Додаванням мінерального середовища слід довести об'єм у всіхколбах до 1 л і після змішування взяти з кожної колби зразок ізметою визначення первинної концентрації РОВ (див. Додаток 2.4).Слід закрити отвори в колбах, наприклад, алюмінієвою фольгою,таким чином, щоб лишалась можливість вільного повітрообміну міжколбою та оточуючим середовищем. Після цього слід поміститипосудини в апарат для струшування та розпочати дослід.
III.2.5. Кількість колб у типовому циклі
Колби 1 та 2: Пробна суспензія
Колби 3 та 4: Холоста проба посівного матеріалу
Колба 5: Процедурний контроль
Бажано та за необхідності:
Колба 6: Абіотичний стерильний контроль
Колба 7: Адсорбційний контроль
Колба 8: Контроль токсичності
Див. також I.6.7.
III.2.6. Проведення досліду
Під час проведення досліду необхідно визначити концентраціюРОВ у кожній колбі двічі через визначені проміжки часу, достатньочасто, щоб була можливість визначити початок 10-денного інтервалута процентне значення відщеплення наприкінці 10-денного інтервалу.Кожного разу слід брати мінімальний об'єм досліджуваної зависі,необхідний для визначення.
Перед відбором зразків слід надійно забезпечити втрати навипаровування з колб шляхом додавання води для розчинення (I.6.1)у необхідному об'ємі. Слід ретельно перемішати культуральнесередовище перед забором зразка та пересвідчитися, що матеріал,який пристав до стінок посудин, розчинено або суспендовано передвідбором зразків. Зразок необхідно відфільтрувати через мембрануабо центрифугувати (див. Додаток 2.4) відразу ж після забору.Відфільтровані або центрифуговані зразки слід аналізувати того ждня або ж зберігати за температури 2-4 град.C не більш ніж48 годин, або ж довше за температури - 18 град.C.
III.3. ДАНІ ТА ЗВІТУВАННЯ
III.3.1. Обробка результатів
Необхідно вирахувати процентне значення розкладання за час tзгідно з I.7.1 (визначення РОВ) або ж, факультативно, згідно I.7.2(спеціальний аналіз).
Необхідно занести всі результати в надані листи даних.
III.3.2. Достовірність результатів
Див. I.5.2.
III.3.3. Звітування
Див. I.8.
III.4. ЛИСТ ДАНИХ
Нижче наведено зразок листа даних.
МОДИФІКОВАНЕ РОЗКЛАДАННЯ ОЕСР
1. ЛАБОРАТОРІЯ
2. ДАТА ПОЧАТКУ ДОСЛІДЖЕННЯ
3. ДОСЛІДЖУВАНА РЕЧОВИНА
Назва:
Концентрація основного розчину: ... мг/л як хімічна речовина
Початкова концентрація в середовищі, до: ... мг/л як хімічнаречовина
4. ПОСІВНИЙ МАТЕРІАЛ
Джерело:
Проведена обробка:
Попередня підготовка (за наявності):
Концентрація твердої зависі у реакційній суміші: мг/л
5. ВИЗНАЧЕННЯ ВУГЛЕЦЮ
Карбоаналізатор:
------------------------------------------------------------------
| |N колби | |РОВ після n |
| | | |днів (мг/л) |
| | | |---------------|
| | | |0 |n |n |n |n |
| | | | | 1 | 2| 3| x|
|---------------------+--------+-----------------+--+---+--+--+--|
|Досліджувана хімічна | 1 | a | | | | | |
|речовина та посівний | | 1 | | | | | |
|матеріал |--------+-----------------+--+---+--+--+--|
| | | a | | | | | |
| | | 2 | | | | | |
| |--------+-----------------+--+---+--+--+--|
| | | a, середнє | | | | | |
| | | C | | | | | |
| | | a(t) | | | | | |
| |--------+-----------------+--+---+--+--+--|
| | 2 | b | | | | | |
| | | 1 | | | | | |
| |--------+-----------------+--+---+--+--+--|
| | | b | | | | | |
| | | 2 | | | | | |
| |--------+-----------------+--+---+--+--+--|
| | | b, середнє | | | | | |
| | | C | | | | | |
| | | b(t) | | | | | |
|---------------------+--------+-----------------+--+---+--+--+--|
|Холоста проба | 3 | c | | | | | |
|посівного матеріалу | | 1 | | | | | |
|без досліджуваної | | | | | | | |
|хімічної речовини | | | | | | | |
| |--------+-----------------+--+---+--+--+--|
| | | c | | | | | |
| | | 2 | | | | | |
| |--------+-----------------+--+---+--+--+--|
| | |C, середнє C | | | | | |
| | | c(t) | | | | | |
| |--------+-----------------+--+---+--+--+--|
| | 4 | d | | | | | |
| | | 1 | | | | | |
| |--------+-----------------+--+---+--+--+--|
| | | d | | | | | |
| | | 2 | | | | | |
| |--------+-----------------+--+---+--+--+--|
| | | d, середнє | | | | | |
| | | C | | | | | |
| | | d(t) | | | | | |
| |--------------------------+--+---+--+--+--|
| | C - C | | | | | |
| | c(t) d(t) | | | | | |
| |C = ------------- | | | | | |
| | bl(t) 2 | | | | | |
------------------------------------------------------------------
6. ОЦІНЮВАННЯ ПОПЕРЕДНІХ ДАНИХ
-------------------------------------------------------------------------
| N колби | |% розкладання після|
| | |n днів |
| | |-------------------|
| | | 0 |n |n |n |n |
| | | | 1 | 2 | 3 | x |
|-----------------+---------------------------------+---+---+---+---+---|
|1 | C - C | 0 | | | | |
| | a(t) bl(t) | | | | | |
| |D = (1 - ---------------) x 100 | | | | | |
| | 1 C - C | | | | | |
| | a(o) bl(o) | | | | | |
|-----------------+---------------------------------+---+---+---+---+---|
|2 | C - C | 0 | | | | |
| | b(t) bl(t) | | | | | |
| |D = (1 - ---------------) x 100 | | | | | |
| | 2 C - C | | | | | |
| | b(o) bl(o) | | | | | |
|-----------------+---------------------------------+---+---+---+---+---|
|Середнє(*) | D - D | 0 | | | | |
| | 1 2 | | | | | |
| |D = ------- | | | | | |
| | 2 | | | | | |
|-----------------------------------------------------------------------|
|(*) D1 та D2 не повинні усереднюватися, якщо між ними є значна різниця.|
-------------------------------------------------------------------------
Примітка: аналогічні формати можуть використовуватися дляеталонної хімічної речовини та контролю токсичності.
7. АБІОТИЧНИЙ КОНТРОЛЬ (необов'язковий)
------------------------------------------------------------------
| | Час |
| | (кількість днів) |
|---------------------------------------------+------------------|
| | 0 | t |
|---------------------------------------------+---------+--------|
|Конц. РОВ (мг/л) при стерильному контролі | C | C |
| | s(o) | s(t) |
------------------------------------------------------------------
C - C
s(o) s(t)
% абіотичного розкладання = ------------- x 100
C
s(o)
8. СПЕЦІАЛЬНИЙ ХІМІЧНИЙ АНАЛІЗ (необов'язковий)
------------------------------------------------------------------
| | залишкова кількість | % первинного |
| | досліджуваної | розкладання |
| | хімічної речовини | |
| | наприкінці | |
| | дослідження (мг/л) | |
|---------------------+---------------------+--------------------|
|Стерильний контроль | S | |
| | b | |
|---------------------+---------------------+--------------------|
|Засіяне досліджуване | S | S - S |
|середовище | a | b a |
| | |--------- x 100 |
| | | S |
| | | b |
------------------------------------------------------------------
ЧАСТИНА IV. ДОСЛІДЖЕННЯ ЗА МЕТОДОМ ВИДІЛЕННЯ CO (Метод 2C.4-C)
IV.1. ПРИНЦИП МЕТОДУ
Виміряний об'єм засіяного мінерального середовища, що міститьвідому концентрацію досліджуваної речовини (10-20 мг РОВ абоЗОВ/л) як номінального єдиного джерела органічного вуглецю,аерується в темряві або при розсіяному світлі шляхом пропусканнячерез нього повітря, вільного від вуглекислого газу, зарегульованої швидкості. Відбувається спостереження за розкладаннямпротягом 28 днів шляхом визначення утвореного вуглекислого газу,захопленого гідроокисом барію або натрію, що вимірюється задопомогою титрування залишкового гідроокису або як неорганічнийвуглець. Об'єм вуглекислого газу, що виділяється досліджуваноюречовиною (з поправкою на утворення з холостої проби посівногоматеріалу), виражається через відсоткове значення ТВГ. Ступіньбіорозкладання також може бути вирахувано за допомогою додатковогоаналізу РОВ, що проводиться на початку та наприкінці інкубації.
IV.2. ОПИС МЕТОДУ
IV.2.1. Обладнання
(a) колби, 2-5 літрів, обладнані аераційною трубкою, щодоходить майже до дна посудини, та отвором;
(b) магнітні мішалки для оцінювання слабкорозчинних хімічнихречовин;
(c) колби для абсорбції газу;
(d) прилад для регулювання та вимірювання повітряного потоку;
(e) обладнання для очищення вуглекислого газу, для підготовкиповітря, вільного від вуглекислого газу; як варіант, може бутивикористано суміш кисню, вільного від CO , та азоту, вільного від
2
CO , взятих із газових балонів у правильних пропорціях (20% O :
2 2
80% N );
2
(f) прилад для визначення вуглекислого газу шляхомтитриметрії або ж іншим видом неорганічного карбоаналізатора;
(g) мембранний фільтр (необов'язково);
(h) аналізатор РОВ (необов'язково).
IV.2.2. Приготування мінерального середовища
Стосовно приготування основних розчинів див. I.6.2.
Необхідно змішати 10 мл розчину (a) з 800 мл води длярозчинення, додати 1 мл розчинів від (b) до (d) та довести дооб'єму 1 л шляхом додавання води для розчинення.
IV.2.3. Приготування та попередня підготовка посівногоматеріалу
Посівний матеріал може бути взято з ряду джерел, серед якихактивований мул, очищені стічні води, поверхневі води, ґрунти абоїх суміш.
Див. I.6.4., I.6.4.1., I.6.4.2. та I.6.5.
IV.2.4. Підготовка колб
Як приклад, наступні об'єми та маси вказують значення для5-літрових колб, що містять 3 л суспензії. При використанні меншихоб'ємів слід відповідним чином змінити значення, однакпересвідчитися, що при цьому можливе точне вимірювання утвореноговуглекислого газу.
Слід помістити по 2400-мілілітровій порції мінеральногосередовища у кожну 5-літрову колбу. Після цього необхідно засіятив колби відповідний об'єм підготовленого активованого мулу (див.I.6.4.1 та I.6.5); при цьому остаточна концентрація 3 л засіяноїсуміші не має перевищувати 30 мг твердої зависі на літр. Якваріант, можливо спочатку розвести активований мул до утворення500-1000 мг/л суспензії в мінеральному середовищі, після чогододати аліквоту до вмісту 5-літрової колби з метою отриманняконцентрації 30 мг/л - таким чином забезпечується підвищенняточності. Також можливе використання інших джерел посівногоматеріалу (див. I.6.4.2.).
Ці засіяні суміші необхідно протягом ночі аерувати задопомогою повітря, вільного від CO , з метою очищення системи від
2
вуглекислого газу.
Слід окремо додати матеріал дослідження та еталонну речовину,як відомий об'єм основних розчинів, у репліки колб з метоюотримання концентрації 10-20 мг РОВ або ЗОВ/л за допомогоюдодавання хімічних речовин. Кілька колб, у які хімічні речовини недодаються, мають слугувати для контролю посівного матеріалу.Слабкорозчинні досліджувані речовини слід додати безпосередньо вколби за вагою або об'ємом, або ж працювати з ними, як описано вДодатку 3.
За необхідності слід використати одну посудину з метоюперевірки можливої інгібуючої дії досліджуваної хімічної речовинишляхом посіву в мінеральному середовищі розчинів як досліджуваної,так і еталонної хімічної речовини, такої ж концентрації, як і вінших колбах.
Також за необхідності слід встановити ще одну стерильнуколбу, щоб перевірити, чи зазнає досліджувана хімічна речовинаабіотичного розкладання при використанні незасіяного розчинухімічної речовини (див. I.6.6). Необхідно провести стерилізаціюшляхом додавання токсичної речовини у відповідній концентрації.
Слід довести об'єм суспензій у всіх колбах до 3 л шляхомдодавання мінерального середовища, попередньо керованого задопомогою повітря, вільного від CO . Як варіант, можливе взяття
2
зразків на аналіз РОВ (див. додаток 2.4.) та/або спеціальний
аналіз. Необхідно під'єднати поглинальні сулії од отворів для
випуску повітря з колб.
При використанні гідроокису барію необхідно з'єднати по трипоглинальні сулії, кожна з яких містить 100 мл 0,0125-молярногорозчину гідроокису барію, із кожною 5-літровою колбою. Розчин маєбути вільний від осадів сульфату та карбонату, а його міцність маєбути визначена безпосередньо перед використанням. При використаннігідроокису натрію слід з'єднати дві пастки, друга з якихпризначена для контролю, щоб пересвідчитися, що весь вуглекислийгаз поглинутий першою. Для цього підходять поглинальні сулії длясироватки з кришками. Слід додати 200 мл 0,05-молярного розчинугідроокису натрію в кожну колбу; цього має бути достатньо дляпоглинання загального об'єму вуглекислого газу, що виділиться приповному розкладанні досліджуваної речовини. Розчин гідроокисунатрію, навіть одразу після приготування. міститиме слідикарбонатів; з огляду на це слід вилучити карбонат із холостоїпроби.
IV.2.5. Кількість колб у типовому циклі
Колби 1 та 2: Пробна суспензія
Колби 3 та 4: Холоста проба посівного матеріалу
Колба 5: Процедурний контроль
Бажано та за необхідності:
Колба 6: Абіотичний стерильний контроль
Колба 7: Контроль токсичності
Див. також I.6.7.
IV.2.6. Проведення досліду
На початку досліду необхідно розпочати барботування суспензійза допомогою повітря, вільного від CO , зі швидкістю 30-100 мл/хв.
2
Періодично необхідно брати зразки абсорбенту вуглекислого газу для
аналізу вмісту CO . Протягом перших десяти днів рекомендується
2
робити аналізи раз на два чи три дні, а надалі й до 28-го дня -
раз на п'ять днів, таким чином, щоб можна було визначити 10-денний
інтервал.
28-го дня необхідно взяти зразки (на вибір) для аналізу РОВта/або спеціального аналізу, виміряти водневий показник суспензійта додати 1 мл концентрованої хлористоводневої кислоти в кожну зколб; слід аерувати колби протягом ночі з метою ліквідаціївуглекислого газу, присутнього у пробних суспензіях. 29-го днянеобхідно зробити останній аналіз виділеного вуглекислого газу.
У дні вимірювання CO необхідно від'єднати найближчий до 2колби абсорбер гідроокису барію та титрувати розчин гідроокису задопомогою 0,05-молярного розчину HCl, використовуючи в якостііндикатору фенолфталеїн. Решту абсорберів слід пересунути на однупозицію ближче до колби та додати в кінець ряду новий абсорбер, щомістить 100 мл свіжого 0,0125-молярного розчину гідроокису барію.Титрування слід проводити по мірі необхідності, наприклад, коли впершій пастці спостерігається значна кількість осаду, що поки нез'явився в другій, або ж принаймні щотижня. Як варіант, коли вякості абсорбенту використовується NaOH, необхідно за допомогоюшприца взяти маленький зразок (залежно від характеристиквикористовуваного карбоаналізатора) розчину гідроокису натрію забсорбера, що знаходиться ближче до колби. Після цього зразокнеобхідно ввести в модуль карбоаналізатора, що відповідає занеорганічний вуглець, з метою безпосереднього аналізу виділеноговуглекислого газу.
Вміст другої пастки необхідно проаналізувати лише наприкінцідосліду з тим, щоб внести поправку на будь-які домішкивуглекислого газу.
IV.3. ДАНІ ТА ЗВІТУВАННЯ
IV.3.1. Обробка результатів
Об'єм CO , захоплений абсорбером при титруванні, задається 2наступним рівнянням:
mgCO = (100 · C - 0,5 · V · C ) x 44
2 B A
де:
V = об'єм HCl, використаний при титруванні 100 мл у абсорбері(мл)
C = концентрація розчину гідроокису барію (моль)
B
C = концентрація розчину хлористоводневої кислоти (моль)
A
якщо C дорівнює 0,0125 моль, а C - 0,05 моль, титр для B A100 мл гідроокису барію дорівнює 50 мл, а вага CO задається
2
рівнянням:
- x 44 x мл титрованого HCl = 1,1 x мл HCl
Отже, в такому випадку, при переведенні об'єму титрованогоHCl в мг виділеного CO коефіцієнт дорівнює 1,1.
2
Необхідно обчислити об'єм CO , виділений лише з посівного 2матеріалу та з посівного матеріалу разом із досліджуваною хімічноюречовиною, використовуючи відповідні значення титрування; різницяміж ними дорівнюватиме вазі CO , виділеного лише з досліджуваної
2
хімічної речовини.
Наприклад, якщо значення титрування лише для посівногоматеріалу складає 48 мл, а для посівного матеріалу тадосліджуваної хімічної речовини - 45 мл,
CO з посівного матеріалу = 1,1 x (50-48) = 2,2 мг
2
CO з посівного матеріалу та досліджуваної хімічної речовини 2= 1,1 x (50-45) = 5,5 мг
Отже, вага CO , утвореного з хімічної речовини, дорівнює 23,3 мг.
Процентне значення біорозкладання вираховується наступнимчином:
мг утвореного CO x 100
2
% розкладання = -------------------------------------------------
ТВГ xмг доданої досліджуваної хімічної речовини
або
мг утвореного CO x 100
2
% розкладання = ----------------------------------------
мг TO, доданого під час досліду x 3,67
де 3,67 - коефіцієнт перерахунку (44/12) вуглецю увуглекислий газ.
Процентне значення розкладання отримується після будь-якогочасового проміжку шляхом додавання процентних значень ТВГ,підрахованих для кожного із днів до моменту вимірювання цьогозначення.
Для абсорберів гідроокису натрію необхідно підрахувати об'ємвиділеного вуглекислого газу, виражений у вигляді неорганічноговуглецю (мг), шляхом множення концентрації неорганічного вуглецю вабсорбенті на об'єм абсорбенту.
Процентне значення розкладання вираховується наступним чином:
мг у колбі з неорганічним вуглецем - мг холостої
проби неорганічного вуглецю
% ТВГ = ------------------------------------------------- x 100 %
МГ ЗОВ, доданого як досліджувана хімічна речовина
Значення відщеплення РОВ підраховується згідно з пунктом I.7.Всі результати слід вказати у наданих листах даних.
IV.3.2.Достовірність результатів
Вміст неорганічного вуглецю в суспензії досліджуваноїхімічної речовини на початку досліду не має перевищувати 5%загального вмісту вуглецю, а загальний об'єм виділеного CO в
2
холостій пробі посівного матеріалу в нормі не має перевищувати
40 мг/л середовища. При отриманні значень, що перевищують 70 мг
CO /літр, необхідний критичний перегляд даних та методики
2
експерименту.
Див. також I.5.2.
IV.3.3. Звітування
Див. I.8.
IV.4. ЛИСТ ДАНИХ
Нижче наведено зразок листа даних.
ДОСЛІДЖЕННЯ ВИДІЛЕННЯ ВУГЛЕКИСЛОГО ГАЗУ
1. ЛАБОРАТОРІЯ
2. ДАТА ПОЧАТКУ ДОСЛІДЖЕННЯ
3. ДОСЛІДЖУВАНА РЕЧОВИНА
Назва:
Концентрація основного розчину: ... мг/л як хімічна речовина
Початкова концентрація в середовищі, до: ... мг/л як хімічнаречовина
Загальний об'єм вуглецю, доданий у колбу: ... мг C
ТВГ: мг
Джерело:
Проведена обробка:
Попередня підготовка (за наявності):
Концентрація твердої зависі
CO
2
4. ПОСІВНИЙ МАТЕРІАЛ
у реакційній суміші: мг/л
---------------------------------------------------------------------------
| Час | Об'єм | Об'єм | Сукупний | ТВГ |
|(день)| виділеного | виділеного | об'єм |Сукупний об'єм CO |
| | CO | CO | виділеного | 2 |
| | 2 | 2 | CO (мг) | ---- x 100|
| | Дослідження | холостої | 2 | ТВГ |
| | (мг) | проби | (середнє | |
| | | (мг) | значення | |
| | | | дослідження | |
| | | |мінус холоста| |
| | | | проба) | |
|------+-------------+------------+-------------+-------------------------|
| |1 / |середнє|3 / |середнє| 1 | 2 | 1 | 2 | середнє |
| | / 2 | | / 4| | | | | | |
|------+-----+-------+----+-------+------+------+------+-------+----------|
|0 | | | | | | | | | |
|------+-----+-------+----+-------+------+------+------+-------+----------|
|n | | | | | | | | | |
| 1 | | | | | | | | | |
|------+-----+-------+----+-------+------+------+------+-------+----------|
|n | | | | | | | | | |
| 2 | | | | | | | | | |
|------+-----+-------+----+-------+------+------+------+-------+----------|
|n | | | | | | | | | |
| 3 | | | | | | | | | |
|------+-----+-------+----+-------+------+------+------+-------+----------|
| | | | | | | | | | |
|------+-----+-------+----+-------+------+------+------+-------+----------|
| | | | | | | | | | |
|------+-----+-------+----+-------+------+------+------+-------+----------|
|28 | | | | | | | | | |
---------------------------------------------------------------------------
Примітка: аналогічні формати можуть використовуватися дляеталонної хімічної речовини та контролю токсичності.
6. АНАЛІЗ ВУГЛЕЦЮ (необов'язковий)
Карбоаналізатор:
------------------------------------------------------------------
|Час (день) |Холоста проба мгл|Досліджувана хімічна речовина мг/л|
|-----------+-----------------+----------------------------------|
| 0 | C | C |
| | b(o) | o |
|-----------+-----------------+----------------------------------|
| 28(*) | C | C |
| | b(t) | t |
------------------------------------------------------------------
----------------
(*) Або наприкінці інкубації.
C - C
t b(t)
% відщеплення РОВ = (1 - ----------- x 100
C - C
o b(o)
7. АБІОТИЧНЕ РОЗКЛАДАННЯ (необов'язкове)
утворення CO у стерильній колбі після 28 дня (мг)
2
% абіотичного розкладання = -------------------------------------------------- x 100
ТВГ (мг)
ЧАСТИНА V. ДОСЛІДЖЕННЯ ЗА МЕТОДОМ МАНОМЕТРИЧНОЇ СПІРОМЕТРІЇ(Метод C.4-D)
V.1. ПРИНЦИП МЕТОДУ
Виміряний об'єм засіяного мінерального середовища, що міститьвідому концентрацію досліджуваної хімічної речовини (100 мг/лдосліджуваної речовини, що дає як мінімум 50-100 мг ТПК/л) якномінального єдиного джерела органічного вуглецю, перемішується запостійної температури (+- 1 град.C або менше) в закритій колбі запостійної температури до 28 днів. Поглинання кисню визначаєтьсявимірюванням кількості кисню (отриманого шляхом електролізу),необхідної для підтримання постійного об'єму газу в колбіспірометра або ж за зміною об'єму чи тиску (або того й іншого) вапараті. Виділений вуглекислий газ абсорбується розчиномгідроокису калію або іншого придатного для цієї мети абсорбенту.Кількість кисню, поглинутого досліджуваною речовиною (ізурахуванням поправки на паралельне поглинання холостою пробоюпосівного матеріалу) виражається через відсоток ТПК або ХПК. Якваріант, значення первинного біорозкладання може бути вирахуваноза допомогою додаткового спеціального аналізу, проведеного напочатку та наприкінці інкубації, а кінцевого біорозкладання - задопомогою аналізу РОВ.
V.2. ОПИС МЕТОДУ
V.2.1. Обладнання
(a) придатний спірометр;
(b) терморегулятор, що підтримує температуру принаймні нарівні +- 1 град.C;
(c) пристрій для мембранного фільтрування (необов'язково);
(d) карбоаналізатор (необов'язково).
V.2.2. Приготування мінерального середовища
Стосовно приготування основних розчинів див. I.6.2.
Необхідно змішати 10 мл розчину (a) та 800 мл води длярозчинення, додати 1 мл розчинів від (b) до (d) та довести дооб'єму 1 л за допомогою води для розчинення.
V.2.3. Приготування та попередня підготовка посівногоматеріалу
Посівний матеріал може бути взято з ряду джерел, серед якихактивований мул, очищені стічні води, поверхневі води, ґрунти абоїх суміш.
Див. I.6.4., I.6.4.1., I.6.4.2. та I.6.5.
V.2.4. Підготовка колб
Необхідно приготувати розчини досліджуваної та еталонноїхімічних речовин в окремих партіях, у мінеральному середовищі ізконцентрацією, в нормі, 100 мг хімічної речовини на літр (що даєяк мінімум 50-100 мг ТПК/л), із використанням основних розчинів.
Значення ТПК обчислюється на основі утворення солей амонію; вразі, якщо очікується нітрифікація, обчислення має ґрунтуватися наутворенні нітратів (див. Додаток 2.2)
Слід визначити значення водневого показника та занеобхідності привести його до 7,4 +- 0,2.
Слабкорозчинні речовини слід додавати пізніше (див. нижче).
Якщо необхідно визначити токсичність досліджуваної хімічноїречовини, слід приготувати ще один розчин у мінеральномусередовищі, що містить як досліджувану, так і еталонну хімічнуречовину у такій самій концентрації, як у окремих розчинах.
За необхідності вимірювання фізико-хімічного поглинання киснюслід приготувати розчин досліджуваної хімічної речовини ізконцентрацією, в нормі, 100 мг ТПК/л, попередньо стерилізованийщляхом додавання відповідної токсичної речовини (див. I.6.6).
Слід ввести необхідний об'єм розчинів досліджуваної таеталонної хімічних речовин, відповідно, щонайменше у дві колби. Врешту колб слід додати лише мінеральне середовище (для контролюпосівного матеріалу) та, за необхідності, змішаний розчиндосліджуваної та еталонної хімічної речовин і стерильний розчин.
Якщо досліджувана хімічна речовина є слабко розчинною,необхідно додати її безпосередньо на цьому етапі за вагою абооб'ємом, або ж працювати з нею згідно Додатку 3. У відділиабсорбера CO слід додати гідроокис калію, гранули натрового вапна
2
або інший абсорбент.
V.2.5. Кількість колб у типовому циклі
Колби 1 та 2: Пробна суспензія
Колби 3 та 4: Холоста проба посівного матеріалу
Колба 5: Процедурний контроль
Бажано та за необхідності:
Колба 6: Стерильний контроль
Колба 7: Контроль токсичності
Див. також I.6.7.
V.2.6. Проведення досліду
Слід зачекати, поки температура посудин не сягне необхідноїтемператури, після чого засіяти у відповідні посудинипідготовлений активований мул або інше джерело посівногоматеріалу, щоб отримати концентрацію твердої зависі не більш ніж30 мг/л. Після цього необхідно зібрати обладнання, запуститизмішувач, провести перевірку на предмет герметичності та почативимірювання поглинання кисню. Як правило, подальше спостереженняобмежується зняттям необхідних показників та щоденними перевіркамина предмет підтримання потрібної температури та правильностіроботи змішувача.
Необхідно вирахувати поглинання кисню на основі даних, щорегулярно знімаються через короткі проміжки часу, із використаннямметодів, запропонованих виробником обладнання. Наприкінціінкубації, в нормі - через 28 днів, необхідно виміряти водневийпоказник вмісту колб, особливо якщо рівень поглинання кисню нижчийабо вищий за ТПК NH (для азотовмісних сполук).
4
За необхідності слід взяти зразки із колб спірометра, напочатку та наприкінці, для аналізу РОВ або конкретної хімічноїречовини (див. Додаток 2.4). При початковому заборі необхідноперевірити рівень пробної суспензії, що лишилася в колбі. Припоглинанні кисню азотовмісною досліджуваною речовиною необхідновизначити підвищення концентрації нітриту та нітрату протягом28 днів та обчислити поправку на поглинання кисню при нітрифікації(Додаток 5).
V.3. ДАНІ ТА ЗВІТУВАННЯ
V.3.1. Обробка результатів
Необхідно розділити значення поглинання кисню (мг)досліджуваної речовини після певного проміжку часу (із поправкоюна контроль холостої проби посівного матеріалу за той самий час)на вагу використаної досліджуваної хімічної речовини. Результатомє значення БПК, виражене у мг кисню/мг досліджуваної хімічноїречовини, тобто:
(мг поглинання O досліджуваною хімічною речовиною -
2
мг поглинання O холостою пробою)
2
БПК = -------------------------------------------------------
(мг досліджуваної хімічної речовини в колбі)
= мг O на мг досліджуваної хімічної речовини
2
Відсоткове значення біорозкладання обчислюється за допомогоюформули:
БПК (мг O /мг хімічної речовини)
2
% біорозкладання = % ТПК = ---------------------------------- x 100
ТПК (мг O хімічної речовини)
2
або
БПК (мг O /мг хімічної речовини)
2
% ХПК = -------------------------------- x 100
ХПК (мг O хімічної речовини)
2
Слід зазначити, що ці два методи не обов'язково даютьоднакове значення; краще використовувати перший метод.
Для досліджуваних речовин, що містять азот, необхідновикористовувати відповідне значення ТПК (NH або NO ) відповідно
4 3
до відомої або очікуваної нітрифікації (Додаток 2.2). Якщо
відбувається неповна нітрифікація, необхідно обчислити поправку на
поглинання кисню під час нітрифікації внаслідок змін концентрації
нітриту та нітрату (Додаток 5).
При додатковому визначенні органічного вуглецю та/абоконкретної хімічної речовини необхідно обчислити процентнезначення біорозкладання згідно I.7.
Всі результати слід занести в надані листи даних.
V.3.2. Достовірність результатів
Рівень поглинання кисню холостою пробою посівного матеріалузазвичай складає 20-30 мг O /л та не має перевищувати 60 мг/л за
2
28 днів. Значення більші за 60 мг/л вимагають критичного вивчення
даних та методики експерименту. Якщо значення водневого показника
виходить за рамки 6-8,5 і поглинання кисню досліджуваною хімічною
речовиною менше 60%, дослід слід повторити з меншою концентрацією
досліджуваної хімічної речовини.
Див. також I.5.2.
V.3.3. Звітування
Див. I.8.
V.4. ЛИСТ ДАНИХ
Нижче наведено зразок листа даних.
ДОСЛІДЖЕННЯ ЗА МЕТОДОМ ММТП (I)
1. ЛАБОРАТОРІЯ
2. ДАТА ПОЧАТКУ ДОСЛІДЖЕННЯ
3. ДОСЛІДЖУВАНА РЕЧОВИНА
Назва:
Концентрація основного розчину: мг/л
Початкова концентрація в середовищі, С : ... мг/л
O
Об'єм у дослідній колбі, V: ... мл
