Центрифугують (п. 3.8) протягом 10 хв з прискоренням 1200-1400 g. Плазму крові переносять дозатором лабораторним (п. 3.4) у пробірку поліетиленову (п. 3.11).
Вимоги до зразків плазми крові установлюються у розділах преаналітики посібників з клінічної лабораторної діагностики.
8.4. Одержання стандартної донорської плазми крові.
Для приготування стандартної донорської ї плазми крові необхідно змішати у рівних співвідношеннях плазму крові більш ніж 7 донорів, отриману, як вказано в п. 8.4, розфасувати по 1-2 мл у пробірки поліетиленові (п. 3.11), заморозити та зберігати протягом двох тижнів при температурі мінус 20 град. С.
Безпосередньо перед виконанням вимірювань плазму крові розморожують у бані водяній лабораторній (п. 3.4) при 37 град. С (до повного відтаювання пробірку не струшувати). Після відтаювання плазма повинна бути абсолютно прозорою.
9. ХІД ВИЗНАЧЕННЯ
9.1. В пробірку мірну лабораторну (п. 3.10) вносять 0,1 мл розчину кальцію хлористого (п. 8.2.5) та 0,1 мл суспензії тромбопластину (п. 8.2.6). Суміш інкубують 60 с на бані водяній лабораторній (п. 3.3) при температурі 37 град. С.
9.2. До тромбопластин-кальцієвої суміші додають 0,1 мл плазми, що досліджується (п. 8.3), включають секундомір (п. 3.6). Пробірки з реагентами через кожні 1-2 секунди нахиляють на 45 градусів і визначають час утворення згустку. Критерієм закінчення реакції є утворення гелю.
Час зсідання стандартної донорської плазми крові в тесті 16-18 секунд. Результати вимірювань представляють у вигляді протромбінового індексу (ПІ) п. 4.
Примітки:
1. Протромбіновий індекс зсідання стандартної донорської плазми крові визначають кожний раз перед роботою з тромбопластином нової серії.
2. При лікуванні антикоагулянтами непрямої дії користуються прямо протилежним відношенням. MHB - міжнародне нормалізоване відношення (INR - Іnternetіonal Normalіzed Ratіo) відповідає відношенню протромбінового часу зсідання плазми крові, що досліджується до протромбінового часу зсідання стандартної донорської плазми крові. Оптимальна величина MHB при лікуванні антикоагулянтами непрямої дії складає 2,0-3,0.
10. ОБРОБКА ТА ОФОРМЛЕННЯ РЕЗУЛЬТАТІВ ВИМІРЮВАНЬ
10.1. За результат вимірювання приймають середнє значення
(х ,%) двох паралельних вимірювань, яке розраховується за
ср
формулою:
х = ( х + х )/2,
ср 1 2
де х ,х - значення, отримані у двох паралельних вимірюваннях.
1 2
10.2. Результати вимірювань заносяться до облікової медичної документації, затвердженої наказом МОЗ України від 04.01.01 N 1:
- форма 237/о - "Аналіз крові (показники системи згортання)";
- форма 238/о - "Аналіз крові (показники системи згортання - скорочений варіант)";
- форма 250/о - "Журнал реєстрації аналізів і їх результатів";
- форма 262/о - "Журнал обліку аналізів, зроблених в лабораторії".
11. КОНТРОЛЬ ПОХИБКИ ВИМІРЮВАНЬ
11.1. Визначення систематичної похибки вимірювань за даною методикою проводиться методом паралельних проб. Для цього проводять по два паралельних вимірювання 10 проб пацієнтів поточного дня.
11.2. Вимірювання часу зсідання плазми крові в тесті ПЧ проводять відповідно до розділу 9.
11.3. Отримані дані заносять у таблицю 2.
Таблиця 2
------------------------------------------------------------------
| N | Х | Х | Х - Х |( Х - Х ) в степені 2|
| | 1 | 2 | 1 2 | 1 2 |
|---+---------+---------+----------------+-----------------------|
------------------------------------------------------------------
11.4. За отриманими результатами вимірювань розраховується середнє значення показників (п. 10.1), середньоквадратичне відхилення (дельта) та коефіцієнт варіації (V). Результати розрахунків порівнюються з величинами, наведеними в таблиці 1 розділу 2.
11.5. Будують контрольну карту кумулятивних сум.
11.6. Кожного дня різницю між двома паралельними вимірюваннями проб, відмічають на карті. Результати, які попадають за межі контрольних вимірювань (2дельта) вказують на наявність недоліків в системі вимірювання.
11.7. Якщо отримані результати вимірів не відповідають вимогам розділу 2 та п. 11.6, то виміри необхідно повторити.
11.8. Якщо результати повторного контролю незадовільні, то виконання вимірювань необхідно припинити, виявити та усунути причини, які до цього призвели.
12. ПОСИЛАННЯ НА НОРМАТИВНІ ДОКУМЕНТИ
------------------------------------------------------------------
| Документ | Найменування | N пункту |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 24104-88Е |Весы лабораторные общего | 8.2.1; |
| |назначения и образцовые. | 8.2.2; |
| |Общие технические условия | 8.2.4; |
| | | 8.2.5; |
| | | 8.2.6 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 7328-82 |Меры массы общего назначения | 8.2.1; |
| |и образцовые. Технические | 8.2.2; |
| |условия | 8.2.4; |
| | | 8.2.5; |
| | | 8.2.6 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 25-05.2147-78 |Іономір універсальний ЕВ-74 | 8.2.1 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 64-1-2850-80 |Баня водяна лабораторна | 9.1; 9.2 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 28311-89 |Дозаторы медицинские | 8.2.6; |
| |лабораторные. Общие | 8.3; 8.4;|
| |технические требования и | 9.1; 9.2 |
| |методы испытаний | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 13646-68 |Термометры стеклянные | 9.1; 9.2 |
| |ртутные для точных измерений | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 25-1819.0021-90 |Секундомір механічний "Слава" | 9.1; 9.2 |
| |з ДСПР 1-2-000. Технічні умови| |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 5-375-4215-77 |Центрифуга ЦЛР-1 | 8.3; 8.4 |
| | | 8.2.6 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 1770-74 |Посуда мерная лабораторная | 8.2.1; |
| |стеклянная. Цилиндры, | 8.2.2; |
| |мензурки, колбы, пробирки. | 8.2.3; |
| |Технические условия | 8.2.4; |
| | | 8.2.5; |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 98-891-021-91Е |Пробірки мірні лабораторні | 9.1; 9.2 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 208 УССР 273-84 |Пробірки поліетиленові | 8.2.6; |
| | | 8.3; 8.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 64-2-407-89 |Банки и флаконы с притертой | 8.2.1; |
| |пробкой | 8.2.2; |
| | | 8.2.3; |
| | | 8.2.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 6709-79 |Вода дистильована | 8.2.1; |
| | | 8.2.2; |
| | | 8.2.4; |
| | | 8.2.5 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 6-09-2082-78 |Натрій 5,5'- | 8.2.1 |
| |диетилбарбітуровокислий | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 4233-77 |Натрій хлористий | 8.2.1; |
| | | 8.2.2 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 22280-76 |Натрій лимоннокислий 5,5 | 8.2.4 |
| |водний | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 3118-77 |Фіксонал соляної кислоти | 8.2.1 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ |Тромбопластин | 8.2.6 |
|9398-254-05595541-97 | | |
|(Ренам, Росія) | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Мінхімпромом СРСР |"Правила техніки безпеки при | 5 |
|від 27.07.77: |експлуатації електроустановок"| |
|НАОП 1.1.10-1.01-85 | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України |"Про подальше удосконалення | 5 |
|від 19.12.97 N 359 |атестації лікарів" | |
|( z0014-98 ) та від | | |
|23.10.91 N 146 | | |
|( v0146282-91 ) | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України від |"Про атестацію середніх | 5 |
|23.10.91 N 146 |медичних працівників" | |
|( v0146282-91 ) | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України |"Про затвердження медичної | 10.2 |
|від 04.01.01 N 1 |облікової документації, що | |
|( v0001282-01 ) |використовується в | |
| |лабораторіях | |
| |лікувально-профілактичних | |
| |закладів" | |
------------------------------------------------------------------
Міністерство охорони здоров'я України
ЗАТВЕРДЖЕНО
Наказ МОЗ України
15.11.2002 N 417
МЕТОДИКА ВИКОНАННЯ
ВИМІРЮВАННЯ ЧАСУ ЗСІДАННЯ КАПІЛЯРНОЇ КРОВІ ЛЮДИНИ В ТЕСТІ ВИЗНАЧЕННЯ АКТИВНОСТІ ПРОТРОМБІНОВОГО КОМПЛЕКСУ (ПРОТРОМБІНОВИЙ АБО ТРОМБОПЛАСТИНОВИЙ ЧАС) МВВ 42.01-11-2002
ПОГОДЖЕНО
Головний метролог
МОЗ України
А.М.Ніколенко
10.10.2002
ПОГОДЖЕНО
Головний спеціаліст з
клінічної лабораторної
діагностики МОЗ України
В.А.Дєєв
10.10.2002
1. ГАЛУЗЬ ЗАСТОСУВАННЯ
Документ встановлює порядок виконання вимірювання часу зсідання капілярної крові людини в тесті протромбіновий час (тромбопластиновий час) (ПЧ) та визначення протромбінового індексу.
Методика призначена для використання у закладах охорони здоров'я.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА ПОХИБКИ ВИЗНАЧЕННЯ
Методика забезпечує вимірювання часу зсідання капілярної крові людини в тесті протромбіновий час (тромбопластиновий час) за характеристиками, наведеними у таблиці 1.
Таблиця 1
------------------------------------------------------------------
|Діапазон вимірювань,| Середньоквадратичне |Коефіцієнт варіації,|
| с | відхилення, | V(%) |
| | дельта (с) | |
|--------------------+----------------------+--------------------|
| 9 - 20 | +- 1,5 | 9 |
------------------------------------------------------------------
3. ЗАСОБИ ВИМІРЮВАЛЬНОЇ ТЕХНІКИ, ДОПОМІЖНЕ ОБЛАДНАННЯ, РЕАКТИВИ І МАТЕРІАЛИ
3.1. Ваги 2 кл. точності ГОСТ 24104-88Е
3.2. Важки лабораторні 2 кл. точності ГОСТ 7328-82Е
3.3. Баня водяна ТУ 64-1-2850-80
3.4. Дозатори медичні лабораторні ГОСТ 28311-89.
3.5. Іономір універсальний ЕВ-74 ТУ 25-05.2147-78
3.6. Секундомір механічний ТУ 25-1819.0021-90
3.7. Термометр скляний ртутний для точних вимірювань ГОСТ
13646-68
3.8. Центрифуга ЦЛР-1 ТУ 5-375-4215-77
3.9. Скарифікатори для проколу шкіряного покриву
ТУ 6-1-2100-76Е
3.10. Колби мірні місткістю від 100,0 до 1000,0 мл ГОСТ 1770-74.
3.11. Мікропіпетка місткістю 0,1 мл ГОСТ 28311-89
3.12. Пробірки мірні лабораторні місткістю 10 мл ТУ
98-891-021-91Е
3.13. Пробірки поліетиленові місткістю (10-15) мл ТУ 208 УССР
273-84
3.14. Флакони з темного скла з притертим корком ТУ
64-2-407-89
3.15. Циліндри від 100 мл та на 1000 мл ГОСТ 1770-74
3.16. Вода дистильована ГОСТ 6709-7913
3.17. Кальцій хлористий ГОСТ 4161-77
3.18. Натрій 5,5-диетилбарбітуровокислий ТУ 6-09-2082-78
3.19. Натрій лимоннокислий 5,5 водний ГОСТ 22280-76
3.20. Натрій хлористий ГОСТ 4233-77
3.21. Спирт етиловий ректифікований ГОСТ 5962-67
3.22. Тромбопластин ТУ 9398-254-05595541-97 (Ренам, Росія)
3.23. Фіксанал кислоти соляної ГОСТ 3118-77
Всі засоби вимірювальної техніки повинні бути повірені у встановленому порядку. Допускається застосування іншого обладнання, лабораторного посуду, а також реактивів і матеріалів з метрологічними та технічними характеристиками не нижчими, ніж наведені.
4. МЕТОД ВИЗНАЧЕННЯ
Метод визначення часу зсідання капілярної крові в тесті протромбіновий час (ПЧ) базується на вимірюванні часу згортання капілярної крові в присутності тканинного тромбопластину та кальцію хлористого.
5. ВИМОГИ ТЕХНІКИ БЕЗПЕКИ
При виконанні вимірювань необхідно дотримуватись вимог НАОП 1.3.10-1.06-77 "Загальні правила безпеки роботи в хімічних лабораторіях", затверджених 27.07.77 Мінхімпромом СРСР: НАОП 1.1.10-1.01-85 "Правила техніки безпеки при експлуатації електроустановок", затверджено 10.09.85 Міненерго СРСР та ЦК галузевої профспілки; правил безпеки роботи, що представлені в експлуатаційній документації на засоби вимірювальної техніки та допоміжні пристрої.
6. ВИМОГИ ДО КВАЛІФІКАЦІЇ ВИКОНАВЦЯ
До виконання методики допускаються спеціалісти із спеціальною освітою, які відповідають кваліфікаційним вимогам відповідно до наказів МОЗ України від 19.12.97 N 359, від 23.10.91 N 146, та пройшли курси з клінічної лабораторної діагностики у державних навчальних закладах освіти системи МОЗ України різного рівня акредитації, наукових закладах або таких, що до них прирівняні, і мають право видавати документи державного зразка згідно з чинним законодавством України.
7. УМОВИ ВИКОНАННЯ ВИМІРЮВАНЬ
При проведені вимірювань повинні бути забезпечені наступні умови:
7.1. Температура середовища (22+-5) град. С.
7.2. Відносна вологість від 60% до 75%.
7.3. Атмосферний тиск від 84,0 до 106,7 кПа (від 600,0 до 800,3 мм рт.ст).
7.4. Напруга електромережі (220+-22) В.
7.5. Освітленість від 300 до 400 лк.
8. ПІДГОТОВКА ТА ВИКОНАННЯ ВИМІРЮВАНЬ
8.1. Усі засоби вимірювальної техніки та допоміжне обладнання привести в робочий стан згідно з інструкціями по експлуатації.
8.2. Приготування розчинів.
8.2.1. Приготування буферу Міхаеліса (рН 7,4+-0,1).
Розчин А. Наважку (20,60+-0,01) г натрію 5,5'-диетилбарбітуровокислого (п. 3.18) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.10), розчиняють у дистильованій воді (п. 3.16) і об'єм розчину доводять до мітки. Розчин зберігається у флаконах з темного скла з притертим корком (п. 3.14) протягом одного місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
Розчин Б. Фіксанал соляної кислоти 0,1 моль/л (п. 3.23) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.10) і об'єм розчину доводять до мітки дистильованою водою (п. 3.16). Розчин зберігається у флаконах з темного скла з притертим корком (п.3.14) протягом одного місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
Розчин В. Наважку (7,30+-0,01) г натрію хлористого (п. 3.20) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.10), відміряють циліндром (п. 3.15) 290 мл розчину А і 210 мл розчину Б, додають в колбу та об'єм доводять до мітки. рН буферу перевіряють на іонометрі універсальному (п. 3.5). Буфер зберігають у флаконах з темного скла з притертим корком (п. 3.14) протягом місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
8.2.2. Приготування розчину натрію хлористого з концентрацією 8,5 г/л.
Наважку (8,50+-0,01) г натрію хлористого (п. 3.20) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.10), розчиняють у дистильованій воді (п. 3.16) і доводять об'єм розчину до мітки. Розчин зберігається у флаконах з темного скла з притертим корком (п. 3.14) протягом одного місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
8.2.3. Приготування розчину забуференого фізіологічного (рН 7,4+-0,1).
Змішують 4 об'єми розчину натрію хлористого (8,5 г/л) (п. 8.2.2) з 1 об'ємом буферу Міхаеліса (п. 8.2.1). Зберігати розчин при температурі від 4 до 8 град. С протягом місяця.
8.2.4. Приготування розчину натрію лимоннокислого (3,8 г на 100 г розчину).
Наважку (3,80+-0,01) г натрію лимоннокислого (п. 3.19) розчиняють у 96,2 мл дистильованої води (п. 3.16), яку відміряють циліндром (п. 3.15). Зберігають розчин при температурі від 4 до 6 град. С протягом одного тижня.
8.2.5. Приготування 0,025 моль/л розчину кальцію хлористого.
Наважку (2,77+-0,01) г кальцію хлористого (п. 3.17) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.10) та розчиняють у дистильованій воді (п. 3.16), об'єм розчину доводять до мітки. Розчин зберігають у флаконах темного скла з притертим корком (п. 3.14) при температурі від 4 до 6 град. С протягом місяця.
8.2.6. Приготування суспензії тромбопластину.
Наважку (20,0+-0,1) мг тромбопластину (п. 3.22) перемішують з 1 мл забуференого фізіологічного розчину (п. 8.2.3), який відміряють дозатором лабораторним (п. 3.4). Суспензію центрифугують 3-7 хв з прискоренням 200-300 g та дозатором лабораторним (п. 3.4) рідину переносять в пробірку поліетиленову (п. 3.13). Перед використанням суспензію перемішують.
Активність тромбопластину перевіряють по часу зсідання стандартної донорської плазми крові:
1. В пробірку скляну (п. 3.12) вносять 0,1 мл розчину кальцію хлористого (п. 8.2.5) та 0,1 мл суспензії тромбопластину (п. 8.2.6). Суміш інкубують 60 с на бані водяній (п. 3.3) при температурі 37 град. С.
2. До тромбопластин-кальцієвої суміші додають 0,1 мл стандартної донорської плазми крові, включають секундомір (п.3.6). Пробірки через кожні 1-2 секунди нахиляють на 45 градусів і виміряють час появи ниток або згустку фібрину. Час зсідання 0,1 мл стандартної донорської плазми крові дорівнює 16-18 с.
8.3. Одержання стандартної донорської плазми крові.
Кров у донорів беруть натщесерце з вени гострою сухою голкою з широким діаметром, без шприца (для запобігання гемолізу). При заборі крові перші 5-6 крапель відкидають. Під час взяття крові не рекомендується накладати джгут і робити масаж передпліччя для запобігання активації зсідання крові і фібринолізу.
У пробірку поліетиленову (п. 3.13) дозатором лабораторним (п. 3.4) вносять 0,5 мл розчину натрію лимоннокислого (п. 8.2.4) та змішують з 4,5 мл крові (співвідношення 1:9). Пробірку з сумішшю щільно закривають корком і повільними рухами обережно декілька разів перемішують (не струшуючи).
Центрифугують (п. 3.8) протягом 10 хв з прискоренням 1200-1400 g. Плазму крові переносять дозатором лабораторним (п. 3.4) у пробірку поліетиленову (п. 3.13).
Для приготування стандартної донорської плазми крові необхідно змішати у рівних співвідношеннях плазму крові більш ніж 7 донорів, розфасувати по 1-2 мл у пробірки поліетиленові (п. 3.13), заморозити та зберігати протягом двох тижнів при температурі мінус 20 град. С.
Вимоги до зразків плазми крові установлюються у розділах преаналітики посібників з клінічної лабораторної діагностики.
9. ХІД ВИЗНАЧЕННЯ
9.1. В пробірку мірну (п. 3.12) вносять 0,1 мл розчину хлористого кальцію (п. 8.2.5) та 0,1 мл суспензії тромбопластину (п. 8.2.6). Суміш інкубують 60 с на бані водяній (п. 3.3) при температурі 37 град. С.
9.2. В суху стерильну мікропіпетку (п. 3.11) місткістю 0,1 мл (окремо для кожного хворого) набирають 0,02 мл розчину натрію лимоннокислого (п. 8.2.4) і переносять в пробірку мірну (п. 3.12). М'якоть пальця протирають спиртом етиловим ректифікованим (п.3.21) і дають просохнути, після чого стерильним скарифікатором (п.3.9) роблять прокол шкіряного покриву. У мікропіпетку (п. 3.11) набирають 0,08 мл вільно виступаючої крові, видувають її в пробірку з розчином натрію лимоннокислого (п. 8.2.4) і перемішують. Таким чином набирають кров одного хворого у 2-3 пробірки і інкубують на бані водяній (п. 3.3) при температурі 37 град. С 1 хв.
9.3. Через 1 хв додають 0,2 мл підігрітої на бані водяній лабораторній (п. 3.3) до температури 37 град. С тромбопластин-кальцієвої суміші (п. 9.1) та включають секундомір (п. 3.6). Пробірки з реагентами через кожні 1-2 секунди нахиляють на 45 градусів і визначають час утворення згустку. Критерієм закінчення реакції є утворення гелю. Час зсідання донорської капілярної крові - 12-15 с.
Протромбіновий індекс зсідання донорської капілярної крові визначають кожний раз перед роботою з тромбопластином нової серії.
Результати вимірювань представляють у вигляді протромбінового індексу (ПІ), який відповідає відношенню часу зсідання донорської капілярної крові до часу зсідання капілярної крові хворого. Результати представляють у відсотках:
ПІ = х 100,
( А/В )
де А - протромбіновий час зсідання донорської капілярної крові, В - протромбіновий час зсідання капілярної крові, що досліджується.
При лікуванні антикоагулянтами непрямої дії користуються прямо протилежним відношенням. МНВ - міжнародне нормалізоване відношення (INR - Internetional Normalized Ratio), яке відповідає відношенню протромбінового часу зсідання капілярної крові, що досліджується до протромбінового часу зсідання донорської капілярної крові. Оптимальна величина МНВ при лікуванні антикоагулянтами непрямої дії складає 2,0-3,0.
10. ОБРОБКА ТА ОФОРМЛЕННЯ РЕЗУЛЬТАТІВ ВИМІРЮВАНЬ
10.1. За результат вимірювання приймають середнє значення
(х ,%) двох паралельних вимірювань, яке розраховується за
ср
формулою:
х = (х + х )/2,
ср 1 2
де х , х - значення, отримані у двох паралельних вимірюваннях.
1 2
10.2. Результати вимірювань заносяться до облікової медичної документації, затвердженої наказом МОЗ України від 04.01.01 N 1:
- форма 237/о - "Аналіз крові (показники системи згортання)";
- форма 238/о - "Аналіз крові (показники системи згортання - скорочений варіант)";
- форма 250/о - "Журнал реєстрації аналізів і їх результатів";
- форма 262/о - "Журнал обліку аналізів, зроблених в лабораторії".
11. КОНТРОЛЬ ПОХИБКИ ВИМІРЮВАНЬ
11.1. Визначення систематичної похибки вимірювань за даною методикою проводиться методом паралельних проб. Для цього проводять по два паралельних вимірювання 10 проб пацієнтів поточного дня.
11.2. Вимірювання часу зсідання плазми крові в тесті ПЧ зсідання капілярної крові проводять відповідно до розділу 9.
11.3. Отримані дані заносять у таблицю 2.
Таблиця 2
------------------------------------------------------------------
| N | Х | Х | Х - Х |( Х - Х ) в степені 2|
| | 1 | 2 | 1 2 | 1 2 |
|---+---------+---------+----------------+-----------------------|
------------------------------------------------------------------
11.4. За отриманими результатами вимірювань розраховується середнє значення показників (п. 10.1), середньоквадратичне відхилення (дельта) та коефіцієнт варіації (V). Результати розрахунків порівнюються з величинами, наведеними в таблиці 1 розділу 2.
11.5. Будують контрольну карту кумулятивних сум.
11.6. Кожного дня різницю між двома паралельними вимірюваннями проб, відмічають на карті. Результати, які попадають за межі контрольних вимірювань (2дельта) вказують на наявність недоліків в системі вимірювання.
11.7. Якщо отримані результати вимірів не відповідають вимогам розділу 2 та п. 11.6, то виміри необхідно повторити.
11.8. Якщо результати повторного контролю незадовільні, то виконання вимірювань необхідно припинити, виявити та усунути причини, які до цього призвели.
12. ПОСИЛАННЯ НА НОРМАТИВНІ ДОКУМЕНТИ
------------------------------------------------------------------
| Документ | Найменування | N пункту |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 24104-88 Е |Весы лабораторные общего | 8.2.1; |
| |назначения и образцовые. | 8.2.2; |
| |Общие технические условия | 8.2.4; |
| | | 8.2.5; |
| | | 8.2.6 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 7328-82 Е |Меры массы общего назначения | 8.2.1; |
| |и образцовые. Технические | 8.2.2; |
| |условия | 8.2.4; |
| | | 8.2.5; |
| | | 8.2.6 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 25-05.2147-78 |Іономір універсальний ЕВ-74 | 8.2.1 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 64-1-2850-80 |Баня водяна лабораторна | 9.1; 9.2 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 28311-89 |Дозаторы медицинские | 8.2.6; |
| |лабораторные. Общие | 8.3; 8.4;|
| |технические требования и | 9.1; 9.2 |
| |методы испытаний | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 13646-68 |Термометры стеклянные | 9.1; 9.2 |
| |ртутные для точных измерений | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 25-1819.0021-90 |Секундомір механічний "Слава" | 9.1; 9.2 |
| |з ДСПР 1-2-000. Технічні умови| |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 6-1-2100-76Е |Скарифікатори-коп'я для | 9.1 |
| |для проколу шкіряного покриву | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 5-375-4215-77 |Центрифуга ЦЛР-1 | 8.3; 8.4;|
| | | 8.2.6 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 1770-74 |Посуда мерная лабораторная | 8.2.1; |
| |стеклянная. Цилиндры, | 8.2.2; |
| |мензурки, колбы, пробирки. | 8.2.3; |
| |Технические условия | 8.2.4; |
| | | 8.2.5 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 98-891-021-91Е |Пробірки мірні лабораторні | 9.1; 9.2 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 208 УССР 273-84 |Пробірки поліетиленові | 8.2.6; |
| | | 8.3; 8.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 64-2-407-89 |Банки и флаконы с притертой | 8.2.1; |
| |пробкой | 8.2.2; |
| | | 8.2.3; |
| | | 8.2.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 6709-79 |Вода дистильована | 8.2.1; |
| | | 8.2.2; |
| | | 8.2.4; |
| | | 8.2.5 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 6-09-2082-78 |Натрій 5,5'- | 8.2.1 |
| |диетилбарбітуровокислий | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 4233-77 |Натрій хлористий | 8.2.1; |
| | | 8.2.2 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 22280-76 |Натрій лимоннокислий 5,5 | 8.2.4 |
| |водний | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 5962-67 |Спирт етиловий ректфікований | 9.1 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ |Тромбопластин | 8.2.6 |
|9398-254-05595541-97 | | |
|(Ренам, Росія) | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Мінхімпромом СРСР |"Правила техніки безпеки при | 5 |
|від 27.07.77: |експлуатації електроустановок"| |
|НАОП 1.1.10-1.01-85 | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України |"Про подальше удосконалення | 5 |
|від 19.12.97 N 359 |атестації лікарів" | |
|( z0014-98 ) та від | | |
|23.10.91 N 146 | | |
|( v0146282-91 ) | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України від |"Про атестацію середніх | 5 |
|23.10.91 N 146 |медичних працівників" | |
|( v0146282-91 ) | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України |"Про затвердження медичної | 10.2 |
|від 04.01.01 N 1 |облікової документації, що | |
|( v0001282-01 ) |використовується в | |
| |лабораторіях | |
| |лікувально-профілактичних | |
| |закладів" | |
------------------------------------------------------------------
Міністерство охорони здоров'я України
ЗАТВЕРДЖЕНО
Наказ МОЗ України
15.11.2002 N 417
МЕТОДИКА ВИКОНАННЯ
ВИМІРЮВАННЯ ЧАСУ ЗСІДАННЯ ПЛАЗМИ КРОВІ ЛЮДИНИ В ТЕСТІ ВИЗНАЧЕННЯ АКТИВНОСТІ ПРОТРОМБІНОВОГО КОМПЛЕКСУ ЗА КВІКОМ МВВ 42.01-12-2002
ПОГОДЖЕНО
Головний метролог
МОЗ України
А.М.Ніколенко
10.10.2002
ПОГОДЖЕНО
Головний спеціаліст з
клінічної лабораторної
діагностики МОЗ України
В.А.Дєєв
10.10.2002
1. ГАЛУЗЬ ЗАСТОСУВАННЯ
Документ встановлює порядок виконання вимірювання протромбінового часу зсідання плазми крові в тесті визначення активності протромбінового комплексу за Квіком.
Методика призначена для використання у закладах охорони здоров'я.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА ПОХИБКИ ВИЗНАЧЕННЯ
Методика забезпечує вимірювання часу зсідання плазми крові людини в тесті протромбіновий час (тромбопластиновий час) за характеристиками, наведеними у таблиці 1.
Таблиця 1
------------------------------------------------------------------
|Діапазон вимірювань,|Межа відносної похибки|Коефіцієнт варіації,|
| с | вимірювань, | V(%) |
| | дельта (с) | |
|--------------------+----------------------+--------------------|
| 9 - 20 | +- 1,2 | 9 |
------------------------------------------------------------------
3. ЗАСОБИ ВИМІРЮВАННОЇ ТЕХНІКИ, ДОПОМІЖНЕ ОБЛАДНАННЯ, РЕАКТИВИ І МАТЕРІАЛИ
3.1. Ваги 2 кл. точності ГОСТ 24104-88Е
3.2. Важки лабораторні 2 кл. точності ГОСТ 7328-82Е
3.3. Баня водяна ТУ 64-1-2850-80
3.4. Дозатори медичні лабораторні ГОСТ 28311-89
3.5. Іономір універсальний ЕВ-74 ТУ 25-05.2147-78
3.6. Секундомір механічний ТУ 25-1819.0021-90
3.7. Термометр ТБ-3М1 ТУ 25-2022.0003-89
3.8. Центрифуга ЦЛР-1 ТУ 5-375-4215-77
3.9. Колби мірні від 100,0 до 1000,0 мл ГОСТ 1770-74
3.10. Пробірки поліетиленові місткістю (10-15) мл ТУ 208 УССР
273-84
3.11. Пробірки мірні лабораторні на 10 мл ТУ 98-891-021-91Е
3.12. Флакони з темного скла з притертим корком ТУ
64-2-407-89
3.13. Циліндри від 100 мл та на 1000 мл ГОСТ 1770-74
3.14. Білогарифмічний папір ТУ 13-0248643-794-89
3.15. Вода дистильована ГОСТ 6709-7913
3.16. Кальцій хлористий ГОСТ 4161-77
3.17. Натрій 5,5-диетилбарбітуровокислий ТУ 6-09-2082-78
3.18. Натрій лимоннокислий 5,5 водний ГОСТ 22280-76
3.19. Натрій хлористий ГОСТ 4233-77
3.20. Тромбопластин ТУ 9398-254-05595541-97 (Ренам, Росія)
3.21. Фіксанал соляної кислоти ГОСТ 3118-77
Всі засоби вимірювальної техніки повинні бути повірені у встановленому порядку. Допускається застосування іншого обладнання, лабораторного посуду, а також реактивів і матеріалів з метрологічними та технічними характеристиками не нижчими, ніж наведені.
4. МЕТОД ВИЗНАЧЕННЯ
Метод базується на визначенні часу зсідання плазми крові в присутності тканинного тромбопластину та кальцію хлористого.
Розраховують активність факторів протромбінового комплексу за допомогою градуювального графіку. Активність факторів протромбінового комплексу стандартної донорської плазми крові приймають за 100%
5. ВИМОГИ ТЕХНІКИ БЕЗПЕКИ
При виконанні вимірювань необхідно дотримуватись вимог НАОП 1.3.10-1.06-77 "Загальні правила безпеки роботи в хімічних лабораторіях", затверджених 27.07.77 Мінхімпромом СРСР: НАОП 1.1.10-1.01-85 "Правила техніки безпеки при експлуатації електроустановок", затверджено 10.09.85 Міненерго СРСР та ЦК галузевої профспілки; правил безпеки роботи, що представлені в експлуатаційній документації на засоби вимірювальної техніки та допоміжні пристрої.
6. ВИМОГИ ДО КВАЛІФІКАЦІЇ ВИКОНАВЦЯ
До виконання методики допускаються спеціалісти із спеціальною освітою, які відповідають кваліфікаційним вимогам відповідно до наказів МОЗ України від 19.12.97 N 359, від 23.10.91 N 146, та пройшли курси з клінічної лабораторної діагностики у державних навчальних закладах освіти системи МОЗ України різного рівня акредитації, наукових закладах або таких, що до них прирівняні, і мають право видавати документи державного зразка згідно з чинним законодавством України.
7. УМОВИ ВИКОНАННЯ ВИМІРЮВАНЬ
При проведені вимірювань повинні бути забезпечені наступні умови:
7.1. Температура середовища (22+-5) град. С.
7.2. Відносна вологість від 60% до 75%.
7.3. Атмосферний тиск від 84,0 до 106,7 кПа (від 600,0 до 800,3 мм рт.ст).
7.4. Напруга електромережі (220+-22) В.
7.5. Освітленість від 300 до 400 лк.
8. ПІДГОТОВКА ТА ВИКОНАННЯ ВИМІРЮВАНЬ
8.1. Усі засоби вимірювальної техніки та допоміжне обладнання привести в робочий стан згідно з інструкціями по експлуатації.
8.2. Приготування розчинів.
8.2.1. Приготування буферу Міхаеліса (рН 7,4+-0,1).
Розчин А. Наважку (20,60+-0,01) г натрію 5,5'-диетилбарбітуровокислого (п. 3.17) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.9), розчиняють у дистильованій воді (п. 3.15) і об'єм розчину доводять до мітки. Розчин зберігається у флаконах з темного скла з притертим корком (п. 3.12) протягом одного місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
Розчин Б. Фіксанал кислоти соляної 0,1 моль/л (п. 3.21) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.9) і об'єм розчину доводять до мітки дистильованою водою (п. 3.15). Розчин зберігається у флаконах з темного скла з притертим корком (п.3.12) протягом одного місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
Розчин В. Наважку (7,30+-0,01) г натрію хлористого (п. 3.19) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.9), відміряють циліндром (п. 3.13) 290 мл розчину А і 210 мл розчину Б, додають в колбу та об'єм доводять до мітки. Перевіряють на іономірі універсальному (п. 3.5) рН буферу. Буфер зберігають у флаконах з темного скла з притертим корком (п. 3.12) протягом місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
8.2.2. Приготування розчину натрію хлористого з концентрацією 8,5 г/л.
Наважку (8,50+0,01) г натрію хлористого (п. 3.18) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.9), розчиняють у дистильованій воді (п. 3.14) і доводять об'єм розчину до мітки. Розчин зберігають у флаконах з темного скла з притертим корком (п. 3.12) протягом одного місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
8.2.3. Приготування розчину забуференого фізіологічного (рН (7,4+-0,1)).
Змішують 4 об'єми розчину натрію хлористого (8,5 г/л) (п. 8.2.2) з 1 об'ємом буферу Міхаеліса (п. 8.2.1). Розчин зберігають при температурі від 4 до 8 град. С протягом місяця.
8.2.4. Приготування розчину натрію лимоннокислого (3,8 г на 100 г розчину).
Наважку (3,80+-0,01) г натрію лимоннокислого 5,5 водного (п. 3.18) розчиняють у 96,2 мл дистильованої води (п. 3.15), яку відміряють циліндром (п. 3.13). Розчин зберігають при температурі від 4 до 6 град. С протягом одного тижня.
8.2.5. Приготування 0,025 моль/л розчину кальцію хлористого.
Наважку (2,77+-0,01) г кальцію хлористого (п. 3.16) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.9) та розчиняють у дистильованій воді (п. 3.15), об'єм розчину доводять до мітки. Розчин зберігають у флаконах темного скла з притертим корком (п. 3.12) при температурі від 4 до 6 град. С протягом місяця.
8.2.6. Приготування суспензії тромбопластину.
Наважку (20,0+-0,1) мг тромбопластину (п. 3.20) перемішують з 1 мл забуференого фізіологічного розчину (п. 8.2.3), який відміряють дозатором лабораторним (п.3.4). Суспензію центрифугують 3-7 хвилин з прискоренням 200-300 g і дозатором лабораторним (п. 3.4) рідину переносять в пробірку поліетиленову (п. 3.10). Перед використанням суспензію перемішують.
Перевірка активності суспензії тромбопластину.
1. В пробірку скляну (п. 3.11) вносять 0,1 мл розчину кальцію хлористого (п. 8.2.5) та 0,1 мл суспензії тромбопластину (п. 8.2.6). Суміш інкубують 60 с на бані водяній лабораторній (п. 3.3) при температурі 37 град. С.
2. До тромбопластин-кальцієвої суміші додають 0,1 мл стандартної донорської плазми крові (п. 8.4), включають секундомір (п. 3.6). Пробірки через кожні 1-2 с нахиляють на 45 градусів і виміряють час появи ниток або згустку фібрину. Час зсідання 0,1 мл стандартної донорської плазми крові дорівнює 16-18 с.
8.3. Одержання плазми крові.
Кров у хворого беруть натщесерце з вени гострою сухою голкою з широким діаметром, без шприца (для запобігання гемолізу). При заборі крові перші 5-6 крапель відкидають. Під час взяття крові не рекомендується накладати джгут і робити масаж передпліччя для запобігання активації зсідання крові і фібринолізу. У пробірку поліетиленову (п. 3.10) дозатором лабораторним (п. 3.4) вносять 0,3-0,5 мл розчину натрію лимоннокислого (п. 8.2.4) та змішують відповідно з 3-5 мл крові. Пробірку з сумішшю щільно закривають корком і повільними рухами обережно декілька разів перемішують (не струшуючи).
Центрифугують (п. 3.8) протягом 10 хв з прискоренням 1200-1400 g. Плазму крові переносять дозатором лабораторним (п. 3.4) у пробірку поліетиленову (п. 3.10). Вимоги до зразків плазми крові установлюються у розділах преаналітики посібників з клінічної лабораторної діагностики.
8.4. Одержання стандартної донорської плазми крові.
Для приготування стандартної донорської плазми крові необхідно змішати у рівних співвідношеннях плазму крові більш ніж 7 донорів, отриману, як вказано в п. 8.4, розфасувати по 1-2 мл у пробірки поліетиленові (п. 3.10), заморозити та зберігати протягом двох тижнів при температурі мінус 20 град. С.