Про затвердження інструкцій, регламентуючих діяльність закладів служби крові України

Примітки:

1) Спецодяг і прибиральний матеріал занурюють у дезінфікуючий розчин за норми:

5 л на 1 кг сухої білизни з подальшим ополіскуванням у воді і пранням або кип'ятять у 2% розчині будь-якого миючого засобу протягом 30 хв.

2) Термін не регламентований.

3) Готують щоденно у разі використання суміші перекису водню з 0,5% миючим засобом (на 1 л 6 % перекису водню додати 5 г миючого засобу).

4) Для приготування освітлених розчинів хлорного вапна, НГК, ГКТ необхідно розмішати розраховану кількість препарату (порошку) і відстояти в закритому посуді в захищеному від прямих сонячних променів місці (протягом доби - для хлорного вапна, НГК і 1 год. - для ГКТ). Після цього лишок осаду злити в окрему ємкість і використовувати як освітлений робочий розчин протягом одного робочого дня.

5) Використовують сухе хлорне вапно, співвідношення препарату і відходів 1:5 (таке ж співвідношення для НГК та ГКТ).

6) Дезінфікуючий засіб не застосовують.

7) * Концентрація робочого дезінфікуючого розчину, % препарату.

8) ** Концентрація дезінфікуючого розчину, % активнодіючої речовини.

9) *** % активнодіючої речовини в препараті.

10) **** На кожну серію дезінфікуючої речовини необхідно мати заключення щодо її активності.

свіжоприготовленого (можна без натрію резазурину)

температури (45 +- 5) град. C)

середовища)

Вищезгадані поживні середовища стерилізують насиченою парою під тиском (0,11 +- 0,02) МПа (1,1 +- 0,2) кгс/кв. см) за температури (121 +- 1) протягом 15 хв.

Для визначення ростових властивостей тіогліколевого середовища використовують тест-культури мікроорганізмів:

Staphylococcus aureus 209 P

Clostridium sporogenes 272.

Відкривають ампулу з ліофілізованою культурою Staphylococcus aureus 209 P, стерильною пастерівською піпеткою додають 0,5 мл бульйону Хоттінгера або м'ясо-пептонного бульйону (додаток 2), ретельно перемішують до отримання гомогенної суспензії і переносять у пробірку з аналогічним середовищем. Посіви інкубують за температури від 30 до 35 град. C протягом (21 +- 3) год.

Потім культуру пересівають на чашки Петрі з агаром Хотгінгера або м'ясо-пептонним агаром, інкубують за вказаними вище умовами, виділяють типові колонії (гладенькі, з рівними краями, золотисто-жовтого кольору) і пересівають їх на скошений агар Хоттінгера або м'ясо-пептонний агар. Посіви інкубують у термостаті за температури від 30 до 35 град. C протягом (21 +- 3) год., потім витримують (21 +- 3) год. за кімнатної температури.

Культуральні властивості: культура на поверхні агару росте у вигляді рівного нальоту або гладеньких колоній з рівномірною золотисто-жовтою пігментацією.

Морфологічні властивості: в мазку, забарвленому за Грамом, повинні спостерігатись однорідні за розміром і розташовані у вигляді грона коки з добре виявленим грампозитивним забарвленням.

Культуру пересівають для зберігання в 5 - 10 пробірок, які вміщують по 10 мл напіврідкого агару. Посіви інкубують у термостаті за температури від 30 до 35 град. C протягом (21 +- 3) год. Потім пробки пробірок парафінують і закривають гумовими ковпачками. Після вирощування в термостаті культуру зберігають за температури від 2 до 10 град. C. Пересіви проводять не рідше одного разу на 4 міс.

Відкривають ампулу з ліофілізованою культурою Clostridium sporogenes 272, стерильною пастерівською піпеткою додають 1 мл попередньо регенерованого середовища Кітта-Тароцці (додаток 2), ретельно переміщують і гомогенну суспензію переносять у дві пробірки з тим же середовищем (посівний матеріал вносять на дно пробірки без видування).

Посіви інкубують за температури від 30 до 35 град. C протягом (21 +- 3) год.

Культуральні властивості: культура в напіврідкому середовищі, спочатку викликає дифузне помутніння, потім утворюються осад і надосадовий прозорий шар поживного середовища.

Морфологічні властивості: в мазку, забарвленому за Грамом, повинні спостерігатись великі грампозитивні спорові палички. Спори овальної форми, розташовуються субтермінально.

Культуру переносять для зберігання в 5 - 10 пробірок, які вміщують по 10 мл регенерованого середовища Кітта-Тароцці.

Для визначення чистоти культури у разі всіх пересівів рекомендується проводити висів на скошений агар Хоттінгера. Посіви інкубують у термостаті за температури від 30 до 35 град. C. Пробірки з культурою (друга генерація) запаюють або заливають поверх посіву шаром стерильного вазелінового масла висотою (1,5 +- 0,1) см. На пробки пробірок, у яких знаходиться культура, одягають гумові ковпачки.

Культури зберігають за температури від 2 до 10 град. C і пересівають на таке ж середовище не рідше одного разу на 4 міс.

(21 +- 3)-годинну культуру Staphylococcus aureus 209 P, що була вирощена на скошеному агарі Хоттінгера або м'ясо-пептонному агарі (друга генерація), змивають з поверхні агару стерильним ізотонічним розчином натрію хлориду (1,0 +- 0,1) мл і ретельно перемішують за допомогою стерильної піпетки. Потім деяку кількість одержаної суспензії переносять у порожню стерильну пробірку, доводять концентрацію мікробної зависі до 10 одиниць за стандартним зразком (ОСО 42-28-59-85).

Підведену до стандарту суспензію культури Staphylococcus aureus 209 P у кількості 1 мл переносять у першу з 8 пробірок, які вміщують по 9 мл стерильного ізотонічного розчину натрію хлориду. Це перше розведення тест-культури - 10^-1. Таким же чином послідовно отримують десятикратне розведення культури до восьмої пробірки (розведення 10^-8).

Для переносу зависі культури з однієї пробірки в іншу кожного разу необхідно користуватись окремою стерильною піпеткою об'ємом 1 мл.

Для контролю тіогліколевого середовища використовують розведення культури Staphylococcus aureus 209 P 10^-6, 10^-7, 10^-8.

Культуру Clostridium sporogenes 272, що була вирощена в середовищі Кітта-Тароцці (друга генерація)*, центрифугують у разі швидкості обертання під 2700 до 3000 об./хв. протягом (20 +- 1) хв., потім видаляють надосадову рідину.

* Для вирощування добової робочої культури Cl. sporogenes 272 можна використовувати тіогліколеве середовище, відконтрольоване за всіма показниками.

Одержану в осаді біомасу розводять стерильним ізотонічним розчином натрію хлориду до концентрації мікробної зависі, яка відповідає 10 одиницям за стандартним зразком мутності (ОСО 42-28-59-85). Під час роботи з анаеробною культурою перемішування здійснюють за допомогою піпетки. Для того, щоб уникнути попадання повітря в культуру, піпетку не виймають із рідини.

1 мл одержаної суспензії клітин стерильною піпеткою переносять у стерильну пробірку, яка вміщує 9 мл стерильного ізотонічного розчину натрію хлориду (розведення 10^-1). Одержану завись культури доводять до розведення 10^-8 десятикратними розбавленнями. Для контролю поживного середовища використовують розведення культури Clostridium sporogenes 272 10^-6, 10^-7, 10^-8.

По 0,1 мл мікробної зависі Staph. aureus 209 P (кожне з розведень 10^-6, 10^-7, і 10^-8) і Cl. sporogenes 272 (кожне з розведень 10^-6, 10^-7, 10^-8) вносять відповідно в три пробірки, що містять по 10 мл тіогліколевого середовища, занурюючи піпетку в середину стовпчика середовища. Посіви здійснюють починаючи з останнього розведення. Через (21 +- 3) год. і (45 +- 3) год. інкубації в термостаті за температури від 30 до 35 град. C проводять облік результатів.

Серію середовища визнають придатною за ростовими властивостями, якщо не пізніше (45 +- 3) год. інкубації посівів візуально виявляється ріст тест-культур Staph. aureus 209 P та Cl. sporogenes 272 із розведення 10^-7 не менше ніж у 2 із 3 засіяних пробірок.

Припускається можливість признати придатною серію середовища за таких результатів росту тест-штамів:

10^-6 - не менше ніж у 2 пробірках;

10^-7 - не менше ніж в 1 пробірці;

10^-8 - не менше ніж в 1 пробірці.

Якщо по закінченні гарантійного терміну якість поживного середовища не знизилась, воно підлягає подальшому використанню після переконтролю. Переконтроль середовища проводять у бактеріологічній лабораторії станції переливання крові.

У разі одержання позитивних результатів термін придатності поживного середовища подовжують на 1 рік.