|ГОСТ 22280-76 |Натрій лимоннокислій 5,5 | 8.2.4 |
| |водний | |
|----------------------+------------------------------+----------|
| |Натрій гідроцитат | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Мінхімпромом СРСР |"Правила техніки безпеки при | 5 |
|від 27.07.77: |експлуатації електроустановок"| |
|НАОП 1.1.10-1.01-85 | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України |"Про подальше удосконалення | 5 |
|від 19.12.97 N 359 |атестації лікарів" | |
|( z0014-98 ) | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України |"Про атестацію середніх | 5 |
|від 23.10.91 N 146 |медичних працівників" | |
|( v0146282-91 ) | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України |"Про затвердження медичної | 10.2 |
|від 04.01.01 N 1 |облікової документації, що | |
|( v0001282-01 ) |використовується в | |
| |лабораторіях | |
| |лікувально-профілактичних | |
| |закладів" | |
------------------------------------------------------------------
Міністерство охорони здоров'я України
ЗАТВЕРДЖЕНО
Наказ МОЗ України
15.11.2002 N 417
МЕТОДИКА ВИКОНАННЯ
ВИМІРЮВАННЯ ЧАСУ ЗСІДАННЯ ПЛАЗМИ КРОВІ ЛЮДИНИ В ТЕСТІ РЕПТИЛАЗНИЙ ЧАС МВВ 42.01-21-2002
ПОГОДЖЕНО
Головний метролог
МОЗ України
А.М.Ніколенко
10.10.2002
ПОГОДЖЕНО
Головний спеціаліст з
клінічної лабораторної
діагностики МОЗ України
В.А.Дєєв
10.10.2002
1. ГАЛУЗЬ ЗАСТОСУВАННЯ
Документ встановлює методику виконання вимірювання часу зсідання плазми крові в тесті рептилазний (РЧ). Визначення РЧ може виконуватися при використанні розчину тромбіноподібного ферменту з стандартною активністю.
Методика призначена для використання у закладах охорони здоров'я.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА ПОХИБКИ ВИЗНАЧЕННЯ
Методика забезпечує вимірювання часу зсідання плазми крові в тесті рептилазний час (РЧ) за характеристиками, наведеними у таблиці 1.
Таблиця 1
------------------------------------------------------------------
|Діапазон вимірювань, | Середньоквадратичне | Коефіцієнт |
| с |відхилення, дельта (с) | варіації, V (%)|
| | | |
|---------------------+-------------------------+----------------|
| 9-20 | +-1,5 | 4 |
------------------------------------------------------------------
3. ЗАСОБИ ВИМІРЮВАЛЬНОЇ ТЕХНІКИ, ДОПОМІЖНЕ ОБЛАДНАННЯ, РЕАКТИВИ І МАТЕРІАЛИ
3.1. Ваги 2 кл. точності ГОСТ 24104-88Е
3.2. Важки лабораторні 2 кл. точності ГОСТ 7328-82Е
3.3. Баня водяна лабораторна ТУ 64-1-2850-80
3.4. Дозатори медичні лабораторні ГОСТ 28311-89
3.5. Іономір ЕВ-74 ТУ 25-05.2147-78
3.6. Секундомір механічний ТУ 25-1819.0021-90
3.7. Термометр скляний ртутний для точних вимірювань ГОСТ
13646-68
3.8. Центрифуга ЦЛР-1 ТУ 5.375-4215-77
3.9. Колби мірні місткістю від 100,0 до 1000.0 мл ГОСТ
1770-74
3.10. Пробірки мірні лабораторні місткістю 10 мл ТУ
98-891-021-91Е
3.11. Пробірки поліетиленові місткістю (10-15) мл ТУ 208 УССР
273-84
3.12. Флакони з притертим корком ТУ 64-2-407-89
3.13. Циліндри ГОСТ 1770-74
3.14. Вода дистильована ГОСТ 6709-79
3.15. Натрій 5,5'-диетилбарбітуровокислий (медінал) ТУ
6-09-2082-78
3.16. Натрій лимоннокислий 5,5 водний ГОСТ 22280-76
3.17. Натрій хлористий ГОСТ 4233-773
3.18. Рептилаза (Rentahparm, Швейцарія)
3.19. Фіксанал кислоти соляної ГОСТ 3118-77
Всі засоби вимірювальної техніки повинні бути повірені у встановленому порядку. Допускається застосування іншого обладнання, лабораторного посуду, а також реактивів і матеріалів з метрологічними та технічними характеристиками не нижчими, ніж наведені.
4. МЕТОД ВИЗНАЧЕННЯ
Метод базується на визначенні часу зсідання плазми крові при додаванні розчину тромбіноподібного ферменту - рептилази, який має стандартну активність. Рептилазний час не подовжується при введенні гепарину.
5. ВИМОГИ ТЕХНІКИ БЕЗПЕКИ
При виконанні вимірювань необхідно дотримуватись вимог НАОП 1.3.10-1.06-77 "Загальні правила безпеки роботи в хімічних лабораторіях", затверджених 27.07.77 Мінхімпромом СРСР: НАОП 1.1.10-1.01-85 "Правила техніки безпеки при експлуатації електроустановок", затверджено 10.09.85 Міненерго СРСР та ЦК галузевої профспілки; правил безпеки роботи, що представлені в експлуатаційній документації на засоби вимірювальної техніки та допоміжні пристрої.
6. ВИМОГИ ДО КВАЛІФІКАЦІЇ ВИКОНАВЦЯ
До виконання методики допускаються спеціалісти із спеціальною освітою, які відповідають кваліфікаційним вимогам відповідно до наказів МОЗ України від 19.12.97 N 359, від 23.10.91 N 146, та пройшли курси з клінічної лабораторної діагностики у державних навчальних закладах освіти системи МОЗ України різного рівня акредитації, наукових закладах або таких, що до них прирівняні, і мають право видавати документи державного зразка згідно з чинним законодавством України.
7. УМОВИ ВИКОНАННЯ ВИМІРЮВАНЬ
При проведені вимірювань повинні бути забезпечені наступні умови:
7.1. Температура середовища (22+-5) град. С.
7.2. Відносна вологість від 60% до 75%.
7.3. Атмосферний тиск від 84,0 до 106,7 кПа (від 600,0 до 800,3 мм рт.ст).
7.4. Напруга електромережі (220+-22) В.
7.5. Освітленість від 300 до 400 лк.
8. ПІДГОТОВКА ДО ВИЗНАЧЕННЯ
8.1. Усі прилади, засоби вимірювальної техніки та допоміжне обладнання привести у робочий стан згідно з інструкціями по експлуатації.
8.2. Приготування розчинів
8.2.1. Приготування буферу Міхаеліса (рН 7,35+-0,05).
Розчин А. Наважку (20,60+-0,01) г натрію 5,5'-диетилбарбітуровокислого (п. 3.15) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.9), розчиняють у дистильованій воді (п.3.14) і об'єм розчину доводять до мітки. Розчин зберігається у флаконах з темного скла з притертим корком (п. 3.12) протягом одного місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
Розчин Б. Фіксанал кислоти соляної 0,1 моль/л (п. 3.19) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.9) і об'єм розчину доводять до мітки дистильованою водою (п. 3.14). Розчин зберігається у флаконах з темного скла з притертим корком (п.3.12) протягом одного місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
Розчин В. Наважку (7,30+-0,001) г натрію хлористого (п. 3.17) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.9), відміряють циліндром (п. 3.13) 290 мл розчину А і 210 мл розчину Б, додають в колбу та об'єм доводять до мітки. рН буферу перевіряють на іонометрі універсальному (п. 3.5). Буфер зберігають у флаконах з темного скла з притертим корком (п. 3.12) протягом місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
8.2.2. Приготування розчину фізіологічного з концентрацією натрію хлористого 8,5 г/л.
Наважку (8,50+-0,01) г натрію хлористого (п. 3.17) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.9), розчиняють у дистильованій воді (п. 3.14) і доводять об'єм розчину до мітки. Розчин зберігається у флаконах з темного скла з притертим корком (п. 3.12) протягом одного місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
8.2.3. Приготування розчину забуференого фізіологічного (рН 7,4+-0,1).
Змішують 4 об'єми розчину натрію хлористого (8,5 г/л) (п. 8.2.2) з 1 об'ємом буферу Міхаеліса (п. 8.2.1). Зберігати розчин при температурі від 4 до 8 град. С протягом місяця.
8.2.4. Приготування розчину лимоннокислого натрію (3,8 г на 100 г розчину).
Наважку (3,80+-0,01) г натрію лимоннокислого (п. 3.16) розчиняють у 96,2 мл дистильованої води (п. 3.14), яку відміряють циліндром (п. 3.13). Розчин зберігають при температурі від 4 до 6 град. С протягом одного тижня.
8.2.5. Приготування розчину рептилази.
Приготування розчину рептилази (п. 3.18) проводять відповідно до інструкції фірми, яка випускає препарат. Час зсідання контрольної плазми крові в тесті за 14-15 с.
8.3. Одержання плазми крові.
Кров у хворого беруть натщесерце з вени гострою сухою голкою з широким діаметром, без шприца (для запобігання гемолізу). При заборі крові перші 5-6 крапель відкидають. Під час взяття крові не рекомендується накладати джгут і робити масаж передпліччя для запобігання активації зсідання крові і фібринолізу.
У пробірку поліетиленову (п. 3.11) дозатором лабораторним (п. 3.4) вносять 0,5 мл розчину натрію лимоннокислого (п. 8.2.4) та змішують з 4,5 мл крові (співвідношення 1:9). Пробірку з сумішшю щільно закривають корком і повільними рухами обережно декілька разів перемішують (не струшуючи).
Центрифугують (п. 3.8) протягом 10 хв з прискоренням 1200-1400 g. Плазму крові переносять дозатором лабораторним (п. 3.4) у пробірку поліетиленову (п. 3.11).
Вимоги до зразків плазми крові установлюються у розділах преаналітики посібників з клінічної лабораторної діагностики.
8.4. Одержання стандартної донорської плазми крові.
Для приготування стандартної донорської плазми крові необхідно змішати у рівних співвідношеннях плазму крові більш ніж 7 донорів, отриману, як вказано в п.8.4, розфасувати по 1-2 мл у пробірки поліетиленові (п. 3.11), заморозити та зберігати протягом двох тижнів при температурі мінус 20 град. С.
9. ХІД ВИЗНАЧЕННЯ
9.1. В пробірку мірну лабораторну (п. 3.10) дозатором лабораторним (п. 3.4) вносять 0,1 мл плазми, що досліджується (п. 8.3), 0,1 мл забуференого фізіологічного розчину (п. 8.2.3) і поміщають пробірку у баню водяну лабораторну (п. 3.3) при температурі 37 град. С.
9.2. Через 10-15 с додають 0,1 мл розчину рептилази (п.8.2.5) та включають секундомір (п. 3.6). Пробірки з реагентами через кожні 1-2 с нахиляють на 45 градусів і визначають час утворення згустку, який є критерієм закінчення реакції.
Час зсідання стандартної донорської плазми крові складає 13-15 с. Рептилазний час вважають подовженим, якщо порівняно з нормою він збільшується більше, ніж на 5 с.
10. ОБРОБКА ТА ОФОРМЛЕННЯ РЕЗУЛЬТАТІВ ВИМІРЮВАНЬ
10.1. За результат вимірювання приймають середнє значення
(х ,c) двох паралельних вимірювань, яке розраховується за
ср
формулою: х = (х + х )/2,
ср 1 2
де х , х - значення, отримані у двох паралельних вимірюваннях.
1 2
10.2. Результати вимірювань заносяться до облікової медичної документації, затвердженої наказом МОЗ України від 04.01.01 N 1:
- форма 237/о - "Аналіз крові (показники системи згортання)";
- форма 238/о - "Аналіз крові (показники системи згортання - скорочений варіант)";
- форма 250/о - "Журнал реєстрації аналізів і їх результатів";
- форма 262/о - "Журнал обліку аналізів, зроблених в лабораторії".
11. КОНТРОЛЬ ПОХИБКИ ВИМІРЮВАНЬ
11.1. Визначення систематичної похибки вимірювань за даною методикою про водиться методом паралельних проб. Для цього проводять по два паралельних вимірювання 10 проб пацієнтів поточного дня.
11.2. Вимірювання часу зсідання плазми крові в тесті рептилазний час проводять відповідно до розділу 9.
11.3. Отримані дані заносять у таблицю 2.
Таблиця 2
------------------------------------------------------------------
| N | Х | Х | Х - Х |( Х - Х ) в степені 2|
| | 1 | 2 | 1 2 | 1 2 |
|---+---------+---------+----------------+-----------------------|
------------------------------------------------------------------
11.4. За отриманими результатами вимірювань розраховується середнє значення показників (п.10.1), середньоквадратичне відхилення (дельта) та коефіцієнт варіації (V). Результати розрахунків порівнюються з величинами, наведеними в таблиці 1 розділу 2.
11.5. Будують контрольну карту кумулятивних сум.
11.6. Кожного дня різницю між двома паралельними вимірюваннями проб, відмічають на карті. Результати, які попадають за межі контрольних вимірювань (2дельта) вказують на наявність недоліків в системі вимірювання.
11.7. Якщо отримані результати вимірів не задовольняють вимоги розділу 2 та п. 11.6, то виміри необхідно повторити.
11.8. Якщо результати повторного контролю незадовільні, то виконання вимірювань необхідно припинити, виявити та усунути причини, які до цього призвели.
12. ПОСИЛАННЯ НА НОРМАТИВНІ ДОКУМЕНТИ
------------------------------------------------------------------
| Документ | Найменування | N пункту |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 7328-82Е |Меры массы общего назначения и| 8.2.1; |
| |образцовые. | 8.2.2; |
| |Технические условия | 8.2.3; |
| | | 8.2.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 24104-88Е |Весы лабораторные общего | 8.2.1; |
| |назначения и образцовые. | 8.2.2; |
| |Общие технические условия | 8.2.3; |
| | | 8.2.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 64-1-2850-80 |Баня водяна лабораторна | 9.1; 9.2 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 28311-89 |Дозаторы медицинские | 8.2.5; |
| |лабораторные | 8.3; 8.4;|
| | | 9.1; 9.2 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 5-375-4215-77 |Центрифуга ЦЛР-1 | 8.3; 8.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 25-05.2147-78 |Іономір універсальний ЕВ-74 | 8.2.1 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 13646-68 |Термометры стеклянные ртутные | 9.1; 9.2 |
| |для точных измерений | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 25-1819.0021-90 |Секундомір механічний "Слава" | 9.1; 9.2 |
| |с ДСПР 1-2-000. Технічні умови| |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 64-2-407-89 |Банки и флаконы с притертой | 8.2.1; |
| |пробкой | 8.2.2; |
| | | 8.2.3; |
| | | 8.2.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 208 УССР 273-84 |Пробірки поліетиленові | 8.2.5; |
| | | 8.3; 8.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 1770-74 |Посуда мерная лабораторная | 8.2.1; |
| |стеклянная. Цилиндры, | 8.2.2; |
| |мензурки, колбы, пробирки. | 8.2.3; |
| |Технические условия | 8.2.4; |
| | | 8.2.5; |
| | | 9.1; 9.2 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 6709-79 |Вода дистильована. | 8.2.1; |
| |Технічні умови | 8.2.2; |
| | | 8.2.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 6-09-2082-78 |Натрій 5,5'- | 8.2.1 |
| |диетилбарбітуровокислий | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 4233-77 |Натрій хлористий | 8.2.1; |
| | | 8.2.2 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 22280-76 |Натрій лимоннокислій 5,5 | 8.2.4 |
| |водний | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Pentahparm, Швейцарія |Рептилаза | 8.2.5 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 3118-77 |Фіксонал соляної кислоти | 8.2.1 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України |"Про подальше удосконалення | 5 |
|від 19.12.97 N 359 |атестації лікарів" | |
|( z0014-98 ) | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Мінхімпромом СРСР |"Правила техніки безпеки при | 5 |
|від 27.07.77: |експлуатації електроустановок"| |
|НАОП 1.1.10-1.01-85 | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України |"Про атестацію середніх | 5 |
|від 23.10.91 N 146 |медичних працівників" | |
|( v0146282-91 ) | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України |"Про затвердження медичної | 10.2 |
|від 04.01.01 N 1 |облікової документації, що | |
|( v0001282-01 ) |використовується в | |
| |лабораторіях | |
| |лікувально-профілактичних | |
| |закладів" | |
------------------------------------------------------------------
Міністерство охорони здоров'я України
ЗАТВЕРДЖЕНО
Наказ МОЗ України
15.11.2002 N 417
МЕТОДИКА ВИКОНАННЯ
ВИМІРЮВАННЯ АКТИВНОСТІ ПЛАЗМІНУ ПЛАЗМИ КРОВІ ЛЮДИНИ МВВ 42.01-22-2002
ПОГОДЖЕНО
Головний метролог
МОЗ України
А.М.Ніколенко
10.10.2002
ПОГОДЖЕНО
Головний спеціаліст з
клінічної лабораторної
діагностики МОЗ України
В.А.Дєєв
10.10.2002
1. ГАЛУЗЬ ЗАСТОСУВАННЯ
Документ встановлює порядок виконання вимірювання рівню активності плазміну в плазмі крові.
Методика призначена для використання у закладах охорони здоров'я.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА ПОХИБКИ ВИЗНАЧЕННЯ
Методика забезпечує вимірювання рівню активності плазміну в плазмі крові за характеристиками, наведеними у таблиці 1.
Таблиця 1
------------------------------------------------------------------
|Діапазон вимірювань, | Середньоквадратичне | Коефіцієнт |
| % |відхилення, дельта (%) | варіації, V (%)|
| | | |
|---------------------+-------------------------+----------------|
| 40-130 | +-3 | 6 |
------------------------------------------------------------------
3. ЗАСОБИ ВИМІРЮВАЛЬНОЇ ТЕХНІКИ, ДОПОМІЖНЕ ОБЛАДНАННЯ, РЕАКТИВИ І МАТЕРІАЛИ
3.1. Ваги 2 кл. точності ГОСТ 24104-88Е
3.2. Важки лабораторні 2 кл. точності ГОСТ 7328-82Е
3.3. Баня водяна лабораторна ТУ 64-1-2850-80
3.4. Дозатори медичні лабораторні ГОСТ 28311-89
3.5. Іономір ЕВ-74 ТУ 25-05.2147-78
3.6. Мішалка магнітна ММ-5М ТУ 25-7415.0006-90
3.7. Секундомір механічний ТУ 25-1819.0021-90
3.8. Спектрофотометр СФ-46 ТУ 3-3 1841-84
3.9. Термометр скляний ртутний для точних вимірювань ГОСТ
13646-68
3.10. Фотоелектрокалориметр ФЕК-М -2 ТУ 3-3 1766-82
3.11. Центрифуга ЦЛР-1 ТУ 5.375-4215-77
3.12. Шприц ТУ 64-1-3776-83
3.13. Колби мірні місткістю від 100,0 до 1000.0 мл ГОСТ
1770-74
3.14. Пробірки мірні лабораторні місткістю 10 мл ТУ
98-891-021-91Е
3.15. Пробірки поліетиленові місткістю (10-15) мл ТУ 208 УССР
273-84
3.16. Стакани скляні лабораторні ГОСТ 1770-74
3.17. Флакони з притертим корком ТУ 64-2-407-89
3.18. Циліндри ГОСТ 1770-74
3.19. Вата ГОСТ 5556-81
3.20. Азофібрин (суспензія)
3.21. Вода дистильована ГОСТ 6709-793.15
3.22. Натрій їдкий ГОСТ 11078-78
3.23. Натрій гідрофосфорнокислий ГОСТ 4172-76
3.24. Натрій дигідрофосфорнокислий ГОСТ 245-76
3.25. Натрій лимонокислий 5,5 водний ГОСТ 22280-76
3.26. Натрій хлористий ГОСТ 4233-77
3.27. Стрептокіназа У N 4810133002408 Б-1ЛС 96/42/150
(Мінськ, Білорусія)
Всі засоби вимірювальної техніки повинні бути атестовані та повірені у встановленому порядку. Допускається застосування іншого обладнання, лабораторного посуду, а також реактивів і матеріалів з метрологічними та технічними характеристиками не нижчими, ніж наведені.
4. МЕТОД ВИЗНАЧЕННЯ
Метод визначення фібринолітичної активності плазми крові базується на визначенні ступеню розщеплення азофібрину плазміном, що присутній в плазмі крові (або плазміногеном, який активовано стрептокіназою).
Вміст плазміну визначається по розщепленню азофібрину до активації плазми крові стрептокіназою.
Вміст плазміногену визначається за різницею між фібринолітичною активністю плазми крові після активації та до активації стрептокіназою.
5. ВИМОГИ ТЕХНІКИ БЕЗПЕКИ
При виконанні вимірювань необхідно дотримуватись вимог НАОП 1.3.10-1.06-77 "Загальні правила безпеки роботи в хімічних лабораторіях", затверджених 27.07.77 Мінхімпромом СРСР: НАОП 1.1.10-1.01-85 "Правила техніки безпеки при експлуатації електроустановок", затверджено 10.09.85 Міненерго СРСР та ЦК галузевої профспілки; правил безпеки роботи, що представлені в експлуатаційній документації на засоби вимірювальної техніки та допоміжні пристрої.
6. ВИМОГИ ДО КВАЛІФІКАЦІЇ ВИКОНАВЦЯ
До виконання методики допускаються спеціалісти із спеціальною освітою, які відповідають кваліфікаційним вимогам відповідно до наказів МОЗ України від 19.12.97 N 359, від 23.10.91 N 146, та пройшли курси з клінічної лабораторної діагностики у державних навчальних закладах освіти системи МОЗ України різного рівня акредитації, наукових закладах або таких, що до них прирівняні, і мають право видавати документи державного зразка згідно з чинним законодавством України.
7. УМОВИ ВИКОНАННЯ ВИМІРЮВАНЬ
При проведені вимірювань повинні бути забезпечені наступні умови:
7.1. Температура середовища (22+-5) град. С.
7.2. Відносна вологість від 60% до 75%.
7.3. Атмосферний тиск від 84,0 до 106,7 кПа (від 600,0 до 800,3 мм рт.ст).
7.4. Напруга електромережі (220+-22) В.
7.5 Освітленість від 300 до 400 лк.
8. ПІДГОТОВКА ДО ВИЗНАЧЕННЯ
8.1. Усі прилади, засоби вимірювальної техніки та допоміжне обладнання привести у робочий стан згідно з інструкціями по експлуатації.
8.2. Приготування розчинів.
8.2.1. Приготування 5 М розчину натру їдкого
Наважку (10,00+-0,01) г натру їдкого (п. 3.22) розчиняють в стакані в 30-40 мл дистильованої води (п. 3.21), залишають при кімнатній температурі до повного охолодження. Переносять у мірну колбу місткістю 50,0 мл (п. 3.13), доводять дистильованою водою (п. 3.21) до мітки. Розчин зберігають у флаконах темного скла (п. 3.17) протягом 3-4 тижнів.
8.2.2. Приготування 0,05 М натрій-фосфатного буферу, що містить 0,15 г/л натрію хлориду рН (7,4+-0,05).
Розчин А. Наважку (3,56+-0,01) г натру гідрофосфорнокислого (п. 3.23) переносять в мірну колбу об'ємом 100,0 мл (п. 3.13) та розчиняють в дистильованій воді (п. 3.21), об'єм доводять до мітки. Розчин зберігають у флаконах темного скла (п. 3.17) протягом 3-4 тижнів.
Розчин В. Наважку (3,12+-0,01) г натру дигідрофосфорнокислого (п. 3.24) переносять в мірну колбу об'ємом 100,0 мл (п. 3.13) та розчиняють в дистильованій воді (п. 3.21), об'єм доводять до мітки. Розчин зберігають у флаконах темного скла (п. 3.17) протягом 3-4 тижнів.
Розчин С. 81,0 мл розчину А та 19,0 мл розчину В змішують у стакані (п. 3.16), додають наважку натрію хлористого (3,50+-0,01) г. Суміш переносять в циліндр (п. 3.18) об'ємом 500,0 мл. Об'єм буферу доводять до 400 мл дистильованою водою (п. 3.21). На іономірі (п. 3.5) контролюють рН розчину. Розчин зберігати при температурі від 4 до 6 град. С протягом одного місяця у флаконах темного скла з притертим корком (п. 3.17).
8.2.3. Приготування розчину стрептокінази 10000 МО/мл.
Стрептокіназу (п. 3.27) розчиняють у дистильованій воді з урахуванням активності препарату.
8.2.4. Приготування розчину натрію лимоннокислого (3,8 г на 100 г розчину).
Наважку (3,80+-0,01) г натрію лимоннокислого (п. 3.26) розчиняють у 96,2 мл дистильованої води (п. 3.21), яку відміряють циліндром (п. 3.18). Розчин зберігають при температурі від 4 до 6 град. С протягом одного тижня.
8.3. Одержання плазми крові.
Кров у хворого беруть натщесерце з вени гострою сухою голкою з широким діаметром, без шприца (для запобігання гемолізу). При заборі крові перші 5-6 крапель відкидають. Під час взяття крові не рекомендується накладати джгут і робити масаж передпліччя для запобігання активації зсідання крові і фібринолізу.
У пробірку поліетиленову (п. 3.15) дозатором лабораторним (п. 3.4) вносять 0,5 мл розчину натрію лимоннокислого 5,5 водного (п. 8.2.4) та змішують з 4,5 мл крові (співвідношення 1:9). Пробірку з сумішшю щільно закривають корком і повільними рухами обережно декілька разів перемішують (не струшуючи).
Центрифугують (п. 3.11) протягом 10 хв з прискоренням 1200-1400 g. Плазму крові переносять дозатором лабораторним (п. 3.4) у пробірку поліетиленову (п. 3.15).
Вимоги до зразків плазми крові установлюються у розділах преаналітики посібників з клінічної лабораторної діагностики.
8.4. Одержання стандартної донорської плазми крові.
Для приготування стандартної донорської плазми крові необхідно змішати у рівних співвідношеннях плазму крові більш ніж 7 донорів, отриману, як вказано в п. 8.3, розфасувати по 1-2 мл у пробірки поліетиленові (п. 3.15), заморозити та зберігати протягом двох тижнів при температурі мінус 20 град. С.
Безпосередньо перед виконанням вимірювань плазму крові розморожують у бані водяній лабораторній (п. 3.3) при 37 град. С (до повного розморожування пробірку не струшувати). Після розморожування плазму перемішати, вона повинна бути прозорою.
9. ХІД ВИЗНАЧЕННЯ
9.1. У три пробірки (п. 3.14) вносять по 10 мг азофібрину (п. 3.20) і додають дозатором лабораторним (п. 3.4) у першу і третю пробірки по 0,85 мл, а у другу - 0,7 мл натрій-фосфатного буфера (п. 8.2.2). Потім у першу і другу пробірки вносять дозатором лабораторним (п. 3.4) по 0,15 мл плазми крові, що досліджується, після чого у другу пробірку додають 0,15 мл розчину стрептокінази (п. 8.2.3).
9.2. Пробірки з сумішами інкубують на бані водяній лабораторній (п. 3.3) при температурі 37 град. С протягом 1 години. Час інкубації перевіряють за секундоміром (п. 3.7). Кожні 15-20 хвилин інкубації вміст пробірок обережно перемішують, не допускаючи налипання субстрату на стінки пробірки вище рівня наповнення.
9.3. Після інкубації у всі три пробірки дозатором лабораторним (п. 3.4) додають по 3 мл дистильованої води (п.3.21), а в третю (контрольну) - додатково 0,15 мл плазми крові, що досліджується.
9.4. Вміст пробірок швидко фільтрують через тонкий шар вати (п. 3.19), що знаходиться в шприці (п. 3.12), продавлюючи його поршнем. Фільтрати збирають у пробірки (п. 3.14) і додають до них дозатором лабораторним (п. 3.4) 0,05 мл 5 М розчину їдкого натру (п. 8.2.1). Після перемішування миттєво виникає інтенсивне забарвлення від оранжевого до червоного. Інтенсивність забарвлення фільтратів проб (першої і другої пробірок) вимірюють порівняно з контролем (третя пробірка) на спектрофотометрі (п. 3.8) при довжині хвилі 440 нм або на фотоелектрокалориметрі ФЕК-М (п. 3.10) із світлофільтром N3 (синім) при довжині оптичного шляху 1 см.
Розрахунок здійснюють за формулами:
Пн=Е К ; Пр=(Е - Е ) x К ,
1 2 2 1 2
де Пн і Пр - вміст плазміну і плазміногену відповідно (%);
Е і Е - поглинання (оптична густина) фільтрату відповідно в
1 2
першій і другій пробірці;
К і К - розрахункові коефіцієнти, виведені для кожної серії
1 2
субстрату при дослідженні пулу плазми здорових донорів. При цьому
вміст плазміну і плазміногену в плазмі крові здорових донорів
приймають за 100%.
10. ОБРОБКА ТА ОФОРМЛЕННЯ РЕЗУЛЬТАТІВ ВИМІРЮВАНЬ
10.1. За результат вимірювання приймають середнє значення
(х ,%) двох паралельних вимірювань, яке розраховується за
ср
формулою: х = (х + х )/2,
ср 1 2
де х , х - значення, отримані у двох паралельних вимірюваннях.
1 2
10.2. Результати вимірювань заносяться до облікової медичної документації, затвердженої наказом МОЗ України від 04.01.01 N 1:
- форма 237/о - "Аналіз крові (показники системи згортання)";
- форма 238/о - "Аналіз крові (показники системи згортання - скорочений варіант)";
- форма 250/о - "Журнал реєстрації аналізів і їх результатів";
- форма 262/о - "Журнал обліку аналізів, зроблених в лабораторії".
11. КОНТРОЛЬ ПОХИБКИ ВИМІРЮВАНЬ
11.1. Визначення систематичної похибки вимірювань за даною методикою проводиться методом паралельних проб. Для цього проводять по два паралельних вимірювання 10 проб пацієнтів поточного дня.
11.2. Вимірювання активності плазміну плазми крові проводять відповідно до розділу 9.
11.3. Отримані дані заносять у таблицю 3.
Таблиця 3
------------------------------------------------------------------
| N | Х | Х | Х - Х |( Х - Х ) в степені 2|
| | 1 | 2 | 1 2 | 1 2 |
|---+---------+---------+----------------+-----------------------|
------------------------------------------------------------------
11.4. За отриманими результатами вимірювань розраховується середнє значення показників (п. 10.1), середньоквадратичне відхилення (дельта) та коефіцієнт варіації (V). Результати розрахунків порівнюються з величинами, наведеними в таблиці 1 розділу 2.
11.5. Будують контрольну карту кумулятивних сум.
11.6. Кожного дня різницю між двома паралельними вимірюваннями проб, відмічають на карті. Результати, які попадають за межі контрольних вимірювань (2дельта) вказують на наявність недоліків в системі вимірювання.
11.7. Якщо отримані результати вимірів не відповідають вимогам розділу 2 та п. 11.6, то виміри необхідно повторити.
11.8. Якщо результати повторного контролю незадовільні, то виконання вимірювання необхідно припинити, виявити та усунути причини, які до цього призвели.
12. ПОСИЛАННЯ НА НОРМАТИВНІ ДОКУМЕНТИ
------------------------------------------------------------------
| Документ | Найменування | N пункту |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 24104-88Е |Весы лабораторные общего | 8.2.1; |
| |назначения и образцовые. | 8.2.2; |
| |Общие технические условия | 8.2.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 7328-82Е |Меры массы общего назначения и| 8.2.1; |
| |образцовые. | 8.2.2; |
| |Технические условия | 8.2.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 64-1-2850-80 |Баня водяна лабораторна | 9.1; 9.2;|
| | | 9.3 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 28311-89 |Дозаторы медицинские | 8.2.3; |
| |лабораторные | 8.3; 8.4;|
| | | 9.1; 9.2;|
| | | 9.3 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 5-375-4215-77 |Центрифуга ЦЛР-1 | 8.3; 8.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 25-05.2147-78 |Іономір універсальний ЕВ-74 | 8.2.2 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 13646-68 |Термометры стеклянные ртутные | 9.1; 9.2;|
| |для точных измерений | 9.3 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 25-1819.0021-90 |Секундомір механічний "Слава" | 9.1; 9.2;|
| |с ДСПР 1-2-000. Технічні умови| 9.3 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 5556-81 |Вата гігроскопічна | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 1770-74 |Шприц | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 64-2-407-89 |Банки и флаконы с притертой | 8.2.1; |
| |пробкой | 8.2.2; |
| | | 8.2.3; |
| | | 8.2.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 208 УССР 273-84 |Пробірки поліетиленові | 8.3; 8.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 1770-74 |Посуда мерная лабораторная | 8.2.1; |
| |стеклянная. Цилиндры, | 8.2.2; |
| |мензурки, колбы, пробирки. | 8.2.3; |
| |Технические условия | 8.2.4; |
| | | 9.1; 9.2;|
| | | 9.3 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 6709-79 |Вода дистильована. | 8.2.1; |
| |Технічні умови | 8.2.2; |
| | | 8.2.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
| |Азофібрин | 9.1 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 5556-79 |Вата | 9.3 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 11078-78 |Натрій їдкий | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 4233-77 |Натрій гідрофосфорнокислий | 8.2.2 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 4172-76 |Натрій дігідрофосфорнокислий | 8.2.3 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 4233-77 |Натрій хлористий | 8.2.2 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 22280-76 |Натрій лимонокислий | 8.2.4 |
| |5,5 водний | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|У N 4810133002408 |Стрептокіназа | |
|Б-1ЛС 96/42/150 | | |
|(Мінськ, Білорусія) | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Мінхімпромом СРСР |"Правила техніки безпеки при | 5 |
|від 27.07.77: |експлуатації електроустановок"| |
|НАОП 1.1.10-1.01-85 | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України |"Про подальше удосконалення | 5 |
|від 19.12.97 N 359 |атестації лікарів" | |
|( z0014-98 ) | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України |"Про атестацію середніх | 5 |
|від 23.10.91 N 146 |медичних працівників" | |
|( v0146282-91 ) | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України |"Про затвердження медичної | 10.2 |
|від 04.01.01 N 1 |облікової документації, що | |
|( v0001282-01 ) |використовується в | |
| |лабораторіях | |
| |лікувально-профілактичних | |
| |закладів" | |
------------------------------------------------------------------
Міністерство охорони здоров'я України
ЗАТВЕРДЖЕНО
Наказ МОЗ України
15.11.2002 N 417
МЕТОДИКА ВИКОНАННЯ
ВИМІРЮВАННЯ ЧАСУ РЕТРАКЦІЇ ЗГУСТКІВ КРОВІ МВВ 42.01-23-2002
ПОГОДЖЕНО
Головний метролог
МОЗ України
А.М.Ніколенко
10.10.2002
ПОГОДЖЕНО
Головний спеціаліст з
клінічної лабораторної
діагностики МОЗ України
В.А.Дєєв
10.10.2002
1. ГАЛУЗЬ ЗАСТОСУВАННЯ
Цей документ встановлює порядок виконання вимірювання ретракції згустку крові.
Методика призначена для використання у закладах охорони здоров'я.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА ПОХИБКИ ВИЗНАЧЕННЯ
Методика забезпечує виконання вимірювання ретракції згустку нестабілізованої венозної крові за характеристиками, наведеними у таблиці 1.
Таблиця 1
------------------------------------------------------------------
|Діапазон вимірювань, | Середньоквадратичне | Коефіцієнт |
| хв |відхилення, дельта (хв) | варіації, V (%)|
| | | |
|---------------------+-------------------------+----------------|
| 50-120 | +-2,8 | 7 |
------------------------------------------------------------------
3. ЗАСОБИ ВИМІРЮВАЛЬНОЇ ТЕХНІКИ, ДОПОМІЖНЕ ОБЛАДНАННЯ, РЕАКТИВИ І МАТЕРІАЛИ
3.1. Баня водяна лабораторна ТУ 64-1-2850-80
3.2. Секундомір механічний ТУ 25-1819.0021-90
3.3. Термометр скляний ртутний для точних вимірювань ГОСТ
13646-68
3.4. Центрифуга ЦЛР-1 ТУ 5-375-4215-77