у дистильованій воді (п. 3.17), об'єм розчину доводять до мітки. Розчин зберігають у флаконах темного скла з притертим корком (п. 3.13) при температурі від 4 до 6 град. С протягом місяця.