ТПК або ХПК: ... мг O /мг досліджуваної речовини (NH або 2 4NO )
3
4. ПОСІВНИЙ МАТЕРІАЛ
Джерело:
Проведена обробка:
Попередня підготовка (за наявності):
Концентрація твердої зависі у реакційній суміші: мг/л
5. ПОГЛИНАННЯ КИСНЮ: БІОРОЗКЛАДАННЯ
---------------------------------------------------------------------------
| | | Час (Дні) |
| | |-----------------------------------------|
| | | 0 | | 7 | |14 | | |21 | | |28 | |
|-----------------+-------------+---+---+---+--+---+--+--+---+--+--+---+--|
|Погл. O (мг) | 1 | | | | | | | | | | | | |
| 2 |-------------+---+---+---+--+---+--+--+---+--+--+---+--|
|дослід. речовини | 2 | | | | | | | | | | | | |
| |-------------+---+---+---+--+---+--+--+---+--+--+---+--|
| | a, середнє | | | | | | | | | | | | |
|-----------------+-------------+---+---+---+--+---+--+--+---+--+--+---+--|
|Погл. O (мг) | 3 | | | | | | | | | | | | |
| 2 |-------------+---+---+---+--+---+--+--+---+--+--+---+--|
|холостої проби | 4 | | | | | | | | | | | | |
| |-------------+---+---+---+--+---+--+--+---+--+--+---+--|
| | b, середнє | | | | | | | | | | | | |
|-----------------+-------------+---+---+---+--+---+--+--+---+--+--+---+--|
|Поправка БПК (мг)| (a - b ) | | | | | | | | | | | | |
| | 1 m | | | | | | | | | | | | |
| |-------------+---+---+---+--+---+--+--+---+--+--+---+--|
| | (a - b ) | | | | | | | | | | | | |
| | 2 m | | | | | | | | | | | | |
|-----------------+-------------+---+---+---+--+---+--+--+---+--+--+---+--|
|БПК на мг дослід.| (a - b) | | | | | | | | | | | | |
|речовини | 1 | | | | | | | | | | | | |
| | --------- | | | | | | | | | | | | |
| | C V | | | | | | | | | | | | |
| | o | | | | | | | | | | | | |
| |-------------+---+---+---+--+---+--+--+---+--+--+---+--|
| | (a - b) | | | | | | | | | | | | |
| | 2 | | | | | | | | | | | | |
| | --------- | | | | | | | | | | | | |
| | C V | | | | | | | | | | | | |
| | o | | | | | | | | | | | | |
|-----------------+-------------+---+---+---+--+---+--+--+---+--+--+---+--|
|% розкладання | D (a ) | | | | | | | | | | | | |
| | 1 1 | | | | | | | | | | | | |
| |-------------+---+---+---+--+---+--+--+---+--+--+---+--|
|БПК ТПК x 100 | D (a ) | | | | | | | | | | | | |
| | 2 2 | | | | | | | | | | | | |
| |-------------+---+---+---+--+---+--+--+---+--+--+---+--|
| | Середнє(*) | | | | | | | | | | | | |
---------------------------------------------------------------------------
V = об'єм середовища в пробній колбі
----------------
(*) D1 та D2 не мають усереднюватися, якщо між ними існуєзначна різниця.
Примітка: аналогічні формати можуть використовуватися дляеталонної сполуки та контролю токсичності.
6. ПОПРАВКА НА НІТРИФІКАЦІЮ (див. Додаток V)
------------------------------------------------------------------
|День | 0 |28|Різниця|
|-------------------------------------------------+---+--+-------|
|(i) Концентрація нітрату (мг N/л) | | | (N) |
|-------------------------------------------------+---+--+-------|
|(ii) Кисневий еквівалент (4,57 · N · V) (мг) | - |- | |
|-------------------------------------------------+---+--+-------|
|(iii) Концентрація нітриту (мг N/л) | | | (N) |
|-------------------------------------------------+---+--+-------|
|(iv) Кисневий еквівалент (3,43 · N · V) (мг) | - |- | |
|-------------------------------------------------+---+--+-------|
|(ii + iv) Загальний кисневий еквівалент | - |- | |
------------------------------------------------------------------
7. АНАЛІЗ ВУГЛЕЦЮ (необов'язково)
Карбоаналізатор:
------------------------------------------------------------------
|Час (день)|Холоста проба мг/л|Досліджувана хімічна речовина мг/л|
|----------+------------------+----------------------------------|
| 0 | (C ) | (C ) |
| | blo | o |
|----------+------------------+----------------------------------|
| 28(*) | (C ) | (C ) |
| | blt | t |
------------------------------------------------------------------
----------------
(*) Або наприкінці інкубації.
C - C
t blt
% розкладання РОВ = (1 - ---------) x 100
C - C
o blo
8. СПЕЦІАЛЬНИЙ ХІМІЧНИЙ АНАЛІЗ (необов'язково)
S = концентрація фізико-хімічного (стерильного) контролю за b28 днів
S = концентрація в засіяній колбі за 28 днів,
a
S - S
b a
% біорозкладання = --------- x 100
S
b
9. АБІОТИЧНЕ РОЗКЛАДАННЯ (необов'язкове)
a = поглинання кисню в стерильних колбах після 28 днів, мг)
a x 100
поглинання кисню на мг досліджуваної речовини = -------
C V
o
(див. Розділи 1 та 3)
a x 100
% абіотичного розкладання = -----------
C V x ThOD
o
ЧАСТИНА VI. ДОСЛІДЖЕННЯ ЗА МЕТОДОМ ЗАКРИТОЇ ПЛЯШКИ (МетодC.4-E)
VI.1 ПРИНЦИП МЕТОДУ ДОСЛІДЖЕННЯ
Розчин досліджуваної речовини у мінеральному середовищі,зазвичай 2-5 мг/літр, заповнюється порівняно невеликою кількістюмікроорганізмів різних популяцій та зберігається в абсолютноповних закритих колбах у темному місці за сталої температури.Відбувається спостереження за розкладанням протягом 28 днів шляхоманалізу розчиненого кисню. Об'єм кисню, що виділяєтьсядосліджуваною речовиною (з поправкою на паралельний процесутворення з холостої проби посівного матеріалу), виражається черезвідсоткове значення ТПК чи ХПК.
VI.2. ОПИС МЕТОДУ
VI.2.1. Технічне оснащення
a) БПК колби зі скляними пробками, напр., 250-300 мл;
b) водяна баня чи інкубатор, щоб зберігати колби за сталоїтемператури (+- 1 град.C чи менше) без доступу світла;
c) великі скляні колби (2-5 літрів) для приготуваннясередовища й наповнення БПК колб;
d) кисневий електрод та лічильник, або обладнання та реагентидля титрування Вінклера.
VI.2.2. Приготування мінерального середовища
Для приготування основного розчину див. I.6.2.
Слід змішати 1 (один) мл розчину (a) і (d) та довести дооб'єму 1 л шляхом додавання води для розчинення.
VI.2.3. Приготування посівного матеріалу
Посівний матеріал зазвичай береться зі вторинних очищенихстічних вод водоочисної станції чи лабораторної установки, якаочищує переважно комунально-побутові стічні води. Альтернативнеджерело посівного матеріалу - поверхневі води. Зазвичайвикористовують від однієї краплі (0,05 мл) до 5 мл фільтрату налітр середовища; можливо знадобляться тести, щоб визначитиоптимальний об'єм очищених стічних вод (Див. I.6.4.2 і I.6.5).
VI.2.4. Підготовка колб
Сильно проаерувати мінеральне середовище протягом щонайменше20 хв. Для кожної серії досліджень брати проби з того самогомінерального середовища. Загалом середовище придатне длявикористання через 20 год. зберігання за заданої температури.Визначити концентрацію розчиненого кисню для контрольних вимірів,її значення має бути приблизно 9 мг/літр при температурі20 град.C. Провести усі операції з переливання та заповненнянасиченого киснем середовища без утворення газових бульбашок,наприклад, з використанням сифонів.
Підготувати аналогічні партії БПК колб для визначеннядосліджуваних та еталонних речовин в одночасних дослідженнях.Зібрати достатню кількість БПК колб, зокрема холостої пробипосівного матеріалу, щоб можна було принаймні двічі вимірятивитрати кисню через задані часові проміжки, наприклад, через 0, 7,14, 21 та 28 днів. Щоб точно визначити 10-денний інтервал, можезнадобитись більше колб.
Заповнити великі колби повністю аерованим мінеральнимсередовищем приблизно на одну третину. Після цього додати достатнюкількість основного розчину досліджуваної та еталонної речовин,щоб відокремити великі колби так, щоб кінцева концентрація речовинне перевищувала 10 мг/літр. Не додавати хімічні речовини дохолостої проби контрольного середовища, яке міститься у додатковійвеликій колбі.
Щоб не обмежувати активність посівного матеріалу,концентрація розчиненого кисню має бути не нижчою за 0,5 мг/літр уБПК колбах. Це скорочує концентрацію досліджуваної речовиниприблизно до 2 мг/літр. Однак для речовин, які поганорозкладаються, чи речовин з низьким ТПК, можна використовуватиконцентрацію 5-10 мг/літр. У деяких випадках бажано проводитианалогічні випробування досліджуваних речовин у різнихконцентраціях, наприклад, 2 і 5 мг/літр. Зазвичай требарозраховувати ТПК на основі утворення амонієвих солей, але якщобуде нітрифікація, можна розраховувати ТПК на основі утвореннянітрату (ТПК : див. Додаток 2.2). Однак, якщо нітрифікація є не
NO
3
завершеною, але вона відбувається, треба зважати на зміну
концентрації нітриту та нітрату, які визначаються аналізом, (див.
Додаток 5).
Якщо треба визначити токсичність досліджуваної речовини(наприклад, раніше було виявлено низьку здатність до біологічногорозкладу), потрібна інша партія колб.
Підготувати іншу велику колбу для аерованого мінеральногосередовища (приблизно одна третина об'єму) та досліджуваної йеталонної речовин у кінцевих концентраціях, зазвичай таких самих,як і в інших великих колбах.
Заповнити великі колби з розчином вторинними очищенимистічними водами (від однієї краплі чи приблизно 0,05 мл до5 мл/літр) чи іншою рідиною, наприклад, річковою водою(Див. I.6.4.2.). Зрештою, додати до розчину аероване мінеральнесередовище, користуючись шлангом, який дістає до дна колби ізабезпечує ретельне змішування.
VI.2.5. Кількість колб у типовому циклі
У типовому циклі використовуються такі колби:
- щонайменше 10 колб з досліджуваною речовиною та посівнимматеріалом (досліджувана суспензія),
- щонайменше 10 колб лише з посівним матеріалом (холостапроба посівного матеріалу),
- щонайменше 10 колб з еталонною речовиною та посівнимматеріалом (технологічний контроль),
- і, за необхідності, 6 колб з досліджуваною, еталонноюречовинами та посівним матеріалом (перевірка на токсичність).Однак, щоб точно визначити 10-денний інтервал, може знадобитисьбільше колб.
VI.2.6. Проведення досліду
Негайно розлити приготовані розчини у відповідну партію БПКколб за допомогою шлангу з нижньої чверті (не дна) відповідноївеликої колби, так щоб БПК колби були повністю заповнені. Обережнопостукати, щоб видалити усі повітряні бульбашки. Одразупроаналізувати колби на розчинений кисень методом Вінклера або задопомогою електродів. Вміст колб може бути збережений дляподальшого аналізу методом Вінклера з додаванням сульфатумарганцю (II) чи гідроксиду натрію (для першого реагентуВінклера). Зберігати обережно закриті колби зі зв'язаним киснем,коричневий гідрооксид марганцю (III), у темному місці притемпературі 10-20 град.C не довше ніж добу перед тим, як перейтидо наступних етапів методу Вінклера. Закрити інші колби, щозалишились, так, щоб туди не потрапили повітряні бульбашки, тазберігати при температурі 20 град.C у темному місці. Для кожноїпартії колб має бути ще одна партія для визначення холостої пробизасіяного середовища. Забрати або принаймі зробити ще раз колбиусіх партій для аналізу розчиненого кисню через певні проміжкичасу (принаймні щотижня) через 28 днів розведення.
Щотижневі зразки повинні давати можливість оцінюванняпроцентного значення відщеплення протягом 14-денного інтервалу, азразки, що беруться кожні 3-4 дні - визначення 10-денногоінтервалу, на що знадобиться удвічі більше колб.
Для досліджуваних речовин, які містять азот, треба зважати напоглинання кисню під час нітрифікації. Для цього необхідновикористовувати метод O -електроду для визначення концентрації
2
розчиненого кисню, а потім узяти зразок з БПК колби для аналізу на
нітрат та нітрит. Вирахувати використаний кисень завдяки
збільшенню концентрації нітриту та нітрату. (див. Додаток V).
VI.3. ДАНІ ТА ЗВІТУВАННЯ
VI.3.1. Обробка результатів
Спочатку порахувати БПК, отримане після кожного часовогоперіоду, віднімаючи зменшення кількості кисню (мг O /літр) у
2
холостій пробі посівного матеріалу. Розділити це виправлене
зменшення на концентрацію (мг/літр) досліджуваної речовини, щоб
отримати питому БПК, мг кисню на мг досліджуваної речовини.
Порахувати процентну можливість біологічного розпаду можна
розділивши питому БПК на питому ТПК (розрахунки згідно з Додатком
2.2) чи ХПК (визначається за допомогою аналізу, див. Додаток 2.3),
отже:
(мг поглинання O досліджуваною речовиною -
2
мг поглинання O холостою пробою)
2
БПК = -------------------------------------------------
(мг досліджуваної речовини у колбі)
= мг O на мг досліджуваної речовини
2
БПК (мг O /мг досліджуваної речовини)
2
% розкладання = -------------------------------------- x 100
ТПК(мг O /мг досліджуваної речовини)
2
чи
БПК (мг O /мг досліджуваної речовини)
2
% розкладання = --------------------------------------- x 100
ХПК (мг O /мг досліджуваної речовини)
2
Необхідно зазначити, що ці два методи не обов'язково дадутьоднакові результати, краще використовувати перший метод.
Для азотовмісних досліджуваних речовин слід використовувативідповідний ТПК (NH or NO ), згідно якого очікується процес
4 3
нітрифікації (Додаток 2.2). Якщо нітрифікація відбувається, але
вона не завершена, можна вирахувати поглинання кисню, врахувавши
зміни у концентрації нітриту й нітрату (Додаток 5).
VI.3.2. Достовірність результатів
Об'єм скорочення кисню у холостій пробі посівного матеріалуне повинен перевищувати 1,5 мг розчиненого кисню на літр через28 днів. Вищі показники вказують на необхідність дослідженняметодик експерименту. Кінцева концентрація кисню у колбах повиннабути постійно не нижче за 0,5 мг/літр. Такий низький рівень киснює правильним лише тоді, коли за методом, що використовується длявизначення розчиненого кисню можна вимірювати точно.
Див. також I.5.2.
VI.3.3. Звітування Див. I.8.
VI.4. Лист даних
Нижче наведено зразок листа даних.
ДОСЛІДЖЕННЯ ЗА МЕТОДОМ ЗАКРИТОЇ ПЛЯШКИ
1. ЛАБОРАТОРІЯ
2. ДАТА ПОЧАТКУ ДОСЛІДЖЕННЯ
3. ДОСЛІДЖУВАНА РЕЧОВИНА
Назва:
Концентрація основного розчину: ... мг/л
Початкова концентрація в колбі, до: ... мг/л
ТПК чи ХПК: ......мг O /мг досліджуваної речовини
2
4. ПОСІВНИЙ МАТЕРІАЛ
Джерело:
Проведена обробка:
Попередня підготовка (за наявності):
Концентрація у реакційній суміші: мг/л
5. СПОСІБ ВИЗНАЧЕННЯ
Метод: Вінклера/електродний
Аналіз колби
------------------------------------------------------------------
| Час вирощування (d) | DO (мг/л) |
| |--------------|
| | 0 | n | n | |
| | | 1| 2| |
|-------------------------------------------------+---+---+---+--|
|Холоста проба | 1 | C | | | | |
|(без хімічних речовин) | | 1 | | | | |
| |-------+-----+---+---+---+--|
| | 2 | C | | | | |
| | | 2 | | | | |
|-----------------------------------+-------------+---+---+---+--|
|Значення | C + C | | | | |
| | 1 2 | | | | |
| |m = --------| | | | |
| | b 2 | | | | |
|-----------------------------------+-------------+---+---+---+--|
|Досліджувана речовина | 1 | a | | | | |
| | | 1 | | | | |
| |-------+-----+---+---+---+--|
| | 2 | a | | | | |
| | | 2 | | | | |
|-----------------------------------+-------------+---+---+---+--|
|Значення | a + a | | | | |
| | 1 2 | | | | |
| |m = ------- | | | | |
| | t 2 | | | | |
------------------------------------------------------------------
Примітка: Такий самий формат може використовуватись також дляосновного і токсичного контролю.
6. КОРЕКЦІЯ З УРАХУВАННЯМ НІТРИФІКАЦІЇ (див. Додаток V)
------------------------------------------------------------------
| Час вирощування (d) | 0 |n |n |n |
| | | 1 | 2 | 3 |
|------------------------------------------------+---+---+---+---|
|(i) Концентрація нітрату (мг N/літр) | | | | |
|------------------------------------------------+---+---+---+---|
|(ii) Зміна концентрації нітрату (мг N/літр) | - | | | |
|------------------------------------------------+---+---+---+---|
|(iii) Еквівалент кисню (мг/літр) | - | | | |
|------------------------------------------------+---+---+---+---|
|(iv) Концентрація нітриту (мг N/літр) | | | | |
|------------------------------------------------+---+---+---+---|
|(v) Зміна концентрації нітриту (мг N/літр) | - | | | |
|------------------------------------------------+---+---+---+---|
|(vi) Еквівалент кисню (мг/літр) | - | | | |
|------------------------------------------------+---+---+---+---|
|(iii + vi) Загальний еквівалент кисню (мг/літр) | - | | | |
------------------------------------------------------------------
7. СКОРОЧЕННЯ: % РОЗКЛАДАННЯ
------------------------------------------------------------------
| | Поглинання через |
| | n днів (мг/літр) |
| |------------------------|
| | n | n | n | |
| | 1 | 2 | 3 | |
|---------------------------------------+-----+-----+-----+------|
|Колба 1: (m - m ) - (m - m | | | | |
| to - tx bo bx) | | | | |
|---------------------------------------+-----+-----+-----+------|
|Колба 2: (m - m ) - (m - m ) | | | | |
| to tx bo bx | | | | |
|---------------------------------------+-----+-----+-----+------|
|Колба 1: | | | | |
|% D = ((m - m ) - (m - m )) x 100 | | | | |
| 1 to tx bo bx | | | | |
|конц. хімречовини x ТПК | | | | |
|---------------------------------------+-----+-----+-----+------|
|Колба 2: | | | | |
|% D = ((m - m ) - (m - m )) x 100 | | | | |
| 2 to tx bo bx | | | | |
|конц. хімречовини x ТПК | | | | |
|---------------------------------------+-----+-----+-----+------|
| D - D | | | | |
| 1 2 | | | | |
|% D, середнє(*) = ---------- | | | | |
| 2 | | | | |
------------------------------------------------------------------
----------------
(*) Не можна зважати на значення, якщо є суттєва відмінністьміж однаковими колбами.
m = значення у колбі у час 0
to
m = значення у колбі у час Х
tx
m = середнє значення холостої проби за час 0
bo
m = середнє значення холостої проби за час x
bx
Метод корекції з урахуванням нітрифікації можна знайти з iiiдо vi у частині 6.
8. СКОРОЧЕННЯ ХОЛОСТОЇ ПРОБИ
Поглинання кисню холостою пробою: (m - m ) мг/літр. Це bo b28поглинання є важливим для достовірності дослідження. Показникпоглинання повинен бути менше ніж 1,5 мг/літр.
ЧАСТИНА VII. ДОСЛІДЖЕННЯ ЗА МЕТОДОМ ММТП (Метод C.4-F)
VII.1. ПРИНЦИП МЕТОДУ
Поглинання кисню переміщуваним розчином або суспензієюхімічної речовини, що тестується у мінеральному середовищі,засіяному спеціально вирощеними, непристосованимимікроорганізмами, автоматично вимірюється протягом періоду в28 днів у затемненому, закритому спірометрі при температурі25 +- 1 град.C. Вуглекислий газ, що виділяється, поглинаєтьсянатровим вапном. Здатність до біорозкладання виражається у виглядіпроцентного співвідношення поглиненого кисню (з поправкою напоглинання холостою пробою) відносно теоретичного поглинання(ТПК). Процентне співвідношення первинної здатності добіорозкладання також вираховується за допомогою додатковогоспецифічного хімічного аналізу, проведеного на початку та в кінціінкубації та, можливо, за допомогою РОВ аналізу.
VII.2. ОПИС МЕТОДУ
VII.2.1. Обладнання
(а) Автоматичний електролітичний БПК вимірювач або спірометр,зазвичай обладнаний шістьма колбами по 300 мл кожна та склянками забсорбентом CO ;
2
(b) кімната з постійною температурою та/або водяна баня притемпературі 25 град.C +- 1 град.C або вище;
(с) мембранний фільтр (необов'язково);
(d) карбоаналізатор (необов'язково);
VII.2.2. Приготування мінерального середовища
Наступні основні розчини має бути приготовано ізвикористанням хімічно чистих речовин та води (Див. I.6.1.):
(а) Монофосфат калію, KH PO 8,50 г
2 4
Гідрофосфат калію, K HPO 21,75 г
2 4
Дванадцятизаміщений фосфорнокислий
натрій Na HPO . 12 H O 44,60 г
2 4 2
Хлорид аммонію, NH Cl 1,70 г
4
Розчинити у воді і довести до об'єму 1 л.
Водневий показник розчину має становити 7,2.
(b) Гептагідрат сульфату магнію, MgSO . 7 H O 22, 50 г
4 2
Розчинити у воді і довести до об'єму 1 л.
(с) Ангідрид хлориду кальцію CaCl 27,50 г
2
Розчинити у воді і довести до об'єму 1 л.
(d) Гексагідрат хлориду заліза (III), FeCl . 6H O 0,25 г 3 2
Розчинити у воді і довести до об'єму 1 л.
Взяти по 3 мл кожного розчину (a), (b), (c) та (d) і довестидо 1 л.
VII.2.3. Приготування посівного матеріалу
Необхідно взяти свіжі зразки не менш ніж в десяти місцях,переважно у районах, де використовуються та виділяютьсярізноманітні хімікати. В таких місцях, як споруди для очисткипромислових стічних вод, ріки, озера, моря, візьміть 11 зразківмулу, поверхневого шару ґрунту, води тощо та ретельно змішати.Після видалення плаваючої речовини та відстоювання слід встановитиводневий показник надосадової рідини на рівні 7 +- 1 за допомогоюгідроксиду натрію або фосфорної кислоти.
Слід використати підходящий об'єм відфільтрованої надосадовоїрідини, щоб наповнити посудину для активованого мулу, та аеруватирідину приблизно 23 1/2 год. Через 30 хвилин після припиненняаерації необхідно усунути приблизно одну третину загального об'ємунадосадової рідини та додати до речовини, що осіла, відповіднийоб'єм розчину (pH 7), який містить по 0,1% глюкози, пептону тамонофосфат калію, та продовжити аерацію. Цю процедуру слідповторювати раз на день. При обробці зразка мулу сліддотримуватися сумлінної практики: стічні води слід очистити,температуру слід тримати на рівні 25 +- 2 град.C, водневийпоказник повинен бути 7 +- 1, мул має добре осідати та достатньоаеруватися, щоб суміш весь час була аеробною, у суміші має бутиприсутня протозоа, а також активність мулу слід порівнювати зеталонною речовиною щонайменше раз на три місяці. Не можнавикористовувати мул як посівний матеріал, поки він не пройдеобробки щонайменше протягом місяця, але не більше ніж чотиримісяці. Відтак, слід брати зразки з 10 місць через відповідніінтервали, один раз на три місяці.
Щоб підтримувати у свіжому та старому мулі однаковуактивність, необхідно перемішати відфільтровану надосадову рідинуактивованого мулу з відповідним об'ємом відфільтрованоїнадосадової рідини свіжезібраної суміші мулу з 10 джерел такультивувати комбінований розчин як описано вище. Мул маєвикористовуватися як посівний матеріал через 18-24 години післяпідгодовування зразка.
VII.2.4. Підготовка колб
Необхідно підготувати наступні шість колб:
N 1: досліджувана хімічна речовина у воді для розведення при100 мг/л
N 2, 3 та 4: досліджувана хімічна речовина у мінеральномусередовищі при 100 мг/л
N 5: еталонна хімічна речовина (напр., анілін) у мінеральномусередовищі при 100 мг/л
N 6: чисте мінеральне середовище
Слід додати слабкорозчинні пробні хімічні елементибезпосередньо в колби за вагою або об'ємом, або працювати з ними,як описано в Додатку 3, за винятком того, що не слідвикористовувати жодних розчинників або емульгаторів. Необхіднододати абсорбент CO в спеціальних склянках до всіх колб. Слід
2
встановити водневий показник у колбах N 2, 3 та 4 на рівні 7,0.
VII.2.5. Проведення досліду
Необхідно засіяти колби N 2, 3 та 4 (пробні суспензії), N 5(контроль активності) та N 6 (холоста проба посівного матеріалу)малим об'ємом посівного матеріалу, щоб концентрація складала30 мг/л твердої зависі. До колби N 3, яка відіграє рольабіотичного контролю, посівний матеріал не додається. Слід зібратиобладнання, перевірити на герметичність, розпочати змішування тавимірювання поглинання кисню в темряві. Необхідно щоденноперевіряти температури, мішалку та кулонометричний реєстраторпоглинання кисню, а також відмічати будь-яку зміну кольору вмістуколб. Слід вивчати поглинання кисню в шести колбах безпосередньоза допомогою відповідного методу, наприклад, за допомогоюшеститочкового діаграмного самописця, який створює криву БПК. Вкінці інкубації, зазвичай через 28 днів, слід виміряти водневийпоказник вмісту колб та визначити концентрацію залишковоїдосліджуваної хімічної речовини і будь-якої проміжної сполуки та,у випадку водорозчинної речовини, концентрацію РОВ (Додаток 2.4).Слід бути особливо уважними у випадку летких хімічних речовин.Якщо має відбутися нітрифікація, слід за можливості визначи тиконцентрацію нітрату та нітриту.
VII.3. ДАНІ ТА ЗВІТУВАННЯ
VII.3.1. Обробка результатів
Необхідно розділити поглинання кисню (мг) досліджуваноюхімічною речовиною після певного часу із поправкою на кисень,поглинутий при контролі холостої проби посівного матеріалу післярівного проміжку часу, на вагу використаної досліджуваної хімічноїречовини. Це дасть БПК, виражене в мг кисню/мг досліджуваноїхімічної речовини, тобто:
(мг поглиненого досліджуваною хімічною речовиною O
2
- мг поглиненого холостою пробою посівного матеріалу O )
2
БПК = -----------------------------------------------------------
(мг досліджуваної хімічної речовини в колбі)
= мг O на мг досліджуваної хімічної речовини
2
Процентне співвідношення біорозкладання потім можна отриматиз:
БПК (мг O /мг хімічної речовини)
2
% біорозкладання = % ТПК = -------------------------------- x 100
ТПК (мг O /мг хімічної речовини)
2
Для сумішей ТПК визначається за допомогою елементногоаналізу, як і для простих сполук. Слід використовувати ТПК (ТПК
NH
4
або ТПК ), враховуючи, чи відбулася нітрифікація, чи вона
NO
3
відсутня (Додаток 2.2). Однак, якщо нітрифікація відбувається, але
ще не закінчилась, необхідно зробити поправку на кисень,
поглинений нітрифікацією, який вираховується із змін концентрації
нітриту та нітрату (Додаток 5).
Процентне співвідношення первинного біорозкладання
визначається із втрати конкретної (початкової) хімічної речовини
(див. 1.7.2).
S - S
b a
D = ---------- x 100
t S
b
Якщо відбулася втрата досліджуваної хімічної речовини з колбиN 1, при вимірюванні фізико-хімічного відщеплення слід відмітитице та використати концентрацію досліджуваної хімічної речовини(S ) у цій колбі після 28 днів, щоб визначити процентне
b
співвідношення біорозкладання.
Під час визначення РОВ (необов'язково) процентнеспіввідношення кінцевого біорозкладання визначається за наступноюформулою:
C - C
t bt
D = (1 - --------) x 100
t C - C
o bo
як описується в пункті I.7.1. Якщо відбулася втрата РОВ вколбі N 1, при вимірюванні фізико-хімічного відщеплення слідвикористати концентрацію РОВ у колбі, щоб визначити процентнеспіввідношення біорозкладання.
Всі результати слід занести в надані листи даних.
VII.3.2. Достовірність результатів
Рівень поглинання кисню холостою пробою посівного матеріалузазвичай складає 20-30 мг O /л та не має перевищувати 60 мг/л за
2
28 днів. Поглинання кисню холостою пробою посівного матеріалу
звичайно дорівнює 20-30 мг O /л і не повинно перевищувати 60 мг/л
2
за 28 днів. Значення більші за 60 мг/л вимагають критичного
вивчення даних та методики експерименту. Якщо значення водневого
показника виходить за рамки 6-8,5 і поглинання кисню досліджуваною
хімічною речовиною менше 60%, дослід слід повторити з меншою
концентрацією досліджуваної хімічної речовини.
Див. також I.5.2.
Якщо процентне співвідношення розкладання аніліну, визначенез поглинання кисню, не перевищує 40% після семи днів та 65% після14 днів, дослід вважається недійсним.
VII.3.3. Звітування
Див. I.8.
VII.4. ЛИСТ ДАНИХ
Нижче наведено зразок листа даних.
ДОСЛІДЖЕННЯ ЗА МЕТОДОМ ММТП (I)
1. ЛАБОРАТОРІЯ
2. ДАТА ПОЧАТКУ ДОСЛІДЖЕННЯ
3. ДОСЛІДЖУВАНА РЕЧОВИНА
Назва:
Концентрація основного розчину: мг/л як хімічна речовина
Початкова концентрація в середовищі, СО: ... мг/л як хімічнаречовина
Об'єм реакційної суміші, V: ... мл
ТПК: ... мг O /л
2
4. ПОСІВНИЙ МАТЕРІАЛ
Місця збору зразків мулу:
(1) .... (6) ....
(2) .... (7) ....
(3) .... (8) ....
(4) .... (9) ....
(5) .... (10) ....
Концентрація твердої зависі в активованому мулі післяакліматизації в синтетичних стічних водах = ... мг/л
Об'єм активованого мулу на літр кінцевого середовища = ... мл
Концентрація мулу у кінцевому середовищі = ... мг/л
5. ПОГЛИНАННЯ КИСНЮ: БІОРОЗКЛАДАННЯ
Тип використаного спірометра:
------------------------------------------------------------------
| | Час (Дні) |
| |-------------------|
| | 0 | 7 |14 |21 |28 |
|--------------------------------------------+---+---+---+---+---|
|Поглинання (мг) O | а | | | | | |
| 2 | 1 | | | | | |
|хімічною речовиною |-----------------+---+---+---+---+---|
| | а | | | | | |
| | 2 | | | | | |
| |-----------------+---+---+---+---+---|
| | а | | | | | |
| | 3 | | | | | |
|--------------------------+-----------------+---+---+---+---+---|
|Поглинання (мг) O | b | | | | | |
| 2 | | | | | | |
