Безпосередньо перед виконанням вимірювань плазму крові розморожують у бані водяній лабораторній (п. 3.4) при 37 град. С (до повного відтаювання пробірку не струшувати). Після відтаювання плазма повинна бути абсолютно прозорою.
9. ХІД ВИЗНАЧЕННЯ
9.1. В пробірку скляну (п. 3.11) вносять 0,1 мл розчину кальцію хлористого (п. 8.2.5) та 0,1 мл суспензії тромбопластину (п. 8.2.6). Суміш інкубують 60 с на бані водяній (п. 3.3) при температурі 37 град. С.
9.2. Тромбопластин-кальцієву суміш (9.1) додають до 0,1 мл плазми, що досліджується (п. 8.3) та включають секундомір (п.3.6). Пробірки з реагентами через кожні 1-2 с нахиляють на 45 градусів і вимірюють час появи згустку, який є критерієм закінчення реакції.
Час зсідання стандартної донорської плазми крові при температурі 37 град. С в тесті дорівнює 16-18 с.
Активність факторів протромбінового комплексу стандартної донорської плазми крові приймають за 100%. Градуювальник графік будують на білогарифмічному папері (п. 3.14), використовуючи розведення стандартної донорської плазми крові (табл. 2). По осі ординат відмічають час зсідання плазми крові (у секундах), по осі абсцис - активність факторів протромбінового комплексу (у відсотках).
Таблиця 2
-----------------------------------------------------------------
| Стандартна | Розчин натрію | Активність факторів |
| донорська | хлористого, мл | протромбінового комплексу, % |
|плазма крові, | | |
| мл | | |
|--------------+-----------------+------------------------------|
| 0,1 | 0,0 | 100,0 |
|--------------+-----------------+------------------------------|
| 0,1 | 0,1 | 50,0 |
|--------------+-----------------+------------------------------|
| 0,1 | 0,3 | 25,0 |
-----------------------------------------------------------------
10. ОБРОБКА ТА ОФОРМЛЕННЯ РЕЗУЛЬТАТІВ ВИМІРЮВАНЬ
10.1. За результат вимірювання приймають середнє значення
(х , с) двох паралельних вимірювань, яке розраховується за
ср
формулою:
х = (х + х )/2,
ср 1 2
де х , х - значення, отримані у двох паралельних вимірюваннях.
1 2
10.2. Результати вимірювань заносяться до облікової медичної документації, затвердженої наказом МОЗ України від 04.01.01 N 1:
- форма 237/о - "Аналіз крові (показники системи згортання)";
- форма 238/о - "Аналіз крові (показники системи згортання - скорочений варіант)";
- форма 250/о - "Журнал реєстрації аналізів і їх результатів";
- форма 262/о - "Журнал обліку аналізів, зроблених в лабораторії".
11. КОНТРОЛЬ ПОХИБКИ ВИМІРЮВАНЬ
11.1. Визначення систематичної похибки вимірювань проводиться методом паралельних проб. Для цього проводять по два паралельних вимірювання 10 проб пацієнтів поточного дня.
11.2. Вимірювання часу зсідання плазми крові в тесті протромбіновий час проводять відповідно до розділу 9.
11.3. Отримані дані заносять у таблицю 3.
Таблиця 3
------------------------------------------------------------------
| N | Х | Х | Х - Х |( Х - Х ) в степені 2|
| | 1 | 2 | 1 2 | 1 2 |
|---+---------+---------+----------------+-----------------------|
------------------------------------------------------------------
11.4. За отриманими результатами вимірювань розраховується середнє значення показників (п. 10.1), середньоквадратичне відхилення (дельта) та коефіцієнт варіації (V). Результати розрахунків порівнюються з величинами, наведеними в таблиці 1 розділу 2.
11.5. Будують контрольну карту кумулятивних сум.
11.6. Кожного дня різницю між двома паралельними вимірюваннями проб, відмічають на карті. Результати, які попадають за межі контрольних вимірювань (2дельта) вказують на наявність недоліків в системі вимірювання.
11.7. Якщо отримані результати вимірів не відповідають вимогам розділу 2 та п. 11.6, то виміри необхідно повторити.
11.8. Якщо результати повторного контролю незадовільні, то виконання вимірювань необхідно припинити, виявити та усунути причини, які до цього призвели.
12. ПОСИЛАННЯ НА НОРМАТИВНІ ДОКУМЕНТИ
------------------------------------------------------------------
| Документ | Найменування | N пункту |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 24104-88Е |Весы лабораторные общего | 8.2.1; |
| |назначения и образцовые. | 8.2.2; |
| |Общие технические условия | 8.2.4; |
| | | 8.2.5; |
| | | 8.2.6 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 7328-82Е |Меры массы общего назначения | 8.2.1; |
| |и образцовые. Технические | 8.2.2; |
| |условия | 8.2.4; |
| | | 8.2.5; |
| | | 8.2.6 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 25-05.2147-78 |Іономір універсальний ЕВ-74 | 8.2.1 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 64-1-2850-80 |Баня водяна лабораторна | 9.1; 9.2 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 28311-89 |Дозаторы медицинские | 8.2.6; |
| |лабораторные. Общие | 8.3; 8.4;|
| |технические требования и | 9.1; 9.2 |
| |методы испытаний | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 13646-68 |Термометры стеклянные | 9.1; 9.2 |
| |ртутные для точных измерений | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 25-1819.0021-90 |Секундомір механічний "Слава" | 9.1; 9.2 |
| |з ДСПР 1-2-000. Технічні умови| |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 5-375-4215-77 |Центрифуга ЦЛР-1 | 8.3; 8.4;|
| | | 8.2.6 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 1770-74 |Посуда мерная лабораторная | 8.2.1; |
| |стеклянная. Цилиндры, | 8.2.2; |
| |мензурки, колбы, пробирки. | 8.2.3; |
| | | 8.2.4; |
| | | 8.2.5 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 98-891-021-91Е |Пробірки мірні лабораторні | 9.1; 9.2 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 208 УССР 273-84 |Пробірки поліетиленові | 8.2.6; |
| | | 8.3; 8.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 64-2-407-89 |Банки и флаконы с притертой | 8.2.1; |
| |пробкой | 8.2.2; |
| | | 8.2.3; |
| | | 8.2.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 13-0248643-794-89 |Папір білогарифмічний | 10.1 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 6709-79 |Вода дистильована | 8.2.1; |
| | | 8.2.2; |
| | | 8.2.4; |
| | | 8.2.5 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 6-09-2082-78 |Натрій 5,5'- | 8.2.1 |
| |диетилбарбітуровокислий | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 4233-77 |Натрій хлористий | 8.2.1; |
| | | 8.2.2 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 22280-76 |Натрій лимоннокислий 5,5 | 8.2.4 |
| |водний | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ |Тромбопластин | 8.2.6; |
|9398-254-05595541-97 | | 9.2 |
|(Ренам, Росія) | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Мінхімпромом СРСР |"Правила техніки безпеки при | 5 |
|від 27.07.77: |експлуатації електроустановок"| |
|НАОП 1.1.10-1.01-85 | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України |"Про подальше удосконалення | 5 |
|від 19.12.97 N 359 |атестації лікарів" | |
|( z0014-98 ) та від | | |
|23.10.91 N 146 | | |
|( v0146282-91 ) | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України від |"Про атестацію середніх | 5 |
|23.10.91 N 146 |медичних працівників" | |
|( v0146282-91 ) | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України |"Про затвердження медичної | 10.2 |
|від 04.01.01 N 1 |облікової документації, що | |
|( v0001282-01 ) |використовується в | |
| |лабораторіях | |
| |лікувально-профілактичних | |
| |закладів" | |
------------------------------------------------------------------
Міністерство охорони здоров'я України
ЗАТВЕРДЖЕНО
Наказ МОЗ України
15.11.2002 N 417
МЕТОДИКА ВИКОНАННЯ
ВИМІРЮВАННЯ КОНЦЕНТРАЦІЇ ФІБРИНОГЕНУ У ПЛАЗМИ КРОВІ ЛЮДИНИ ВАГОВИМ МЕТОДОМ МВВ 42.01-13-2002
ПОГОДЖЕНО
Головний метролог
МОЗ України
А.М.Ніколенко
10.10.2002
ПОГОДЖЕНО
Головний спеціаліст з
клінічної лабораторної
діагностики МОЗ України
В.А.Дєєв
10.10.2002
1. ГАЛУЗЬ ЗАСТОСУВАННЯ
Цей документ встановлює порядок виконання вимірювання концентрації фібриногену у плазмі крові ваговим методом.
Методика призначена для використання у закладах охорони здоров'я.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА ПОХИБКИ ВИЗНАЧЕННЯ
Методика забезпечує вимірювання концентрації фібриногену у плазмі крові за характеристиками, наведеними у таблиці 1.
Таблиця 1
------------------------------------------------------------------
|Діапазон вимірювань, | Середньоквадратичне | Коефіцієнт |
| г/л |відхилення, дельта (г) | варіації, V (%)|
| | | |
|---------------------+-------------------------+----------------|
| 0,7-5,0 | +-0,25 | 6 |
------------------------------------------------------------------
3. ЗАСОБИ ВИМІРЮВАЛЬНОЇ ТЕХНіКИ, ДОПОМіЖНЕ ОБЛАДНАННЯ, РЕАКТИВИ І МАТЕРІАЛИ
3.1. Ваги 2 кл. точності ГОСТ 24104-88Е
3.2. Важки лабораторні 2 кл. точності ГОСТ 7328-82Е
3.3. Баня водяна лабораторна ТУ 64-1-2850-80
3.4. Дозатори медичні лабораторні ГОСТ 28311-89
3.5. Іономір ЕВ-74 ТУ 25-05.2147-78
3.6. Секундомір механічний ТУ 25-1819.0021-90
3.7. Термометр скляний ртутний для точних вимірювань ГОСТ
13646-68
3.8. Центрифуга ЦЛР-1 ТУ 5.375-4215-77
3.9. Колби мірні місткістю від 100,0 до 1000.0 мл ГОСТ
1770-74
3.9. Палички скляні діаметром 0,3-0,4 мм ГОСТ 20292-74
3.10. Пробірки поліетиленові місткістю (10-15) мл ТУ 208 УССР
273-84
3.11. Пробірки мірні лабораторні місткістю 10 мл ТУ
98-891-021-91Е
3.12. Флакони з темного скла з притертим корком ТУ
64-2-407-89
3.13. Циліндри на 100 мл та на 1000 мл ГОСТ 1770-74
3.14. Чашки з кришками (Петрі) пластмасові ТУ 4-219-79
3.15. Фільтр (голуба стрічка) ТУ 6-09-1678-77
3.16. Вода дистильована ГОСТ 6709-7913
3.17. Кальцій хлористий ГОСТ 4161-77
3.18. Натрій 5,5'-диетилбарбітуровокислий ТУ 6-09-2082-78
3.19. Натрій лимоннокислий 5,5 водний ГОСТ 22280-76
3.20. Натрій хлористий ГОСТ 4233-77
3.21. Тромбін ФС 42-2621-89.
3.22. Тромбопластин ТУ 9398-254-05595541-97
3.23. Фіксанал кислоти соляної ГОСТ 3118-77
Всі засоби вимірювальної техніки повинні бути повірені у встановленому порядку. Допускається застосування іншого обладнання, лабораторного посуду, а також реактивів і матеріалів з метрологічними та технічними характеристиками не нижчими, ніж наведені.
4. МЕТОД ВИЗНАЧЕННЯ
Метод визначення концентрації фібриногену в плазмі крові базується на здатності фібриногену плазми крові згортатися в присутності хлористого кальцію. Згусток фібрину швидко висушують і зважують.
Для прискорення процесу зсідання, або у тих випадках, коли час рекальціфікації плазми крові значно подовжений, використовують розчин тромбіну або суміш тромбопластину з кальцієм хлористим.
5. ВИМОГИ ТЕХНІКИ БЕЗПЕКИ
При виконанні вимірювань необхідно дотримуватись вимог НАОП 1.3.10-1.06-77 "Загальні правила безпеки роботи в хімічних лабораторіях", затверджених 27.07.77 Мінхімпромом СРСР: НАОП 1.1.10-1.01-85 "Правила техніки безпеки при експлуатації електроустановок", затверджено 10.09.85 Міненерго СРСР та ЦК галузевої профспілки; правил безпеки роботи, що представлені в експлуатаційній документації на засоби вимірювальної техніки та допоміжні пристрої.
6. ВИМОГИ ДО КВАЛІФІКАЦІЇ ВИКОНАВЦЯ
До виконання методики допускаються спеціалісти із спеціальною освітою, які відповідають кваліфікаційним вимогам відповідно до наказів МОЗ України від 19.12.97 N 359, від 23.10.91 N 146, та пройшли курси з клінічної лабораторної діагностики у державних навчальних закладах освіти системи МОЗ України різного рівня акредитації, наукових закладах або таких, що до них прирівняні, і мають право видавати документи державного зразка згідно з чинним законодавством України.
7. УМОВИ ВИКОНАННЯ ВИМІРЮВАНЬ
При проведені вимірювань повинні бути забезпечені наступні умови:
7.1. Температура середовища (22+-5) град. С.
7.2. Відносна вологість від 60% до 75%.
7.3. Атмосферний тиск від 84,0 до 106,7 кПа (від 600,0 до 800,3 мм рт.ст).
7.4. Напруга електромережі (220+-22) В.
7.5. Освітленість від 300 до 400 лк.
8. ПІДГОТОВКА ДО ВИЗНАЧЕННЯ
8.1. Усі прилади, засоби вимірювальної техніки та допоміжне обладнання привести у робочий стан згідно з інструкціями по експлуатації.
8.2. Приготування розчинів
8.2.1. Приготування буферу Міхаеліса (рН 7,35+-0,05).
Розчин А. Наважку (20,60+0,01) г натрію 5,5'-диетилбарбітуровокислого (п. 3.18) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.8), розчиняють у дистильованій воді (п. 3.16) і об'єм розчину доводять до мітки. Розчин зберігається у флаконах з темного скла з притертим корком (п. 3.12) протягом одного місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
Розчин Б. Фіксанал кислоти соляної 0,1 моль/л (п. 3.23) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.8) і об'єм розчину доводять до мітки дистильованою водою (п. 3.16). Розчин зберігається у флаконах з темного скла з притертим корком (п.3.12) протягом одного місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
Розчин В. Наважку (7,30+0,01) г натрію хлористого (п. 3.20) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.8), відмірюють циліндром (п. 3.13) 290 мл розчину А і 210 мл розчину Б, додають в колбу та об'єм доводять до мітки. рН буферу перевіряють на іономірі універсальному (п. 3.5). Буфер зберігають у флаконах з темного скла з притертим корком (п. 3.12) протягом місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
8.2.2. Приготування розчину натрію хлористого з концентрацією 8,5 г/л.
Наважку (8,50+-0,01) г натрію хлористого (п. 3.20) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.8), розчиняють у дистильованій воді (п. 3.16) і доводять об'єм розчину до мітки. Розчин зберігається у флаконах з темного скла з притертим корком (п. 3.12) протягом одного місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
8.2.3. Приготування розчину забуференого фізіологічного (рН 7,4+-0,1).
Змішують 4 об'єми розчину натрію хлористого (8,5 г/л) (п. 8.2.2) з 1 об'ємом буферу Міхаеліса (п. 8.2.1). Розчин зберігати при температурі від 4 до 8 град. С протягом місяця.
8.2.4. Приготування розчину натрію лимоннокислого з концентрацією (3,8 г на 100 г розчину).
Наважку (3,80+-0,01) г натрію лимоннокислого (п. 3.19) розчиняють у 96,2 мл дистильованої води (п. 3.16), яку відміряють циліндром (п. 3.13). Розчин зберігають при температурі від 4 до 6 град. С протягом одного тижня.
8.2.5. Приготування розчину кальцію хлористого (5 г на 100 г розчину).
Наважку (5,0+-0,1) г кальцію хлористого зневодненого (п.3.17) розчиняють у 95 мл дистильованої води (п. 3.16), яку відміряють циліндром (п. 3.13). Розчин зберігають у флаконах темного скла з притертим корком (п. 3.12) при температурі від 4 до 6 град. С протягом місяця.
8.2.6. Приготування розчинів кальцію хлористого (3 г на 100 г розчину).
Наважку (3,0+-0,1) г кальцію хлористого зневодненого (п.3.17) розчиняють у 97 мл дистильованої води (п. 3.16), яку відміряють циліндром (п. 3.13). Розчин зберігають у флаконах темного скла з притертим корком (п. 3.12) при температурі від 4 до 6 град. С протягом місяця.
8.2.7. Приготування розчину тромбіну.
Наважку тромбіну (п. 3.21), що відповідає (10,0+-0,5) од. активності розчиняють у пробірках поліетиленових (п. 3.10) в 1 мл буфера Міхаеліса (п. 8.2.1), який відміряють дозатором лабораторним (п. 3.4), центрифугують (п. 3.7) з прискоренням 1000-1200 g протягом 5 хв.
0,1 мл розчину тромбіну такої активності викликає зсідання 0,2 мл стандартної донорської плазми крові, що розведена буфером Міхаеліса (п. 8.2.1) в 2 рази, за 5-7 с.
Після приготування розчин поміщають у крижану баню. Розчин тромбіну зберігати при температурі мінус 20 град. С протягом двох тижнів.
8.2.8. Приготування тромбопластину.
Наважку (10,0+-0,1) мг тромбопластину (п. 3.22) перемішують з 1 мл дистильованої води (п. 3.16), яка відмірена дозатором лабораторним (п. 3.4).
Розчини тромбопластину центрифугують (п. 3.7) протягом 5 хв з прискоренням 300 g.
8.3. Одержання плазми крові.
Кров у хворого беруть натщесерце з вени гострою сухою голкою з широким діаметром, без шприца (для запобігання гемолізу). При заборі крові перші 5-6 крапель відкидають. Під час взяття крові не рекомендується накладати джгут і робити масаж передпліччя для запобігання активації зсідання крові і фібринолізу.
У пробірку поліетиленову (п. 3.10) дозатором лабораторним (п. 3.4) вносять 0,3-0,5 мл розчину натрію лимоннокислого (п. 8.2.4) та змішують відповідно з 3-5 мл крові. Пробірку з сумішшю щільно закривають корком і повільними рухами обережно декілька разів перемішують (не струшуючи).
Центрифугують (п. 3.7) протягом 10 хв з прискоренням 1200-1400 g. Плазму крові переносять дозатором лабораторним (п. 3.4) у пробірку поліетиленову (п. 3.10).
Вимоги до зразків плазми крові установлюються у розділах преаналітики посібників з клінічної лабораторної діагностики.
8.4. Одержання стандартної донорської плазми крові.
Для приготування стандартної донорської плазми крові необхідно змішати у рівних співвідношеннях плазму крові більш ніж 7 донорів, отриману, як вказано в п. 8.4, розфасувати по 1-2 мл у пробірки поліетиленові (п. 3.10), заморозити та зберігати протягом двох тижнів при температурі мінус 20 град. С.
Безпосередньо перед виконанням вимірювань плазму крові розморожують у бані водяній лабораторній (п. 3.4) при 37 град. С (до повного відтаювання пробірку не струшувати). Після відтаювання плазма повинна бути абсолютно прозорою.
9. ХІД ВИЗНАЧЕНЬ
9.1. В пробірку мірну лабораторну (п. 3.11) вносять 1 мл плазми крові (п. 8.3), що досліджується, додають 0,1 мл розчину кальцію хлористого (п. 8.2.5), суміш перемішують скляною паличкою (п. 3.9), яку залишають у пробірці з сумішшю. Пробірку поміщають у баню водяну (п. 3.3) при температурі 37 град. С.
9.2. Через 30 хв згусток фібрину, що утворився, намотують на паличку, виймають з пробірки та за допомогою фільтру (п. 3.15) видаляють сироватку стисненням фільтра, в середині якого знаходиться згусток фібрину. Згусток послідовно переміщують по фільтру і піддають стисненню до того часу, поки на папері не буде помітно слідів вологи.
9.3. Висушений таким чином фібрин негайно зважують на вагах (п. 3.1).
Згусток фібрину необхідно зважити безпосередньо після висушування у зв'язку з тим, що за 1-2 хвилини його вага змінюється на 2-4%.
Якщо при згортанні утворюється щільний згусток, який не намотується на паличку, вміст пробірки переносять в чашку Петрі (п. 3.14), а потім вже фібрин висушують на фільтрі (п. 3.15) як вказано вище.
Час зсідання плазми крові в присутності кальцію хлористого (п. 8.2.5) при температурі (20+-5) град. С становить у середньому 11,0 с. У тих випадках коли в плазмі, що досліджується, час рекальціфікації значно подовжений, треба замість кальцію хлористого користуватися розчином тромбіну (п. 8.2.7), або сумішшю (1:1) тромбопластину (п. 8.2.8) та розчину кальцію хлористого (п. 8.2.6).
Для перерахунку концентрації фібриногену в плазмі крові в грамах на літр по сухій вазі речовини, отриману вагу фібрину в грамах перемножують на коефіцієнт 0,222. Вміст фібриногену у стандартній донорській плазмі крові 2-4 г/л.
10. ОБРОБКА ТА ОФОРМЛЕННЯ РЕЗУЛЬТАТІВ ВИМІРЮВАНЬ
10.1. За результат вимірювання приймають середнє значення
(х , г/л) двох паралельних вимірювань, яке розраховується за
ср
формулою: х = (х + х )/2,
ср 1 2
де х , х - значення, отримані у двох паралельних вимірюваннях.
1 2
10.2. Результати вимірювань заносяться до облікової медичної документації, затвердженої наказом МОЗ України від 04.01.01 N 1:
- форма 237/о - "Аналіз крові (показники системи згортання)";
- форма 238/о - "Аналіз крові (показники системи згортання - скорочений варіант)";
- форма 250/о - "Журнал реєстрації аналізів і їх результатів";
- форма 262/о - "Журнал обліку аналізів, зроблених в лабораторії".
11. КОНТРОЛЬ ПОХИБКИ ВИМІРЮВАНЬ
11.1. Визначення систематичної похибки вимірювань за даною методикою проводиться методом паралельних проб. Для цього проводять по два паралельних вимірювання 10 проб пацієнтів поточного дня.
11.2. Вимірювання концентрації фібриногену в плазмі крові проводять відповідно до розділу 9.
11.3. Отримані дані заносять у таблицю 2.
Таблиця 2
------------------------------------------------------------------
| N | Х | Х | Х - Х |( Х - Х ) в степені 2|
| | 1 | 2 | 1 2 | 1 2 |
|---+---------+---------+----------------+-----------------------|
------------------------------------------------------------------
11.4. За отриманими результатами вимірювань розраховується середнє значення показників (п. 10.1), середньоквадратичне відхилення (дельта) та коефіцієнт варіації (V). Результати розрахунків порівнюються з величинами, наведеними в таблиці 1 розділу 2.
11.5. Будують контрольну карту кумулятивних сум.
11.6. Кожного дня різницю між двома паралельними вимірюваннями проб, відмічають на карті. Результати, які попадають за межі контрольних вимірювань (2дельта) вказують на наявність недоліків в системі вимірювання.
11.7. Якщо отримані результати вимірів не задовольняють вимоги розділу 2 та п. 11.6, то виміри необхідно повторити.
11.8. Якщо результати повторного контролю незадовільні, то виконання вимірювань необхідно припинити, виявити та усунути причини, які до цього призвели.
12. ПОСИЛАННЯ НА НОРМАТИВНІ ДОКУМЕНТИ
------------------------------------------------------------------
| Документ | Найменування | N пункту |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 24104-88Е |Весы лабораторные общего | 8.2.1; |
| |назначения и образцовые. | 8.2.2; |
| |Общие технические условия | 8.2.4; |
| | | 8.2.5; |
| | | 8.2.6; |
| | | 8.2.7; |
| | | 8.2.8; |
| | | 9.3 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 7328-82 Е |Меры массы общего назначения | 8.2.1; |
| |и образцовые. Технические | 8.2.2; |
| |условия | 8.2.3; |
| | | 8.2.4; |
| | | 8.2.5; |
| | | 8.2.7; |
| | | 8.2.8; |
| | | 9.3 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 64-1-2850-80 |Водяна баня лабораторна | 9.1 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 25-05.2147-78 |Іономір універсальний ЕВ-74 | 8.2.1 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 13646-68 |Термометры стеклянные | 9.1 |
| |ртутные для точных измерений | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 25-1819.0021-90 |Секундомір механічний |8.2.7; 9.1|
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 5-375-4215-77 |Центрифуга ЦЛР-1 | 8.2.7; |
| | | 8.2.8; |
| | | 8.3; 8.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 28311-89 |Дозаторы медицинские | 8.2.7; |
| |лабораторные. Общие | 8.2.8; |
| |технические требования и | 8.3; 8.4;|
| |методы испытаний | 9.1 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 1770-74 |Посуда мерная лабораторная | 8.2.1; |
| |стеклянная. Цилиндры, | 8.2.2; |
| |мензурки, колбы, пробирки. | 8.2.3; |
| | | 8.2.4; |
| | | 8.2.5; |
| | | 8.2.6; |
| | | 8.2.7; |
| | | 8.2.8; |
| | | 9.1 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 208 УССР 273-84 |Пробірки поліетиленові | 8.2.7; |
| | | 8.2.8; |
| | | 8.3; 8.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 20292-74 |Палички скляні діаметром | 9.1; 9.2 |
| |0,3-0,4 мм | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 64-2-19-79 |Чашки з кришками (Петрі) | 9.2 |
| |пластикові одноразового | |
| |застосування | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 64-2-407-89 |Банки и флаконы с притертой | 8.2.1; |
| |пробкой | 8.2.2; |
| | | 8.2.3; |
| | | 8.2.4; |
| | | 8.2.5; |
| | | 8.2.6 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 6-09-1678-77 |Голуба стрічка | 9.2 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 6709-79 |Вода дистильована | 8.2.1; |
| | | 8.2.2; |
| | | 8.2.4; |
| | | 8.2.5; |
| | | 8.2.6 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 4161-77 |Кальцій хлористий | 8.2.5; |
| | | 8.2.6 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 6-09-2082-78 |Натрій 5,5'- | 8.2.1 |
| |диетилбарбітуровокислий | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 4233-77 |Натрій хлористий | 8.2.1; |
| | | 8.2.2 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 22280-76 |Натрій лимоннокислий 5,5 | 8.2.4 |
| |водний | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ФС 42-2621-89 |Тромбін | 8.2.7 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ |Тромбопластин | 8.2.8 |
|9398-254-05595541-97 | | |
|(Ренам, Росія) | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 3118-77 |Фіксонал соляної кислоти | 8.2.1 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Мінхімпромом СРСР |"Правила техніки безпеки при | 5 |
|від 27.07.77: |експлуатації електроустановок"| |
|НАОП 1.1.10-1.01-85 | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України |"Про подальше удосконалення | 5 |
|від 19.12.97 N 359 |атестації лікарів" | |
|( z0014-98 ) та від | | |
|23.10.91 N 146 | | |
|( v0146282-91 ) | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України від |"Про атестацію середніх | 5 |
|23.10.91 N 146 |медичних працівників" | |
|( v0146282-91 ) | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України |"Про затвердження медичної | 10.2 |
|від 04.01.01 N 1 |облікової документації, що | |
|( v0001282-01 ) |використовується в | |
| |лабораторіях | |
| |лікувально-профілактичних | |
| |закладів" | |
------------------------------------------------------------------
Міністерство охорони здоров'я України
ЗАТВЕРДЖЕНО
Наказ МОЗ України
15.11.2002 N 417
МЕТОДИКА ВИЗНАЧЕННЯ
В ПЛАЗМІ КРОВІ ЛЮДИНИ РОЗЧИННИХ ФІБРИН-МОНОМЕРНИХ КОМПЛЕКСІВ (ФОСФАТНИЙ ТЕСТ) МВВ 42.01-14-2002
ПОГОДЖЕНО
Головний метролог
МОЗ України
А.М.Ніколенко
10.10.2002
ПОГОДЖЕНО
Головний спеціаліст з
клінічної лабораторної
діагностики МОЗ України
В.А.Дєєв
10.10.2002
1. ГАЛУЗЬ ЗАСТОСУВАННЯ
Цей документ встановлює порядок виявлення в плазмі крові розчинних фібрин-мономерних комплексів в присутності фосфатного буферу.
Методика призначена для використання у закладах охорони здоров'я.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА ПОХИБКИ ВИМІРЮВАНЬ
Методика забезпечує виявлення в плазмі крові розчинних фібрин-мономерних комплексів в присутності фосфатного буферу: відсутність видимого помутніння - негативний результат, чітке помутніння - позитивний (+), пластівцеподібна каламуть (++), пластівці, нитки - (+++), гелеподібний осад - (++++).
3. ЗАСОБИ ВИМІРЮВАЛЬНОЇ ТЕХНІКИ, ДОПОМІЖНЕ ОБЛАДНАННЯ, РЕАКТИВИ ТА МАТЕРІАЛИ
3.1. Ваги 2 кл. точності ГОСТ 24104-88Е
3.2. Важки лабораторні 2 кл. точності ГОСТ 7328-82Е
3.3. Дозатори лабораторні ГОСТ 28311-89
3.4. Іономір ЕВ-74 ТУ 25-05.2147-78
3.5. Секундомір механічний ТУ 25-1819.0021-90
3.6. Термометр ТУ 25-2022 0003-89
3.7. Центрифуга ЦЛР-1 ТУ 5-375-4215-77
3.8. Лупа складна кругла ЛПК-471 ТУ 3-3.741-83
3.9. Колби мірні місткістю від 100,0 мл до 1000,0 мл ГОСТ
1770-74
3.10. Стакани місткістю від 100,0 до 200,0 мл ГОСТ 1770-74
3.11. Пробірки поліетиленові місткістю (10-15) мл ТУ 208 УССР
273-84
3.12. Пробірки мірні лабораторні місткістю 10 мл ГОСТ 1770-74
3.13. Флакони з темного скла з притертим корком ГОСТ 23932-90
3.14. Циліндри місткістю (25-50) мл ГОСТ 1770-74
3.15. 6-аміногексанова кислота (є-амінокапронова кислота) ТУ
6-09-4039-75
3.16. Вода дистильована ГОСТ 6709-79
3.17. Калій фосфорнокислий однозаміщений ГОСТ 4198-75
3.18. Натрію гідроксид ГОСТ 11078-78
3.19. Натрій лимоннокислий ГОСТ 22280-76
3.20. Натрій хлористий ГОСТ4233-77
Всі засоби вимірювальної техніки повинні бути повірені у встановленому порядку. Допускається застосування іншого обладнання, лабораторного посуду, а також реактивів і матеріалів з метрологічними та технічними характеристиками не нижчими, ніж наведені.
4. МЕТОД ВИМІРЮВАННЯ
Принцип методу полягає в руйнуванні розчинних комплексів фібрин-мономеру з фібриногеном та фрагментами фібрину в плазмі крові при додаванні фосфатного буферу та подальше утворення полімерних волокон фібрину, що свідчить про активацію системи зсідання.
5. ВИМОГИ ТЕХНІКИ БЕЗПЕКИ
При виконанні вимірювань необхідно дотримуватись вимог НАОП 1.3.10-1.06-77 "Загальні правила безпеки роботи в хімічних лабораторіях", затверджених 27.07.77 Мінхімпромом СРСР: НАОП 1.1.10-1.01-85 "Правила техніки безпеки при експлуатації електроустановок", затверджено 10.09.85 Міненерго СРСР та ЦК галузевої профспілки; правил безпеки роботи, що представлені в експлуатаційній документації на засоби вимірювальної техніки та допоміжні пристрої.
6. ВИМОГИ ДО КВАЛІФІКАЦІЇ ВИКОНАВЦЯ
До виконання методики допускаються спеціалісти із спеціальною освітою, які відповідають кваліфікаційним вимогам відповідно до наказів МОЗ України від 19.12.97 N 359, від 23.10.91 N 146, та пройшли курси з клінічної лабораторної діагностики у державних навчальних закладах освіти системи МОЗ України різного рівня акредитації, наукових закладах або таких, що до них прирівняні, і мають право видавати документи державного зразка згідно з чинним законодавством України.
7. УМОВИ ВИКОНАННЯ ВИМІРЮВАНЬ
При проведені вимірювань повинні бути забезпечені наступні умови:
7.1. Температура середовища (22+-5) град. С.
7.2. Відносна вологість від 60% до 75%.
7.3. Атмосферний тиск від 84,0 до 106,7 кПа (від 600,0 до 800,3 мм рт.ст).
7.4. Напруга електромережі (220+-22) В.
7.5. Освітленість від 300 до 400 лк.
8. ПІДГОТОВКА ДО ВИЗНАЧЕННЯ
8.1. Усі прилади та допоміжні пристрої привести у робочий стан згідно з інструкцією по експлуатації.
8.2. Приготування розчинів.
8.2.1. Приготування 0,1 моль/л фосфатного буферу, (рН 7,50+-0,05), (буфер N 1).
Наважки калію фосфорнокислого однозаміщеного (1,36+-0,01) г (п. 3.17), натрію хлористого (0,38+-0,01) г (п. 3.20), 6-аміногексанової кислоти (0,20+-0,01) г (п. 3.15), натрію лимоннокислого (0,10+-0,01) г (п. 3.19) розчиняють в стакані (п. 3.10) в 70-80 мл дистильованої води (п. 3.16) і на іономірі (п. 3.4) доводять рН до (7,50+-0,05) концентрованим розчином натрію гідроксиду (п. 3.18), потім буфер переносять в мірну колбу місткістю 100 мл (п. 3.9) і доводять об'єм розчину до мітки дистильованою водою (п. 3.16). Розчин зберігати при температурі від 4 до 6 град. С протягом тижня у флаконах темного скла з притертим корком (п. 3.13).
8.2.2. Приготування 1 моль/л фосфатного буферу (рН 7,50+-0,05), (буфер N 2).
Наважку калію фосфорнокислого однозаміщеного (27,22+-0,01) г (п. 3.17) розчиняють в стакані (п. 3.10) у 170 мл дистильованої води (п. 3.16), доводять рН до (7,50+-0,05) концентрованим розчином натрію гідроксиду (п. 3.18), потім буфер переносять у мірну колбу місткістю 200 мл (п. 3.7) та доводять об'єм розчину до мітки. Розчин зберігати при температурі від 4 до 6 град. С протягом одного місяця у флаконах темного скла з притертим корком (п. 3.13).
8.2.3. Приготування розчину лимоннокислого натрію (3,8 г на 100 г розчину).
Наважку (3,80+-0,01) г натрію лимоннокислого (п. 3.19) розчиняють у 96,2 мл дистильованої води (п. 3.14), яку відміряють циліндром (п. 3.14). Розчин зберігають при температурі від 4 до 6 град. С протягом одного тижня.
8.3. Одержання плазми крові.
Кров у хворого беруть натщесерце з вени гострою сухою голкою з широким діаметром, без шприца (для запобігання гемолізу). При заборі крові перші 5-6 крапель відкидають. Під час взяття крові не рекомендується накладати джгут і робити масаж передпліччя для запобігання активації зсідання крові і фібринолізу.
У пробірку поліетиленову (п. 3.11) дозатором лабораторним (п. 3.3) вносять 0,5 мл розчину натрію лимоннокислого (п. 8.2.4) та змішують з 4,5 мл крові (співвідношення 1:9). Пробірку з сумішшю щільно закривають корком і повільними рухами обережно декілька разів перемішують (не струшуючи).
Центрифугують (п. 3.7) протягом 10 хв з прискоренням 1200-1400 g. Плазму крові переносять дозатором лабораторним (п. 3.3) у пробірку поліетиленову (п. 3.11).
Вимоги до зразків плазми крові установлюються у розділах преаналітики посібників з клінічної лабораторної діагностики.
9. ХІД ВИЗНАЧЕНЬ
9.1. У пробірки скляні мірні (п. 3.12) дозатором лабораторним (п. 3.3) вносять 0,25 мл плазми крові, що досліджується (п. 8.3), додають 0,25 мл 0,1 моль/л фосфатного буферу (Буфер N 1) (п. 8.2.1), перемішують.
9.2. Додають 0,4 мл 1 моль/л фосфатного буферу (п. 8.2.2), перемішують і інкубують на 30 хв при температурі 21-23 град. С.
Результати оцінюють візуально: відсутність видимого помутніння - негативний результат, чітке помутніння - позитивний (+), пластівцеподібна каламуть (++), пластівці, нитки - (+++), гелеподібний осад - (++++).