Определение ДНКазной активности можно проводить не только у суточных культур, но без предварительного пересева их после 7 - 10 дневного хранения в холодильнике.
В настоящее время показана принципиальная возможность использования для определения ДНКазной активности не только высокополимерной ДНК, но и натриевой ее соли, получаемой из селезенки рогатого скота, производства Олайнского завода химических реактивов Латвийской ССР.
С целью сокращения расхода ДНК рекомендуется использовать двухслойный метод определения ДНКазной активности, предложенный А. А. Трояшкиным. Сущность этого метода заключается в том, что ДНК вносится лишь в верхний слой среды, налитый в чашку Петри. Методика постановки реакции:
1. К 100 мг натриевой соли ДНК добавляют 10 мл дистиллированной воды, 0,5 мл 0,2 N раствора NaOH и осторожно встряхивают. Пробирку оставляют при комнатной температуре или в термостате до следующего дня. Для ускорения растворения ДНК пробирку можно поместить в кипящую водяную баню. Готовый раствор ДНК имеет вид и консистенцию нативного яичного белка (рабочий раствор ДНК).
2. В расплавленный 2 % агар (pH 7,2 - 7,4), разлитый в пробирки по 10,0 мл, добавляют по 1 мл рабочего раствора ДНК и 0,1 мл продажного стерильного 10 % раствора хлористого кальция. Смесь тщательно перемешивают и стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм. в течение 20 минут, или дробно - три дня подряд по 20 минут в кипящей водяной бане. Агар с ДНК можно хранить 1,5 - 2 месяца в холодильнике, не допуская высыхания.
3. Чашки с 2 % питательным агаром следует хорошо подсушить. Столбик агара с ДНК растапливают в водяной бане и выливают равномерно вторым слоем на агар и ставят на ровную поверхность. После застывания второго слоя чашки снова подсушивают. Посев испытуемых культур, режим термостатирования и учет результатов проводятся как описано выше.
Наличие ДНКазной активности является простым, удобным и весьма специфическим тестом дифференциации золотистого стафилококка и эпидермального стафилококка. ДНКазная активность обнаруживается у 97 - 98 % штаммов золотистого стафилококка.
III. Определение ферментации маннита в анаэробных условиях
Для реакции можно использовать среду, приготовленную из сухого агара с индикатором ВР, содержащую маннит (пропись см. ниже). Среду разливают в пробирки по 4,0 мл и стерилизуют. По мере надобности пробирки со средой регенерируют и добавляют по 2,0 мл стерильного вазелинового масла. Когда среда остынет, уколом (до дна) производят посев испытуемой культуры. Пробирки помещают в термостат при 37 град. C на 5 суток. В случае разложения маннита среда приобретает синий цвет по всему столбику агара.
Способность разлагать маннит в аэробных условиях обнаруживается у 94 - 96 % штаммов золотистого стафилококка.
IV. Определение лецитовителлазной активности
При использовании для первичного посева среды, содержащей желток, специального дополнительного определения лецитовителлазной активности у стафилококка проводить нет необходимости. В случае выделения культуры с других сред в необходимости определения у нее этого признака следует на чашку с ЖСА посеять испытуемую культуру штрихом или бляшкой. Чашки инкубируют в термостате при 37 град. C в течение 18 - 20 часов. При положительном результате вокруг колоний стафилококка образуется радужный венчик, что обусловлено выделением фермента лецитовителлазы и разложением лецитина, находящегося в среде. Реакцию следует учитывать в отраженном свете. Лецитовителлазной активностью обладает 60 - 75 % штаммов золотистого стафилококка человеческого происхождения и 5 - 10 % штаммов стафилококка животного происхождения.
V. Определение пигментообразования
Пигмент колоний стафилококка может варьировать от ярко-золотистого к желтому, кремовому до белого. Пигментообразование лучше проявляется на свету, при посеве культур на агар, содержащий 10 % снятого молока.
Следует отметить, что золотистый пигмент образуют не только золотистый стафилококк; колонии некоторых эпидермальных стафилококков и микрококков могут иметь аналогичную окраску. В то же время золотистые стафилококки могут вырастать на агаре в виде белых колоний.
VI. Определение гемолитической активности
В настоящее время показано, что 60 - 70 % эпидермальных стафилококков на кровяном агаре образуют четкие зоны гемолиза. Поэтому определение гемолитической активности штамма не может служить четким дифференциально-диагностическим тестом для золотистого стафилококка и эпидермального стафилококка. В случае, если имеется необходимость определения альфа-гемолитической активности у выделенных штаммов необходимо использовать 3 - 5 % кровяной агар, содержащий эритроциты кролика, т. к. альфа-гемолизин стафилококка не лизирует эритроциты других животных и слабо лизирует эритроциты человека. Гемолитическая активность стафилококков животного происхождения может быть определена на 3 - 5 % кровяном агаре, содержащем эритроциты барана. Чашки с исследуемыми культурами выдерживают 24 часа в термостате при 37 град. C и 24 часа в холодильнике при температ. +4 град. C.
VII. Определение фаготипа золотистого стафилококка
Методика фаготипирования стафилококков подробно изложена в наставлении по применению типовых стафилококковых бактериофагов, прилагаемых к Международному набору, выпускаемому ИЭМ им. Н.Ф.Гамалеи АМН СССР.
Фаготипированию должны подвергаться только золотистые стафилококки. При этом следует руководствоваться следующими правилами: золотистые стафилококки, выделенные из верхних дыхательных путей у персонала родильных домов, должны подвергаться фаготипированию в обязательном порядке. Золотистые стафилококки, выделенные от больных, подвергаются фаготипированию по эпидемическим показаниям.
Для фаготипирования используются Международный набор из 22 умеренных фагов, которые разделены на 4 группы:
I группа - фаги 29, 52, 52А, 79, 80,
II группа - фаги 3А, 84, 3С, 55, 71,
III группа - фаги 6, 85, 42Е, 47, 53, 54, 75, 77, 83А,
IV группа - фаги 42Д,
Вне групп - фаги 81, 187.
При проведении фаготипирования необходимо руководствоваться следующим:
1. Первым этапом фаготипирования является приготовление соответствующих разведений фага. К каждой ампуле с высушенным фагом добавляют по 1,0 мл щелочного бульона Хоттингера, Мартена, мясо-пептонного бульона (pH 7,6). Поскольку фаги высушиваются в объеме 0,1 мл, при добавлении 1,0 мл бульона получают разведение 0,001. Если на этикетке ампулы указанное тест-разведение соответствует 0,001 (1:1000), то для получения разведения фага, равного 100ТР, в данную ампулу необходимо добавить 1,0 мл бульона. Полученное разведение фага 1:10 будет соответствовать 100ТР. Если на этикетке ампулы указанное тест-разведение фага соответствует 0,001 (1:1000), то для получения разведения фага, равного 100ТР, в данную ампулу необходимо добавить 1,0 мл бульона, и полученное разведение фага 1:10 развести еще в 10 раз. С этой целью к 0,1 мл разведения 1:10 добавляют 0,9 мл бульона. Полученное разведение соответствует 100ТР.
Фаготипирование рекомендуется начинать дозой фага 100ТР. Фаги в разведении 100ТР могут храниться в холодильнике при +4 град. C в течение 1,5 - 2 месяцев. Для предохранения высыхания пробирку с фагом следует закрывать стерильной резиновой пробной.
При приготовлении разведения фага для ампулы берут отдельную пипетку. После добавления бульона фаг быстро растворяется в ампуле и его переносят этой же пипеткой в стерильную пробирку. На последней подписывают столбиком порядковый номер фага, его название (тип), конечное разведение и тест-разведение:
Например: 1 или 19
29 83А
10-3 10-4
100ТР 100ТР
Для фаготипирования можно использовать не только 3 - 4 часовую, но и 18 - 20 часовую бульонную культуру.
3. Для приготовления среды использовать как 1,2 % агар, приготовленный на бульоне Хоттингера, так и сухой питательный агар или агар Д (pH 7,6) с добавлением 0,4 % глюкозы. Непосредственно перед разливом чашек в агар добавляют 0,2 мл стерильного продажного 10 % раствора хлористого кальция на 100 мл среды. Чашки подсушивают в термостате.
4. На подсушенные среды наносят бульонную культуру и засевают ее газоном, избыток культуры отсасывают пипеткой. Чашки с посевом вновь подсушивают. Поскольку на среду наносится массивный газон культуры, воздушное загрязнение среды не может при этом играть существенной роли. Для удобства работы можно закрывать чашки картонными крышками.
5. Дно подсушенных чашек со средой расчерчивают на 22 квадрата или на поверхности агара агглютинационной пробиркой делают 22 кружканасечки. В каждый квадрат или кружок оттянутой до капилляра пастеровской пипеткой наносят каплю соответствующего фага всегда в одном и том же порядке. Наносить фаг следует таким образом, чтобы не коснуться пипеткой поверхности среды и избежать тем самым переноса культуры на другую чашку со средой или пробирку с типовым фагом. Набирать в пипетку фаг следует над пламенем горелки.
Если количество исследуемых культур невелико, фаг можно наносить не пипеткой, а петлей, каждый раз прожигая ее.
Более удобно наносить фаг репликатором. В этом случае на хорошо подсушенную чашку наносят сначала фаг, вновь подсушивают, после чего наносят газоном исследуемую бульонную культуру. Избыток культуры удаляют пипеткой, чашки подсушивают, закрывают крышкой, переворачивают и помещают в термостат. Инкубируют при 37 град. C в течение 18 - 20 часов, либо 5 - 6 часов при 37 град. C и до следующего утра при комнатной температуре.
6. При учете результатов фаготипирования отмечают наличие лизиса тем, или иным фагом на ++++, +++ и ++ креста. При учете отмечают ++++ - сливной (полный) лизис.
+++ - полусливной лизис (незначительный рост культуры в зоне лизиса);
++ - наличие в месте нанесения капли фага свыше 50 колоний фага;
+ - почти полное отсутствие лизиса;
- - полное отсутствие лизиса.
Некоторые фаги вызывают как бы утончение роста культуры в месте нанесения фага, т. е. феномен ингибиции (подавление), обозначаемое "О". Ингибиция относится к слабой реакции, но ее наличие должно обязательно отмечаться в рабочем журнале.
Штамм считается типируемым, если хотя бы один фаг вызвал сильную реакцию на ++++, +++ или ++ креста. Стафилококковые штаммы чаще лизируются не одним, а несколькими фагами, что дает для каждого штамма характерную фагомозаику. Результаты фаготипирования регистрируются в журнале, с указанием дозы фага, вызвавшей лизис и степени лизиса.
Например: 100ТР - 3С++++/55+++/71++++.
В ответе степень лизиса не обозначается, указывается только фагомозаика данного штамма - 3С/55/71.
При определении идентичности штаммов следует ориентироваться на следующее: если культуры стафилококков, типированные в один и тот же день, дают фагомозаику, не различающуюся или различающуюся на одну сильную реакцию, то их следует считать идентичными. Если культуры стафилококка, типированные в один и тот же день, обнаруживают разницу на 2 и более сильные реакции, штаммы следует признать разными. Однако этот результат является ориентировочным и в каждом отдельном случае при решении вопроса об идентичности выделенных культур следует уточнить место их выделения, характеристику патогенных свойств, отношение к антибиотикам, эпидемическую ситуацию. Следует отметить, что внутри одной группы идентичные штаммы могут иметь различие более чем в одну сильную реакцию.
В настоящее время примерно 30 - 40 % выделенных культур золотистого стафилококка не чувствительны к используемым типовым фагам (так называемые нетипируемые штаммы золотистого стафилококка). Идентичность таких штаммов может быть установлена весьма ориентировочно на основании антибиограммы.
VIII. Определение фосфатазной активности
В 100 мл растительного и остуженного до 40 питательного агара добавляют 50 мг паранитрофенилфосфата. Смесь разливается стерильно в чашки (по 10 - 12 мл на чашку). Чашки с застывшим агаром подсушивают и на каждую из них точечным посевом наносятся исследуемые культуры (16 - 20 культур). Чашки помещают в термостат на 24 часа при 37 град. C. Появление интенсивного желтого окрашивания вокруг посевов регистрируется как положительная реакция.
Обязательным является постановка контролей со штаммами стафилококка, заведомо обладающими и не обладающими фосфатазной активностью.
Реакция фогес-Проскауэра (в модификации Баррита).
Исследуемую культуру засевают в глюкозофосфатный бульон Кларка. После 3 дней роста при 37 град. C 1,0 мл культуры переносят в пробирку и прибавляют 0,6 мл альфа-нафтола (5 % раствор в абсолютном спирте) и 0,2 мл КОН (40 % раствор) и взбалтывают. В положительном случае через 2 - 5 минут наступает розовое окрашивание. У штаммов, дающих сильную реакцию, окраска становится интенсивной и через 30 минут - 1 час переходит в малиновую. В отрицательных случаях розового окрашивания не наступает и раствор принимает цвет меди (КОН + альфа-нафтол).
Приложение N 4
к приказу Минздрава СССР
от 31 июля 1978 г. N 720
Инструкция
по очистке (мойке) и обеззараживанию аппаратов ингаляционного наркоза и искусственной вентиляции легких
1. Общие положения
1.1. Инструкция предназначена для специалистов лечебно-профилактических учреждений, эксплуатирующих аппараты ингаляционного наркоза (ИН) и искусственной вентиляции легких (ИВЛ).
1.2. Аппараты ИН и ИВЛ в процессе их использования обсеменяются различной микрофлорой, включая микобактерии туберкулеза, и без соответствующей обработки могут быть одним из факторов передачи заболеваний респираторного тракта (бронхит, пневмония, абсцессы и т. п.).
1.3. Аппараты ИН и ИВЛ как новые, так и после каждого использования, подвергают обработке (мойке и обеззараживанию) в соответствии с настоящей Инструкцией.
1.4. В зависимости от конструктивных особенностей аппараты ИН и ИВЛ обрабатывают двумя способами:
а) поблочно;
б) в собранном виде.
2. Очистка аппаратов ИН и ИВЛ
2.1. Обязательным условием надежности обеззараживания аппаратов ИН и ИВЛ является мойка отдельных элементов и блоков дыхательного контура и комплектующих аппарат деталей.
2.2. Очистке подвергают как новые аппараты с целью освобождения от пыли, связывающих, опудривающих веществ, так и аппараты после их использования с целью деконтаминации и удаления пирогенных веществ, кусочков тканей и других органических остатков.
2.3. Для мойки элементов и комплектующих деталей применяют комплекс, состоящий из 3 % раствора перекиси водорода с 0,5 % моющим средством ("Прогресс", "Новость", "Триас-А", "Астра", "Лотос"), величина pH рекомендуемого комплекса - 6,0 - 8,0. Использование 3 % раствора перекиси водорода с 0,5 % моющего средства позволяет разъединить мойку и дезинфекцию в один процесс.
2.3.1. Перекись водорода является хорошим окислителем. Выпускается промышленностью в виде водного раствора 30 - 33 % концентрации под названием "пергидроль". Пергидроль - жидкость без запаха и цвета.
В рекомендуемых концентрациях (3 % - 6 %) растворы перекиси водорода не токсичны для людей, незначительно меняют свойства материалов медицинского назначения.
2.3.2. Синтетические моющие средства "Новость", "Триас-А", "Астра", "Лотос" (первичные алкилсульфаты), "Прогресс" (вторичные алкилсульфаты) обладают высокой моющей активностью, хорошо разрыхляют различного рода загрязнения, практически не влияют на качество материала и достаточно легко смываются. При температуре 50 град. C активность моющих растворов возрастает. Оптимальной концентрацией моющих средств для очистки изделий является 0,5 %.
2.3.3. Приготовление комплекса перекиси водорода с моющим средством проводят в соответствии с расчетом, приведенным в табл. 1.
2.4. Процесс мойки включает ряд последовательных этапов:
2.4.1. Подготовка - разборка узлов, снятие шлангов, присоединительных элементов, крышек клапанных коробок, отсоединение и опорожнение сборников конденсат и т. п.
2.4.2. Предварительную промывку осуществляют под струей холодной, затем теплой воды в возможно более короткие сроки после использования аппарата. Особенно это относится к присоединительным элементам и инкубационным трубкам во избежание высыхания на них выделений, эксудата, крови и т. д.
2.4.3. Замачивание (дезинфекции) полное погружение с обязательным заполнением полостей обрабатываемых деталей в горячий (50 град. C) моющий раствор на 15 - 20 минут.
2.4.4. Собственно мойку осуществляют в том же растворе, в котором замачивали элементы и детали аппаратов. Детали моют ватно-марлевыми тампонами, затрачивая, в среднем, 25 - 30 секунд на каждый предмет. Не следует для очистки и мытья использовать острые предметы, а также щетки или ерши, т. к. имеется опасность оставления в патрубках щетинок от щеток (ершей) и последующая их аспирация в дыхательные пути. Марлевые тампоны используют для мытья однократно. Моющий раствор используют повторно, если он не изменил своего цвета.
2.4.5. Прополаскивание - вымытые детали прополаскивают в проточной воде в течение 5 минут. При использовании моющих средств "Астра" или "Лотос" детали прополаскивают 10 минут под контролем фенолфталеиновой пробы. После прополаскивания детали ополаскивают дистиллированной водой.
2.4.6. Сушка. После мытья и прополаскивания элементы и детали просушивают стерильной простыней и затем подвергают обеззараживанию.
2.4.7. Контроль эффективности очистки проводят в соответствии с п. 8 приложения N 1 к настоящему приказу.
Таблица 1
Приготовление моющего раствора - комплекса перекиси водорода с моющим средством
______________________
Примечание: При приготовлении раствора пергидроль приливают к раствору моющего средства, температура моющего раствора 50 град. C.
3. Обеззараживание комплектующих деталей и отдельных узлов и блоков аппаратов ИН и ИВЛ
3.1. Комплектующие детали: эндотрахеальные трубки, трахеотомические канюли, ротоглоточные воздуховоды, лицевые маски, мундштуки-загубники, изготовленные из резины и пластмасс, обеззараживают погружением в один из дезинфицирующих растворов:
- 3 % раствор перекиси водорода, экспозиция 60 минут;
- 3 % раствор формальдегида, экспозиция 30 минут;
- 1 % раствор хлорамина, экспозиция 30 минут;
- 0,1 % раствор дезоксона, экспозиция 20 минут.
Если трахеотомические канюли и ротоглоточные воздуховоды изготовлены из металла, то их обеззараживают кипячением в дистиллированной воде в течение 30 минут.
Изделия после обеззараживания отмывают последовательно в двух порциях стерильной воды, затем сушат и хранят в асептических условиях.
3.2. Присоединительные элементы: коннекторы, адаптеры, тройники, соединительные втулки и др., изготовленные из металла или термостойких пластмасс, обеззараживают методом кипячения или погружением в раствор по п. 5.1.
__________________
Примечание: Для металлических деталей с никелевым и хромовым покрытиями обеззараживание раствором дезоксона исключается, так как этот раствор вызывает коррозию металлов.
3.3. Нереверсивный клапан после разборки на составные части и мойки подвергают обеззараживанию методом кипячения или методом погружения по режимам, указанным в п. 5.1.
3.4. Дыхательные шланги, малый гофрированный шланг, корпус увлажнителя и сборники конденсата промывают сразу после использования под струей проточной воды, затем подвергают тщательной мойке по режиму, указанному в п. 3. Обеззараживают методом погружения в один из рекомендованных растворов препаратов, приведенных в п. 3.1. После обеззараживания последовательно промывают в двух порциях стерильной воды и тщательно высушивают в асептических условиях, шланги - в подвешенном состоянии.
3.5. Дыхательный мешок (мех). После использования и отсоединения от аппарата дыхательный мешок (мех) подвергают обработке путем заполнения его моющим комплексом и для лучшего промывания энергично встряхивают. Обеззараживают путем погружения в один из рекомендованных растворов (см. п. 3.1). После обеззараживания дыхательный мешок промывают стерильной водой и в горловину вводят расширитель, сушку меха осуществляют в подвешенном состоянии в асептических условиях.
3.6. Воздуховод циркуляционной системы, клапаны рециркуляции (вдоха и выдоха), предохранительные клапаны. В аппаратах, где воздуховод и клапаны полностью разборные ("Полинаркон-2", "Полинамикон-2П", "Наркон-2", "РД-4"), их разбирают, моют и дезинфицируют методом кипячения (металлические части) или методом погружения в один из дезинфицирующих растворов (п. 5.1). Несъемные клапанные коробки, содержание седла клапана, осушают, промывают моющим раствором, ополаскивают и тщательно протирают 70 этиловым спиртом.
3.7. Адсорбер. Перед обеззараживанием из адсорбера удаляется адсорбент, канистру заливают моющим комплексом, особенно тщательно очищают решетки адсорбера, так как они загрязняются клейкой массой, образующейся из адсорбента. Рамку адсорбера протирают ватным или марлевым тампоном, смоченным в моющем растворе. Адсорбер, уплотняющую прокладку обеззараживают путем погружения в один из рекомендованных растворов по п. 3.1 (за исключением раствора дезоксона). После обеззараживания промывают в стерильной воде, сушат в асептических условиях.
3.8. При предполагаемом инфицировании аппаратов ИН и ИВЛ микобактериями туберкулеза обеззараживание комплектующих деталей и блоков из резины и пластмасс проводят методом погружения в один из дезинфицирующих растворов:
- 3 % раствор перекиси водорода, экспозиция 3 часа;
- 10 % раствор формальдегида, экспозиция 60 минут;
- 1 % раствор дезоксона, экспозиция 30 минут;
- 5 % раствор хлорамина, экспозиция 2 часа.
Блоки аппаратов, выполненные из металла или термостойких пластмасс, дезинфицируют кипячением в течение 30 минут с момента закипания воды.
3.9. После использования аппаратов ИН и ИВЛ больным с диагнозом столбняк или газовая гангрена обеззараживание комлектующих деталей и блоков осуществляют методом погружения в один из дезинфицирующих растворов:
- 6 % раствор перекиси водорода, экспозиция 6 часов;
- 1 % раствор дезоксона, экспозиция 45 минут (за исключением деталей из металла);
- 10 % раствор формальдегида, экспозиция 4 часа.
4. Обеззараживание аппаратов ИН и ИВЛ в собранном виде
4.1. Для обеззараживания аппаратов ИН и ИВЛ в собранном виде используют раствор формальдегида в этиловом спирте в аэрозольной упаковке или распыляют его из медицинского пульверизатора. Рецептура наполнителя аэрозольного баллона имеет следующий состав:
параформальдегид - 20;
этиловый спирт -30;
хладон-12 (фреон-12) - 50 масс %.
4.2. Обеззараживание аппаратов ИВЛ (PO-2, PO-5, PO-6H, PO-6P, PO-6-03, POA-2, АНД2) аэрозолями формальдегида, полученными из аэрозольного баллона.
4.2.1. Перед проведением обеззараживания съемные и разборные детали и блоки дыхательного контура (увлажнитель, сборники конденсата, присоединительные элементы, кран дополнительного вдоха, кран сопротивления выходу и др.) снимают, разбирают, очищают и обеззараживают поблочно. (После снятия увлажнителя кран его включения поставить в положение "включено" во избежание разгерметизации контура!). Собирают замкнутый циркуляционный контур: входные и выходные патрубки вдоха и выдоха аппаратов, не имеющих наркозного блока, замыкают с помощью коротких шлангов и дыхательного мешка. Через иглу аэрозольного баллона в отверстия вдоха и выдоха подают в аппарат 4,5 г аэрозоля (0,9 г формальдегида), после чего аппарат включают для циркуляции паров формальдегида с МОД = 20 л/мин. Количество поданного в аппарат аэрозоля контролируют путем взвешивания аэрозольного баллона до и после подачи. Во избежание разбрызгивания на трубке аппарата закрепляют с помощью круглой резинки полиэтиленовую пленку, через которую производят подачу аэрозоля. Время обеззараживания 90 минут. После обеззараживания в аппарат подают аэрозоль 23 % раствора аммиака в воде (20 мл) небольшими порциями каждые 30 минут с помощью пульверизатора или другого механического ручного распыляющего устройства. Время нейтрализации формальдегида аммиаком составляет 3 часа при скорости циркуляции 20 л/мин. После нейтрализации снимают шланги и продувают аппарат через фильтр стерильным воздухом в течение 7 часов при этой же скорости.
4.2.2. При инфицировании аппаратов ИН и ИВЛ возбудителями туберкулеза, газовой гангрены или столбняка в замкнутый контур аппарата вводят 3 мл горячей воды для увлажнения среды, а затем через 30 минут подают 11 г смеси из аэрозольного баллона (2,2 г формальдегида), экспозиция 4 часа. В остальном методика аналогична п. 4.2.1.
4.3. Обеззараживание аппаратов ИН и ИВЛ аэрозолями формальдегида, полученными из медицинского пульверизатора.
4.3.1. Перед проведением обеззараживания собирают замкнутый контур (п. 4.1.1), дезинфицирующий раствор (приложение N 1) в количестве 2,25 г, содержащий 0,9 г формальдегида, наливают в мерную пробирку с помощью пульверизатора через отверстие вдоха и выдоха вводят в аппарат. Остальные этапы обработки аналогичны описанным в п. 4.1.1.
4.3.2. Для обеззараживания аппарата инфицированного микробактериями туберкулеза и спорообразующими формами микроорганизмов в замкнутый контур вводят 3 мл горячей воды, а через 30 минут 5,5 г стерилизующего раствора, содержащего 2,2 г формальдегида. Остальные этапы аналогичны описанным в п. 4.1.1.
4.3.3. Во избежание загазовывания аппарата после 3 - 4 циклов обеззараживания или стерилизации проводят дополнительную нейтрализацию в течение 3 часов с использованием 20 - 30 мл 23 % раствора аммиака. После нейтрализации аппарат продувают воздухом в течение 6 - 7 часов. Кроме того, необходимо регулярно промывать водой распределительный блок и трубки аппарата, чтобы избежать скопления в них уротропина, образующегося в результате реакции формальдегида с аммиаком.
4.3.4. При проведении дезинфекции в собранном виде аппаратов ИН ("Полинаркон", "Наркон-П", "Наркон-ДП") их соединяют с любым из указанных в п. 4.3 аппаратом ИВЛ как для проведения аппаратной вентиляции при наркозе по закрытому контуру. Замкнутый циркуляционный контур собирают путем замыкания входных патрубков вдоха и выдоха аппарата ИВЛ с отверстием, предназначенным для дыхательного мешка, в аппарате ИН с помощью коротких шлангов и дыхательного мешка.
5. Санитарная обработка наружных поверхностей аппаратов и дополнительного оборудования к ним
5.1. Наружные поверхности аппаратов протирают чистой ветошью, обильно смоченной моющим комплексом для удаления возможной крови, слизи и т. п. Затем аппарат протирают 1 % раствором хлорамина или 3 % раствором перекиси водорода с 0,5 % моющего средства.
5.2. Анестезиологический инструмент: ларингоскоп, роторасширитель, языкодержатель, мандрен для эндотрахеальных трубок, корнцанги и др. Как правило, перечисленный инструмент изготавливают из металла. После использования инструмент подвергают мойке с последующим кипячением в воде в течение 30 минут. При использовании метода кипячения лампа ларингоскопа и электропроводящая система не разрушаются.
5.3. Столики и тележки для анестезиологического оборудования.
Наружные поверхности ежедневно протирают ветошью, смоченной в 0,5 % растворе любого моющего средства, один раз в неделю оборудование после мытья обрабатывают путем протирания ветошью 1 % раствором хлорамина, 3 % раствором перекиси водорода или другого дезинфектанта, используемого в лечебно-профилактическом учреждении.
5.4. Баллоны для газов.
Перед входом в операционную или отделение реанимации баллон моют водой с любым моющим средством, затем тщательно протирают ветошью, смоченной в 1 % растворе хлорамина или 3 % растворе перекиси водорода, или любого другого дезинфектанта, используемого в данном лечебно-профилактическом учреждении.
6. Меры предосторожности
6.1. Безопасность применения аэрозолей формальдегида для обеззараживания аппаратов ИН и ИВЛ гарантируется соблюдением мер предосторожностей, изложенных ниже, а также в разделе 12, 13 приложения N 1 к настоящему приказу.
6.2. Работы по мойке и обеззараживанию аппаратов ИН и ИВЛ проводят в отдельном помещении, имеющем приточно-вытяжную вентиляцию.
6.3. Необходимо следить за герметичностью аппаратов ИН и ИВЛ в процессе их обеззараживания в собранном виде парами формальдегида и нейтрализации парами аммиака, чтобы не создавать повышенные концентрации их в помещении.
6.4. Количество вводимых в аппараты ИН и ИВЛ в собранном виде стерилизующих веществ (формальдегид) и нейтрализатора (аммиак) не должно превышать рекомендуемых данной Инструкцией. При случайной передозировке необходимо провести повторный цикл дегазации (нейтрализация аммиаком и продувка).
6.5. Рекомендуется периодически (1 - 2 раза в год) проводить санитарно-химический контроль за содержанием паров формальдегида в воздухе помещения, где проводится обеззараживание аппаратов ИН и ИВЛ. В случае появления раздражающего запаха, проводить проветривание помещения. Критериями безопасности для персонала могут служить показатели предельно допустимых концентраций (ЦДК) для воздуха рабочей зоны, утвержденные Минздравом СССР. Для формальдегида ПДК рабочей, зоны - 0,5, для аммиака - 20 мг/куб. м.
6.6. Первая помощь при случайных отравлениях формальдегидом и аммиаком изложена в п. п. 13.1 - 13.6 приложения N 1 к настоящему приказу.
Приложение 1
Приготовление спиртового раствора формальдегида
Параформ технический загружают в стеклянную колбу со шлифом и добавляют этиловый спирт в соотношении 2:3. Смесь кипятят с обратным холодильником при температуре 80 град. C до видимого растворения параформа (6 - 8 часов). При этом параформ деполимеризуется до формальдегида, который, в свою очередь, реагирует с этанолом с образованием полуацеталя формальдегида.
Полуацеталь неустойчивое соединение, которое при испарении снова разлагается на формальдегид и спирт.
Полученный раствор фильтруют. Все работы производят в вытяжном шкафу. Срок хранения раствора не ограничен. Условия хранения - стеклянная тара из темного стекла с притертой пробкой при комнатной температуре.