Маркери невдачі схеми АРТ
------------------------------------------------------------------
| | Вірусологічна | Імунологічна | Клінічна |
| | невдача | невдача | невдача |
|----------------+---------------+---------------+---------------|
|Маркер |Вірусне |рівень CD4 |Інфекція |
| |навантаження | |(асоційована |
| | | |з ВІЛ) |
|----------------+---------------+---------------+---------------|
|Час від початку |24 тижні |48 тижнів |48 тижнів |
|АРТ | | | |
|----------------+---------------+---------------+---------------|
|Показник |> 50 копій/мл |Збільшення |Опортуністична |
| | |менше ніж на |інфекція (слід |
| | |50 клітин/мкл |виключити |
| | | |синдром |
| | | |відновлення |
| | | |імунної |
| | | |системи) |
------------------------------------------------------------------
Додаток 4
до пункту 2.4 Клінічного
протоколу діагностики
та лікування вірусного
гепатиту C у дорослих,
хворих на ВІЛ-інфекцію
ОСНОВНІ ПОБІЧНІ ЕФЕКТИ
АРВ-препаратів та тактика ведення пацієнтів
-----------------------------------------------------------------------------------
|Препарат| Побічні ефекти | Примітки | Дії |
|--------+-------------------+----------------------+-----------------------------|
| AZT |Супресія кісткового|Контроль загального |При вираженій анемії |
| |мозку: |аналізу крові через |(Hb <= 80 г/л) та/або |
| |- анемія та/або |2 тижні від початку |лейкопенії (загальна |
| |нейтропенія/або |терапії, потім - |кількість лейкоцитів |
| |тромбоцитопенія |щомісяця протягом | 9 |
| | |6 місяців, далі - |<= 1,5 - 2 х 10 /л) |
| | |1 раз на 3 місяці |заміна AZT на d4T. |
| | |(якщо ситуація |Для корекції анемії |
| | |стабільна) |застосовувати еритропоетин; |
| | | |лейкопенії - гранулоцитарний |
| | | |або |
| | | |гранулоцитарно-макрофагальний|
| | | |колонієстимулюючий фактор |
| |-------------------+----------------------+-----------------------------|
| |Розлади ШКТ: |Розлади ШКТ легкого |Пояснити причину та |
| |- нудота |ступеня розвиваються |розповісти про особливості |
| |- блювання |відносно часто, але |цього побічного ефекту, |
| |- діарея |майже завжди після |симптоматичне лікування. |
| | |першого місяця прийому|Визначати рівень АЛТ через |
| | |препарату стан |2 тижні, потім щомісячно |
| | |пацієнта покращується |протягом 6 місяців від |
| | | |початку терапії, надалі - |
| | | |кожні 3 місяці для |
| | | |диференційної діагностики |
| | | |нудоти, блювання в якості |
| | | |проявів гепатотоксичності. |
| |-------------------+----------------------+-----------------------------|
| |Розлади ЦНС: |90% пацієнтів здатні |Якщо пацієнт не може їх |
| |- головний біль |переносити ці побічні |переносити, замініть AZT на |
| |- міалгії |ефекти |d4T |
| |- втомлюваність | | |
| |- безсоння | | |
| |-------------------+----------------------+-----------------------------|
| |Потемніння |Немає уражень шкіри |Рекомендувати не надавати |
| |нігтьових пластинок| |цьому значення |
|--------+-------------------+----------------------+-----------------------------|
| 3TC |Добре переноситься | | |
|--------+-------------------+----------------------+-----------------------------|
| ddI |Панкреатит |Ризик підвищується у |У випадку вираженості |
| | |поєднанні з d4T; |відмінити препарат |
| | |поєднання суворо | |
| | |не рекомендується при | |
| | |вагітності | |
| |-------------------+----------------------+-----------------------------|
| |Периферична |Ризик підвищується у |Симптоми звичайно зникають |
| |нейропатія |поєднанні з d4T, |протягом 2-3 тижнів після |
| | |поєднання суворо |скасування препаратів. |
| | |не рекомендується при |Призначити інший препарат |
| | |вагітності |класу НІЗТ, позбавлений |
| | | |нейротоксичної дії (наприклад|
| | | |AZT, ABC). |
|--------+-------------------+----------------------+-----------------------------|
| ABC |Розлади ШКТ: |Розлади ШКТ легкого |Пояснити причину та |
| |- нудота |ступеня розвиваються |розповісти про особливості |
| |- блювання |досить часто, але |цього побічного ефекту, |
| |- діарея |майже завжди після |симптоматичне лікування. |
| |- анорексія |першого місяця прийому|Визначати рівень АЛТ через |
| | |препарату стан |2 тижні, потім щомісячно |
| | |пацієнта покращується |протягом 6 місяців від |
| | | |початку терапії, надалі - |
| | | |кожні 3 місяці для |
| | | |диференційної діагностики |
| | | |нудоти, блювання в якості |
| | | |проявів гепатотоксичності. |
| |-------------------+----------------------+-----------------------------|
| |Розлади ЦНС: |90% пацієнтів здатні |Якщо пацієнт не може їх |
| |- головний біль |переносити ці побічні |переносити, замініть АВС на |
| | |ефекти |інші НІОТ |
| |-------------------+----------------------+-----------------------------|
| |Реакція |Важкий побічний ефект!|Негайно припинити прийом АВС |
| |гіперчутливості: | |та всіх препаратів АРТ. |
| |- підвищення | | |
| |температури тіла в | | |
| |сполученні з | | |
| |гострим порушенням | | |
| |дихання та розладом| | |
| |ШКТ | | |
|--------+-------------------+----------------------+-----------------------------|
| TDF |Розлади ШКТ |Розлади ШКТ |Пояснити причину та |
| | |розвиваються не часто,|розповісти про особливості |
| | |мало даних |цього побічного ефекту, |
| | | |симптоматичне лікування. |
| |-------------------+----------------------+-----------------------------|
| |Нефротоксична дія |Мало даних. Частіше в |Контролювати рівні креатиніну|
| | |осіб із попереднім |в крові, враховувати анамнез.|
| | |ураженням нирок |Проводити симптоматичну |
| | |Рідко: побічний ефект |терапію. В разі необхідності |
| | |може бути важким |провести корекцію дози: TDF |
| | |(тубулярна |через день (потрібне |
| | |недостатність) |визначення кліренсу |
| | | |креатиніну). |
| | | |Відміна TDF необхідна |
| | | |у випадку важкої ниркової |
| | | |тубулярної недостатності). |
| | | |На підставі результатів |
| | | |спостереження кількох хворих |
| | | |є повідомлення про |
| | | |необхідність гемодіалізу |
| | | |у випадку виникнення |
| | | |ускладнень. |
|--------+-------------------+----------------------+-----------------------------|
| EFV |Розлади ЦНС: |Ці побічні ефекти |Рекомендувати прийом |
| |- запаморочення |зустрічаються у 50% |препарату перед сном. |
| |- безсоння |пацієнтів, але |Не рекомендований прийом |
| |- патологічні |зазвичай послаблюються|перед сном важкої їжі |
| |сновидіння |і зникають протягом |з високим вмістом жирів. |
| |- зміни особистості|2-3 тижнів |У випадках важких розладів |
| | | |ЦНС, важкої депресії, |
| | | |суїцидальних тенденціях |
| | | |показана заміна EFV |
| | | |на LPV/rtv, або NFV. |
|--------+-------------------+----------------------+-----------------------------|
| NVP |Токсична дія на |Реєструється у 12,5% |Приймати початкову дозу |
| |печінку |пацієнтів, які |протягом перших двох тижнів |
| | |приймають NVP. |(1 таблетка на день), після |
| | |При наявності |чого збільшити її до |
| | |у пацієнта вірусних |терапевтичної. Визначати |
| | |гепатитів B і C ризик |рівень АЛТ через 2 тижні, |
| | |гепатотоксичних |потім щомісячно протягом |
| | |ефектів значно |6 місяців від початку |
| | |зростає. |терапії, надалі - кожні |
| | | |3 місяці. |
| | | |Якщо АЛТ підвищується > норми|
| | | |в 6-8 разів, необхідно |
| | | |тимчасово припинити прийом |
| | | |усіх антиретровірусних |
| | | |препаратів, доки АЛТ |
| | | |не знизиться до прийнятного |
| | | |рівня, потім розпочати нову |
| | | |схему АРТ на основі ІП. |
| | | |Можна спробувати схему з EFV.|
| | | |Для корекції порушень |
| | | |застосовувати |
| | | |гепатопротектори. |
| |-------------------+----------------------+-----------------------------|
| |Висипка |Виникає в 15-30% |Пояснити причину та |
| | |випадків |розповісти про особливості |
| | |Відміна вимагається |цього побічного ефекту |
| | |в 7% випадків |Необхідно диференціювати з |
| | |Рідкісні випадки |алергічною реакцією на інші |
| | |синдрому |препарати (котримоксазол, |
| | |Стівенса-Джонсона |антибіотики та інш.) |
| | | |При появі макульозної, |
| | | |папульозної висипки або |
| | | |сухого лущення шкіри прийом |
| | | |NVP слід продовжувати, але |
| | | |не збільшувати дозу |
| | | |до зникнення висипки. |
| | | |При появі пухирців, виразок, |
| | | |мокнучих ділянок з лущенням |
| | | |або вогнищ ураження слизових |
| | | |оболонок, або лихоманки слід |
| | | |припинити АРТ, в подальшому |
| | | |заміна NVP на ІП. |
|--------+-------------------+----------------------+-----------------------------|
|LPV/rtv |Розлади ШКТ: |Розлади ШКТ різного |У випадку діареї - приймати |
| |- діарея |ступеня виникають |достатньо рідини, |
| |- підвищення |у 15-25% випадків |не допускати зневоднення, |
| |активності |Важка діарея |застосовувати антидіарейні |
| |печінкових |зустрічається рідко |препарати. Контролювати |
| |трансаміназ |Підвищення АЛТ > |рівень АЛТ - 1 раз на |
| |- порушення обміну |5 разів - у 10% |3 місяці. |
| |ліпідів |випадків |Для корекції |
| |- гіперглікемія |Порушення ліпідного |гіпертрансфераземії |
| |з інсуліно- |обміну та |застосувати гепатопротектори.|
| |резистентністю |інсулінорезистентність|Контроль ліпідів 1 раз на |
| | |є віддаленими |6 місяців та глюкози крові |
| | |побічними ефектами, |1 раз на 3 місяці. |
| | |виникають при |У випадку непереносимості - |
| | |тривалому прийомі |заміна LPV/rtv на препарат |
| | |препарату |класу НІЗТ: EFV або NVP, |
| | | |або ІП: NFV |
-----------------------------------------------------------------------------------
Додаток 5
до пункту 2.4 Клінічного
протоколу діагностики
та лікування вірусного
гепатиту C у дорослих,
хворих на ВІЛ-інфекцію
СЕРЙОЗНІ ПОБІЧНІ РЕАКЦІЇ
АРВ препаратів: клінічні прояви, діагностика і тактика ведення пацієнтів
-------------------------------------------------------------------------
|Побічна реакція|Препарат(и), які| Клінічні прояви | Тактика ведення |
| |викликають таку | | пацієнта |
| |побічну реакцію | | |
|---------------+----------------+--------------------+-----------------|
|Гострий |NVP (2%), |Жовтяниця, |- Регулярно |
|гепатит, |частіше якщо |гепатомегалія, |визначайте рівень|
|некроз | -1 |симптоми розладів |АЛТ, ACT, |
|печінки |CD4 > 250 мкл |ШКТ, втомлюваність, |білірубіну |
|(загрожує |у жінок та |втрата апетиту; |- через два тижні|
|життю) | -1 |підвищення АЛТ/АСТ. |після початку |
| |> 400 мкл |Гепатит, спричинений|лікування, потім |
| |у чоловіків, |прийомом NVP, може |щомісячно |
| |рідше EFV; |супроводжуватися |протягом |
| |ще рідше AZT, |симптомами |6 місяців, |
| |ddI, d4T (< 1%);|алергічної реакції |потім - кожні |
| |інгібітори |(висипка, загальні |3 місяці |
| |протеази (ІП): |симптоми, лихоманка,|при стабільній |
| |частіше всього |еозинофілія) |ситуації |
| |RTV у випадку |Зазвичай |- Симптомачна |
| |використання |розвивається в перші|терапія |
| |в терапевтичній |6-18 тижнів |- Негайно |
| |дозі, |лікування, рідко - |припинити прийом |
| |а не в якості |через 48 тижнів |усіх |
| |бустеру | |антиретровірусних|
| | | |препаратів до |
| | | |зникнення |
| | | |симптомів |
| | | |- NVP слід |
| | | |відмінити, в |
| | | |подальшому, коли |
| | | |клінічний стан |
| | | |хворого та |
| | | |лабораторні |
| | | |показники |
| | | |повернуться до |
| | | |норми, розпочати |
| | | |нову схему АРТ на|
| | | |основі ІП |
|---------------+----------------+--------------------+-----------------|
|Гострий |ddI + d4T > |Нудота, блювання, |- Регулярно |
|панкреатит |ddI > d4T |болі в животі, |визначайте рівень|
| |ddI - 1-7% |підвищений рівень |панкреатичних |
| |рідше за умов |ліпази |амілази і ліпази |
| |підбору дози; | |у сироватці крові|
| |ризик | |- Симптоматична |
| |підвищується | |терапія, |
| |при зловживанні | |знеболення, |
| |алкоголю | |парентеральне |
| | | |харчування |
| | | |- Припинити |
| | | |прийом усіх |
| | | |антиретровірусних|
| | | |препаратів до |
| | | |зникнення |
| | | |симптомів |
| | | |Після перерви |
| | | |почати нову схему|
| | | |АРТ з новим НІЗТ,|
| | | |який не здійснює |
| | | |токсичної дії на |
| | | |підшлункову |
| | | |залозу (наприклад|
| | | |AZT, TDF, ABC) |
|---------------+----------------+--------------------+-----------------|
|Лактацидоз |ddI + d4T > |Перші клінічні |- Контроль рівня |
|(загрожує |ddI > d4T > AZT |прояви лактацидозу |молочної кислоти |
|життю) |Всі нуклеозидні |можуть бути |не рутинно, а при|
| |інгібітори |найрізноманітнішими:|наявності |
| |зворотньої |у продромальному |клінічних |
| |транскриптази |періоді можуть |симптомів |
| |(НІЗТ) |розвиватися загальна|- Контроль рівня |
| | |слабкість та |ЛДГ, АЛТ, |
| | |втомлюваність, |електролітів при |
| | |розлади ШКТ (нудота |наявності |
| | |блювання, діарея, |симптомів |
| | |болі в животі, |- Припинити |
| | |гепатомегалія, |прийом усіх |
| | |втрата апетиту і |антиретровірусних|
| | |немотивована втрата |препаратів до |
| | |ваги), розлади |зникнення |
| | |дихання (прискорене |симптомів та |
| | |дихання, задишка) |нормалізації |
| | |або неврологічні |стану хворого; |
| | |симптоми (включаючи |після повного |
| | |м'язову слабкість), |припинення АРТ |
| | |панкреатит, |симптоми можуть |
| | |поліорганні |зберігатися |
| | |ураження 1-10 на |тривало (місяці) |
| | |1000 пацієнто-років |або посилюватися |
| | |для ddI та d4T |- Патогенетична |
| | | |синдромальна |
| | | |терапія |
| | | |(бікарбонат |
| | | |натрію, інфузійна|
| | | |терапія, ШВЛ при |
| | | |вираженій |
| | | |дихальній |
| | | |недостатності, |
| | | |гемодіаліз) |
| | | |- Тіамін і |
| | | |рибофлавин |
| | | |- При поновленні |
| | | |АРТ заміна на |
| | | |інші НІЗТ: |
| | | |ABC, TDF, 3TC, |
| | | |FTC, або |
| | | |призначення схеми|
| | | |що включає 1 ІП +|
| | | |1 ННІЗТ (тобто |
| | | |схема без НІЗТ) |
|---------------+----------------+--------------------+-----------------|
|Реакція |ABC та NVP |ABC: Гострий |- Не починайте |
|гіперчутливості| |початок: спектр |разом з іншими |
|(загрожує | |клінічних проявів |препаратами, які |
|життю) | |включає підвищення |можуть спричинити|
| | |температури, |висипку (ННІЗТ) |
| | |втомлюваність, |- Нагляд за |
| | |міалгії, нудоту й |станом шкірних |
| | |блювання, діарею, |покривів |
| | |болі в животі, |- Припинити |
| | |фарингіт, кашель, |прийом усіх |
| | |задишку; може |антиретровірусних|
| | |з'являтися висипка; |препаратів до |
| | |оскільки такі |зникнення |
| | |симптоми характерні |симптомів. На |
| | |для більшості |фоні прийому |
| | |поширених |препарату реакція|
| | |інфекційних |гіперчутливості |
| | |захворювань, |посилюється і |
| | |розвиток реакції |може призвести до|
| | |гіперчутливості перш|смерті хворого |
| | |за все слід |- Призначити |
| | |припустити у випадку|підтримуючу |
| | |коли після початку |терапію |
| | |прийому АВС гостро |(антигістамінні |
| | |виникають порушення |препарати, |
| | |дихання, що |кортикостероїди) |
| | |супроводжуються |- Не можна ніколи|
| | |розладом ШКТ 5%, |надалі |
| | |зазвичай у перші |поновлювати |
| | |6 тижнів лікування |прийом АВС (або |
| | |NVP: Загальні |NVP) через |
| | |симптоми: підвищення|небезпеку |
| | |температури, міалгії|анафілактичних |
| | |артралгії, гепатит, |реакцій та смерті|
| | |еозинофілія, |хворих |
| | |можлива висипка |- Після зникнення|
| | | |симптомів |
| | | |поновлюють АРТ, |
| | | |замінивши ABC на |
| | | |інший НІЗТ: AZT, |
| | | |TDF, або d4T, |
| | | |якщо реакція |
| | | |гіперчутливості |
| | | |пов'язана з ABC; |
| | | |якщо вона |
| | | |пов'язана з NVP, |
| | | |призначити схему |
| | | |що містить ІП, |
| | | |або схему на |
| | | |основі НІЗТ |
| | | |(3 НІЗТ) |
|---------------+----------------+--------------------+-----------------|
|Виражена |Ненуклеозидні |Висипка звичайно |- Моніторинг |
|висипка/ |інгібітори |з'являється в перші |стану шкіри, |
|синдром |зворотньої |2-4 тижні |температури тіла |
|Стівенса- |транскриптази |лікування. |часті |
|Джонсона, |(ННІЗТ): NVP, |Характерна |відвідування |
|токсичний |EFV NVP - 1% |еритематозна, |- Припинити |
|епідермальний |EFV - 0,1% |макулопапульозна |прийом усіх |
|некроліз | |висипка із злиттям |антиретровірусних|
| | |елементів, найбільш |препаратів до |
| | |виражена на тулубі |зникнення |
| | |та руках, може |симптомів |
| | |супроводжуватися |- Припинити |
| | |сверблячкою. |прийом NVP |
| | |Температура |і ніколи його |
| | |підвищується не у |не поновлювати, |
| | |всіх пацієнтів |якщо висипка |
| | |Синдром |супроводжується |
| | |Стівенса-Джонсона, |загальними |
| | |чи токсичний |симптомами |
| | |епідермальний |(підвищенням |
| | |некроліз, що |температури), чи |
| | |загрожує життю |спостерігаються |
| | |хворого, |важкі ураження |
| | |розвивається у 1% |шкіри (з |
| | |хворих, які |ураженням |
| | |отримують NVP |слизових оболонок|
| | | |чи по типу |
| | | |кропив'янки), чи |
| | | |синдром |
| | | |Стівенса-Джонсона|
| | | |(токсичний |
| | | |епідермальний |
| | | |некроліз) |
| | | |- Після зникнення|
| | | |симптомів |
| | | |відновити АРТ, |
| | | |призначивши |
| | | |препарати іншого |
| | | |класу (наприклад,|
| | | |2 НІЗТ і 1 ІП чи |
| | | |3 НІЗТ) |
|---------------+----------------+--------------------+-----------------|
|Важка |ddI, d4T |Може спостерігатися |- Здійснювати |
|периферична |10% через кілька|інтенсивний біль, |контроль стану |
|нейропатія |місяців |втрата чутливості |периферичних |
|(може бути |лікування, |дистальних відділів |нервів |
|незворотною, |також після |верхніх та нижніх |- Попередити |
|якщо |декількох років |кінцівок, втрата |пацієнта про |
|не припинити | |периферичних |можливі прояви |
|прийом цих | |рефлексів, м'язова |ускладнення |
|препаратів) | |слабкість |- Припинити |
| | | |прийом всіх |
| | | |антиретровірусних|
| | | |препаратів до |
| | | |зникнення |
| | | |симптомів |
| | | |- Призначити |
| | | |нейралгін |
| | | |- Призначити |
| | | |антидепресанти |
| | | |- Призначити |
| | | |тіамін |
| | | |і рибофлавін |
| | | |- При відновленні|
| | | |лікування |
| | | |призначити інший |
| | | |препарат класу |
| | | |НІЗТ, позбавлений|
| | | |нейротоксичної |
| | | |дії (наприклад, |
| | | |AZT, TDF, ABC) |
|---------------+----------------+--------------------+-----------------|
|Підвищення |Всі ННІЗТ |Якщо немає інших |- Здійснювати |
|рівня |(особливо NVP) |пояснень, необхідно |контроль АЛТ |
|трансаміназ > |Всі ІП |виключити ВГВ, ВГС |через два тижні |
|норми | | |після початку |
|в 5-6 разів | | |лікування, потім |
| | | |щомісячно |
| | | |протягом |
| | | |6 місяців, потім |
| | | |кожні 3 місяці |
| | | |при стабільній |
| | | |ситуації |
| | | |- Виключити інші |
| | | |причини |
| | | |порушення: прийом|
| | | |гепатотоксичних |
| | | |лікарських |
| | | |препаратів, |
| | | |наркотиків, |
| | | |вірусні гепатити |
| | | |- Припинити ННІЗТ|
| | | |- Індивідуальне |
| | | |рішення: при |
| | | |продовженні ІП |
| | | |перевищення норми|
| | | |АЛТ у 5 разів |
| | | |часто зникає |
|---------------+----------------+--------------------+-----------------|
|Важка тубулярна|TDF. Частіше |Синдром Фанконі |- Відміна TDF |
|ниркова |в осіб із | |необхідна у |
|недостатність |попереднім | |випадку важкої |
| |ураженням нирок | |ниркової |
| |в анамнезі | |тубулярної |
| | | |недостатності |
| | | |- На підставі |
| | | |результатів |
| | | |спостереження |
| | | |кількох хворих, є|
| | | |повідомлення про |
| | | |необхідність |
| | | |гемодіалізу у |
| | | |випадку |
| | | |виникнення |
| | | |ускладнень |
| | | |- Кількість |
| | | |відомостей |
| | | |лишається |
| | | |недостатньою |
-------------------------------------------------------------------------
Додаток 6
до пункту 2.6 Клінічного
протоколу діагностики
та лікування вірусного
гепатиту C у дорослих,
хворих на ВІЛ-інфекцію
ПОРЯДОК
лабораторного моніторингу лікування
(3)
вірусного гепатиту C у хворого на ВІЛ-інфекцію
Додаток 7
до пункту 2.6 Клінічного
протоколу діагностики
та лікування вірусного
гепатиту C у дорослих,
хворих на ВІЛ-інфекцію
ПОРЯДОК
забору біологічного матеріалу (крові) для визначення РНК ВГС методом ПЛР
Загальні правила забору матеріалу:
- Здійснювати забір клінічного матеріалу, суворо дотримуючись інструкції, тільки стерильними одноразовими інструментами, в стерильні одноразові системи (або пробірки). Працювати тільки в одноразових гумових рукавицях.
- Суворо дотримуватись правил зберігання та транспортування клінічних проб. Охолоджувальні елементи перед транспортуванням клінічного матеріалу необхідно заморожувати при температурі мінус 20-70 град.C.
Забір матеріалу:
- Категорично заборонено використовувати гепарин у якості антикоагулянту.
- Категорично заборонено відкривати кришки стерильних пробірок під час забору крові.
- Визначення РНК вірусу гепатиту C проводять тільки в плазмі крові (в сироватці крові РНК ВГС не визначають).
- Пробірку слід маркувати і вказати наступні дані:
- ПІП або ідентифікаційний код пацієнту;
- Дату забору крові;
- Забір крові проводять натще із периферичної вени одноразовою голкою (діаметр 0,8-1,1 мм) в спеціальну пробірку - вакуумну систему типу "Venoject" (з ЕДТА) об'ємом 4 мл, або "Vacuetto" (з ЕДТА) об'ємом 4 мл у співвідношенні ЕДТА до крові як 1:20, не знімаючи гумових пробок з вакуумних систем. Під час забору пробку проколюють спеціальною насадкою з голкою, завдяки чому кров в стерильних умовах потрапляє до вакуумної системи, яка вміщує антикоагулянт. Для отримання достатньої кількості плазмицільну кров потрібно відбирати об'ємом не менш 4 мл.
- Одразу після заповнення кров'ю пробірку акуратно перевертають 3-4 рази для перемішування крові з антикоагулянтом.
- Для отримання плазми пробірку - вакуумну систему з цільною кров'ю та антикоагулянтом центрифугують при 1500 об./хв. протягом 20 хвилин при кімнатній температурі.
- Після цього пробірку акуратно відкривають, не роблячи різких рухів, щоб не допустити розбризкувань, які ведуть до контамінації (забруднення) проб та робочих поверхонь.
- Плазму, об'ємом не менш 1 мл, відбирають окремими кінцівками з аерозольним бар'єром в одноразові стерильні пробірки системи "eppendorf".
- Після перенесення плазми пробірки відразу щільно закривають, не торкаючись внутрішніх поверхонь самих пробірок та внутрішніх поверхонь кришок.
- Кінцівки з аерозольними бар'єрами, об'ємом до 1 мл, повинні знаходитись в спеціальних штативах для кінцівок.
- Категорично заборонено торкатись поверхонь кінцівок гумовими рукавичками або руками. Кінцівки насаджують на піпетки змінного об'єму безпосередньо зі штативу.
- У тих випадках, коли немає умов для відокремлення плазми протягом 6 годин, рекомендується використовувати пробірки для сепарування плазми - з розділювальним гелем (наприклад BD PPT(ТМ) з К2Е (ЕДТА)). Кров відбирають, не знімаючи гумових пробок, потім пробірку акуратно перевертають 3-4 рази для перемішування крові з антикоагулянтом та негайно центрифугують 20 хвилин при 2000 об./хв. при кімнатній температурі (при цьому еритроцити повинні осісти на дно пробірки, а плазма - залишитись зверху над гелем). Пробірки транспортують у первинному вигляді протягом 30 годин при + 4 град.C до лабораторії ПЛР-аналізу.
Умови зберігання матеріалу:
- Зразки плазми в пробірках "eppendorf, об'ємом 1,5 мл, зберігають:
- при температурі 2-8 град.C - протягом 4 годин;
- при температурі мінус 18 град.C - протягом 4 місяців;
- при температурі мінус 70 град.C - довготривалий строк.
- дозволяється тільки однократне заморожування - відтаювання.
- Зразки плазми в пробірках BD PPT(ТМ) з K2E зберігаються при температурі 2-8 град.C - протягом 30 годин. Пробірки з розділювальним гелем до моменту відбору плазми не заморожують!
Умови транспортування матеріалу:
- Транспортування клінічного матеріалу та оброблених проб здійснюється в спеціальному термоконтейнері з охолоджуючими елементами або в термосі з льодом.
- Плазму крові (не цільну кров) транспортують:
- при температурі 2-8 град.C - не більше 24 годин,
- в замороженому вигляді - протягом 1 доби.
Отриману плазму використовують для визначення РНК вірусу гепатиту C або ДНК вірусу гепатиту B.