Додаток 5
до Інструкції з мікробіологічної
діагностики туберкульозу
(пункт 11 розділу VI)
ОСНОВНІ ТЕСТИ
для відрізнення M. tuberculosis, M. bovis від інших мікобактерій
Тести | M. tuberculosis | M. bovis | Інші мікобактерії |
Ніациновий тест | + | - | - |
Ріст на середовищі Левенштейна-Єнсена з 500 мкг/мл ПНБК або саліциловокислого натрію | - | - | + |
Проба на термостабільність каталази | - | - | + |
Каталазна активність у гінк-резистентних штамів | +, ±, - | +, ±, - | + + + |
Основні тести, що відрізняють M. tuberculosis від M. bovis
Тести | M. tuberculosis | M. bovis |
Ніациновий тест | + | - |
Нікотинамідаза | + | - |
Відновлення нітратів | + | - |
I група - фотохромогенні мікобактерії
| +25 -°С | +37 -°С | +45 -°С | Відновлення нітратів | Гідроліз твіну-80 |
M. kansasii | + | ± | - | + | + |
M. simiae | + | ± | - | - | + |
M. marinum | + | ± | - | - | - |
Для розрізнення всередині групи потрібно провести такі тести:
на утворення пігменту;
на гідроліз твіну-80;
на ніацинову пробу (M. simiae ±);
на відновлення нітратів, на ріст за температури +25 -°C +37 -°C.
II група - скотохромогенні мікобактерії
Штами | +25 -°С | +37 -°С | +45 -°С | Відновлення нітратів | Уреаза | Гідроліз твіну-80 |
M. aquae (M. gordonae) | + | ± | - | - | + | + |
M. aquae | + | ± | - | - | - | + |
M. scrofulaceum | + | ± | - | - | + | - |
III група - нефотохромогенні мікобактерії (основі тести)
| +25 -°С | +45 -°С | Відновлення нітратів | Гідроліз твіну-80 | Каталаза за температури +68 -°C | Амідазна активність |
M. avium | ± | ± | - | - | + | Н; П |
M. intracellulare | ± | ± | - | - | + | Н; П |
M. terrae | + | - | + | + | + | 0 |
M. triviale | + | - | + | + | + | Н; П; 0* |
M. xenopi | - | + | - | - | + | Н; П |
М. terrae Вайна - 0; M. terrae Тсукамура - Н, П; Н - нікотинамід, П - піразинамід, 0 - негативна реакція.
IV група - мікобактерії, що швидко ростуть (основні тести)
| +25 -°С | +37 -°С | +45 -°С | +52 -°С | Гідроліз твіну-80 |
M. fortuitum | + | + | – | – | ± |
M. phlei | + | + | + | + | + |
M. smegmatis | + | + | + | – | + |
Додаток 6
до Інструкції з мікробіологічної
діагностики туберкульозу
(пункт 3 розділу VII)
ПЕРВИННА
ідентифікація мікобактерій
Види мікобактерій | Швидкість росту | Пігментація колоній | Ріст за температури | Відновлення нітратів | Деградація саліцилату натрію |
+22 -°C | +45 -°С |
M. avium M. itracellulare | П | Н | + | + | - | - |
M. xenopi | П | С | - | + | - | - |
M. kansasii | П | Ф | + | - | + | - |
M. malmoense | П | Н | + | - | - | - |
M. scrofulaceum | П | С | + | - | + | - |
M. gordonae | П | С | + | - | - | - |
M. terrae complex | П | Н | + | - | + | - |
M. fortuitum | Ш | Н | + | - | + | + |
M. chelonae | Ш | Н | + | - | - | + |
M. flavescens | Ш | С | + | - | + | - |
П - повільнозростаючі, Ш - швидкозростаючі, С - скотохромогенні, Ф - фотохромогенні, Н - нехромогенні.
Додаток 7
до Інструкції з мікробіологічної
діагностики туберкульозу
(пункт 4 розділу VIII)
СТАНДАРТ
мутності МакФарланда (1 McF)
Одиниці мутності за стандартом МакФарланда | Число мікробних тіл (мл) | Кількість 1,0 % розчину BaCl2x 2H2O (мл) | Кількість 1,0 % розчину H2SO4 (мл) |
0,5 | 1,5 x 10-8 | 0,05 | 9,95 |
1,0 | 3,0 x 10-8 | 0,1 | 9,9 |
2,0 | 6,0 x 10-8 | 0,2 | 9,8 |
3,0 | 9,0 x 10-8 | 0,3 | 9,7 |
4,0 | 12,0 x 10-8 | 0,4 | 9,6 |
5,0 | 15,0 x 10-8 | 0,5 | 9,5 |
6,0 | 18,0 x 10-8 | 0,6 | 9,4 |
7,0 | 21,0 x 10-8 | 0,7 | 9,3 |
8,0 | 24,0 x 10-8 | 0,8 | 9,2 |
9,0 | 27,0 x 10-8 | 0,9 | 9,1 |
10,0 | 30,0 x 10-8 | 1,0 | 9,0 |
Додаток 8
до Інструкції з мікробіологічної
діагностики туберкульозу
(пункт 4 розділу VIII)
ПРОЦЕДУРА
приготування суспензії
1 | 1 : 10 (10--1) | 4,5 мл 0,9 % розчину NaC l + 0,5 мл суспензії 1 McF |
2 | 1 : 100 (10--2) | контроль 1(К1) | 4,5 мл 0,9 % розчину NaCl + 0,5 мл розведення 1 |
3 | 1 : 1 000 (10--3) | 4,5 мл 0,9 % розчину NaCl + 0,5 мл розведення 2 |
4 | 1 : 10 000 (10--4) | контроль 2 (К2) | 4,5 мл 0,9 % р-ну NaCl + 0,5 мл розведення 3 |
Додаток 9
до Інструкції з мікробіологічної
діагностики туберкульозу
(пункт 7 розділу VIII)
РОЗЧИНЕННЯ
препаратів першого ряду і підготовка пробірок із рідким середовищем для постановки ТМЧ
Додаток 10
до Інструкції з мікробіологічної
діагностики туберкульозу
(пункт 8 розділу VIII)
РОЗЧИНЕННЯ
препаратів другог ряду і підготовка пробірок із рідким середовищем для постановки ТМЧ
Додаток 11
до Інструкції з мікробіологічної
діагностики туберкульозу
(пункт 9 розділу VIII)
ПОСТАНОВКА
ТМЧ для одного штаму M. tuberculosis до препаратів I та II ряду
Додаток 12
до Інструкції з мікробіологічної
діагностики туберкульозу
(пункт 10 розділу VIII)
ПРОВЕДЕННЯ
ТМЧ із культури віком 1-2 дні
Додаток 13
до Інструкції з мікробіологічної
діагностики туберкульозу
(пункт 11 розділу VIII)
ПРИГОТУВАННЯ
суспензії мікобактерій, що були культивовані на щільних середовищах для постановки ТМЧ MGIT
Додаток 14
до Інструкції з мікробіологічної
діагностики туберкульозу
(пункт 3 розділу Х)
МІНІМАЛЬНИЙ НАБІР ТЕСТ-ШТАМІВ
Назва тест-штаму | Призначення | Примітки |
M. tuberculosis H37Rv ATCC 27294 | Для контролю: · ростових властивостей середовища Левенштейна-Єнсена, бульйону Міддлбрука 7Н9; · якості деконтамінації; · культуральних та біохімічних тестів ідентифікації. | Позитивний контроль |
• ростових властивостей Левенштейна-Єнсена з саліциловокислим натрієм або ПНБК. | Негативний контроль |
M. kansasii ATCC 12478 | Для контролю ростових властивостей бульйону Міддлбрука 7Н9 | Позитивний контроль |
M. fortuitum ATCC 6841 | Для контролю ростових властивостей бульйону Міддлбрука 7Н9, якості деконтамінації | Позитивний контроль |
S. aureus ATCC 25923 | Для контролю ростових властивостей кров’яного агару | Позитивний контроль |
E. coli ATCC 25922 | Для контролю ростових властивостей кров’яного агару | Негативний контроль |
Додаток 15
до Інструкції з мікробіологічної
діагностики туберкульозу
(пункт 11 розділу Х)
ПОКАЗНИКИ,
які обчислюють від усіх досліджених проб
Культура (+) | Відсоток від усіх досліджених |
Із них: |
мікроскопія (+), культура (+) | становлять більшість |
мікроскопія (-), культура (+) | 20,0-40,0 % |
мікроскопія (+), культура (-) | до 1,0 % за ТБ у хворих, які не отримували ПТП |
мікроскопія (+), культура (проріст) | 3,0 % |
мікроскопія (-), культура (-) | відсутні |