3.2. Важки лабораторні 2 кл. точності ГОСТ 7328-82Е
3.3. Баня водяна лабораторна ТУ 64-1-2850-80
3.4. Дозатори медичні лабораторні ГОСТ 28311-89
3.5. Іономір універсальний ЕВ-74 ТУ25-05. 2147-78
3.6. Секундомір механічний ТУ 25-1819. 0021-90
3.7. Термометр скляний ртутний для точних вимірювань ГОСТ
13646-68
3.8. Центрифуга ЦЛР-1 ТУ 5-375-4215-77
3.9. Колби мірні місткістю від 100,0 мл до 1000,0 л ГОСТ
1770-74
3.10. Пробірки мірні лабораторні місткістю 10 мл ТУ
98-891-021-91Е
3.11. Пробірки поліетиленові місткістю (10-15) мл ТУ 208 УССР
273-84
3.12. Флакони з темного скла з притертим корком
ТУ 64-2-407-89
3.13. Циліндри місткістю від 100,0 мл до 1000,0 мл ГОСТ
1770-74
3.14. Вода дистильована ГОСТ 6709-7913
3.15. Кальцій хлористий ГОСТ 4161-77
3.16. Каолін ГФХ, с. 140
3.17. Натрій 5,5-диетилбарбітуровокислий ТУ 6-09-2082-78
3.18. Натрій лимоннокислий 5,5 водний ГОСТ 22280-76
3.19. Натрій хлористий ГОСТ 4233-77
3.20. Фіксанал соляної кислоти ГОСТ 3118-77
Всі засоби вимірювальної техніки повинні бути повірені у встановленому порядку. Допускається застосування іншого обладнання, лабораторного посуду, а також реактивів і матеріалів з метрологічними та технічними характеристиками не нижчими, ніж наведені.
4. МЕТОД ВИЗНАЧЕННЯ
Метод вимірювання активованого часу рекальціфікації базується на визначенні часу зсідання багатої тромбоцитами цитратної плазми крові при додаванні кальцію та стандартизації каоліном контактної фази процесу зсідання.
5. ВИМОГИ ТЕХНІКИ БЕЗПЕКИ
При виконанні вимірювань необхідно дотримуватись вимог НАОП 1.3.10-1.06-77 "Загальні правила безпеки роботи в хімічних лабораторіях", затверджених 27.07.77 Мінхімпромом СРСР: НАОП 1.1.10-1.01-85 "Правила техніки безпеки при експлуатації електроустановок", затверджено 10.09.85 Міненерго СРСР та ЦК галузевої профспілки; правил безпеки роботи, що представлені в експлуатаційній документації на засоби вимірювальної техніки та допоміжні пристрої.
6. ВИМОГИ ДО КВАЛІФІКАЦІЇ ВИКОНАВЦЯ
До виконання методики допускаються спеціалісти із спеціальною освітою, які відповідають кваліфікаційним вимогам відповідно до наказів МОЗ України від 19.12.97 N 359, від 23.10.91 N 146, та пройшли курси з клінічної лабораторної діагностики у державних навчальних закладах освіти системи МОЗ України різного рівня акредитації, наукових закладах або таких, що до них прирівняні, і мають право видавати документи державного зразка згідно з чинним законодавством України.
7. УМОВИ ВИКОНАННЯ ВИМІРЮВАНЬ
При проведені вимірювань повинні бути забезпечені наступні умови:
7.1. Температура середовища (22+-5) град. С.
7.2. Відносна вологість від 60% до 75%.
7.3. Атмосферний тиск від 84,0 до 106,7 кПа (від 600,0 до 800,3 мм рт.ст).
7.4. Напруга електромережі (220+-22) В.
7.5. Освітленість від 300 до 400 лк.
8. ПІДГОТОВКА ТА ВИКОНАННЯ ВИМІРЮВАНЬ
8.1. Усі засоби вимірювальної техніки та допоміжне обладнання привести в робочий стан згідно з інструкціями по експлуатації.
8.2. Приготування розчинів.
8.2.1. Приготування буферу Міхаеліса (рН 7,4+-0,1).
Розчин А. Наважку (20,60+-0,01) г натрію 5,5'-диетилбарбітуровокислого (п. 3.17) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.9), розчиняють у дистильованій воді (п. 3.14) і об'єм розчину доводять до мітки. Розчин зберігається у флаконах з темного скла (п. 3.12) протягом одного місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
Розчин Б. Фіксанал кислоти соляної 0,1 моль/л (п. 3.17) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.9) і об'єм розчину доводять до мітки дистильованою водою (п. 3.14). Розчин зберігається у флаконах з темного скла (п. 3.12) протягом одного місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
Розчин В. Наважку (7,30+-0,01) г натрію хлористого (п. 3.19) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.9), відміряють циліндром (п. 3.13) 290 мл розчину А і 210 мл розчину Б, додають в колбу та об'єм доводять до мітки. рН буферу перевіряють на іономірі універсальному (п. 3.5). Буфер зберігають у флаконах з темного скла з притертим корком (п. 3.12) протягом місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
8.2.2. Приготування розчину натрію хлористого з концентрацією 8,5 г/л.
Наважку (8,50+-0,01) г натрію хлористого (п. 3.19) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.9), розчиняють у дистильованій воді (п. 3.14) і доводять об'єм розчину до мітки. Розчин зберігають у флаконах з темного скла з притертим корком (п. 3.12) протягом одного місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
8.2.3. Приготування розчину забуференого фізіологічного (рН 7,4+-0,1).
Змішують 4 об'єми розчину натрію хлористого (8,5 г/л) (п. 8.2.3) з 1 об'ємом буферу Міхаеліса (п. 8.2.1). Розчин зберігають при температурі від 4 до 8 град. С протягом місяця.
8.2.4. Приготування розчину натрію лимоннокислого (3,8 г на 100 г розчину).
Наважку (3,80+-0,01) г натрію лимоннокислого (п. 3.18) розчиняють у 96,2 мл дистильованої води (п. 3.14), яку відміряють циліндром (п. 3.13). Розчин зберігають при температурі від 4 до 6 град. С протягом одного тижня.
8.2.5. Приготування 0,025 моль/л розчину кальцію хлористого.
Наважку (2,77+-0,01) г кальцію хлористого (п. 3.15) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.9) та розчиняють у дистильованій воді (п. 3.14), об'єм розчину доводять до мітки. Розчин зберігають у флаконах темного скла з притертим корком (п. 3.12) при температурі від 4 до 6 град. С протягом місяця.
8.2.6. Приготування суспензії каоліну.
До наважки (5,0+-0,1) каоліну (п. 3.16) дозатором лабораторним (п. 3.4) додають 1,0 мл дистильованої води (п. 3.14). Суміш енергійно перемішують протягом 10 хв до однорідної суспензії.
8.3. Приготування плазми крові.
Кров у хворого беруть натщесерце з вени гострою сухою голкою з широким діаметром, без шприца (для запобігання гемолізу). При заборі крові перші 5-6 крапель відкидають. Під час взяття крові не рекомендується накладати джгут і робити масаж передпліччя для запобігання активації зсідання крові і фібринолізу.
У пробірку поліетиленову (п. 3.10) дозатором лабораторним (п. 3.4) вносять 0,3-0,5 мл розчину натрію лимоннокислого (п. 8.2.4) та змішують відповідно з 4,5 мл крові (співвідношення 1:9). Пробірку з сумішшю щільно закривають корком і повільними рухами обережно декілька разів перемішують (не струшуючи).
Центрифугують (п. 3.8) протягом 10 хв з прискоренням 300 g. Плазму крові переносять дозатором лабораторним (п. 3.4) у пробірку поліетиленову (п. 3.11). Вимоги до зразків плазми крові установлюються у розділах преаналітики посібників з клінічної лабораторної діагностики.
8.4. Одержання стандартної донорської плазми крові.
Для приготування стандартної донорської і плазми крові необхідно змішати у рівних співвідношеннях плазму крові більш ніж 7 донорів, отриману, як вказано в п. 8.3.
9. ХІД ВИЗНАЧЕННЯ
9.1. Досліджують багату тромбоцитами цитратну плазму. В пробірку мірну лабораторну (п. 3.10) додають 0,1 мл плазми, що досліджується (п. 8.3), 0,1 мл суспензії каоліну (п. 8.2.6), енергійно струшують суміш і інкубують протягом п'яти хвилин при температурі 37 град. С на бані водяній лабораторній (п. 3.3).
9.2. Дозатором лабораторним (п.3.4) додають 0,2 мл попередньо підігрітого до 37 град. С на бані водяній лабораторній (п. 3.3) 0,025 моль/л розчину кальцію хлористого (п. 8.2.5), одночасно включають секундомір (п. 3.6). Пробірки з реагентами через кожні 1-2 с. нахиляють на 45 градусів і визначають час утворення згустку. Критерієм закінчення реакції є утворення гелю.
Час зсідання стандартної донорської плазми крові складає 50-70 с.
10. ОБРОБКА ТА ОФОРМЛЕННЯ РЕЗУЛЬТАТІВ ВИМІРЮВАНЬ
10.1. За результат вимірювання приймають середнє значення
(х , с) двох паралельних вимірювань, яке розраховується за
ср
формулою:
х = ( х + х )/2,
ср 1 2
де х , х - значення, отримані у двох паралельних
1 2
вимірюваннях.
10.2. Результати вимірювань заносяться до облікової медичної документації, затвердженої наказом МОЗ України від 04.01.01 N 1:
- форма 237/о - "Аналіз крові (показники системи згортання)";
- форма 238/о - "Аналіз крові (показники системи згортання - скорочений варіант)";
- форма 250/о - "Журнал реєстрації аналізів і їх результатів";
- форма 262/о - "Журнал обліку аналізів, зроблених в лабораторії".
11. КОНТРОЛЬ ПОХИБКИ ВИМІРЮВАНЬ
11.1. Визначення систематичної похибки вимірювань за даною методикою проводиться методом паралельних проб. Для цього проводять по два паралельних вимірювання 10 проб пацієнтів поточного дня.
11.2. Вимірювання АЧР проводять відповідно до розділу 9.
11.3. Отримані дані заносять у таблицю 2.
Таблиця 2
------------------------------------------------------------------
| N | Х | Х | Х - Х |( Х - Х ) в степені 2|
| | 1 | 2 | 1 2 | 1 2 |
|---+---------+---------+----------------+-----------------------|
------------------------------------------------------------------
11.4. За отриманими результатами вимірювань розраховується середнє значення показників (п. 10.1), середньоквадратичне відхилення (дельта) та коефіцієнт варіації (V). Результати розрахунків порівнюються з величинами, наведеними в таблиці 1 розділу 2.
11.5. Будують контрольну карту кумулятивних сум.
11.6. Кожного дня різницю між двома паралельними вимірюваннями проб, відмічають на карті. Результати, які попадають за межі контрольних вимірювань (2дельта) вказують на наявність недоліків в системі вимірювання.
11.7. Якщо отримані результати вимірів не задовольняють вимоги розділу 2 та п. 11.6, то виміри необхідно повторити.
11.8. Якщо результати повторного контролю незадовільні, то виконання вимірювань необхідно припинити, виявити та усунути причини, які до цього призвели.
12. ПОСИЛАННЯ НА НОРМАТИВНІ ДОКУМЕНТИ
------------------------------------------------------------------
| Документ | Найменування | N пункту |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 24104-88 Е |Весы лабораторные общего | 8.2.1; |
| |назначения и образцовые. | 8.2.2; |
| |Общие технические условия. | 8.2.4; |
| | | 8.2.5; |
| | | 8.2.6 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 7328-82 Е |Меры массы общего назначения | 8.2.1; |
| |и образцовые. | 8.2.2; |
| |Технические условия | 8.2.3; |
| | | 8.2.4; |
| | | 8.2.5; |
| | | 8.2.7 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 64-1-2850-80 |Баня водяна лабораторна | 9.1; 9.2 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 28311-89 |Дозаторы медицинские | 8.2.5; |
| |лабораторные. | 9.1; 9.2 |
| |Общие технические требования и| |
| |методы испытаний | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 5 - 375-4215-77 |Центрифуга ЦЛР-1 | 8.3; 8.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 25-05.2147-78 |Іономір універсальний ЕВ-74 | 8.2.1 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 13646-68 |Термометры стеклянные ртутные | 9.1; 9.2 |
| |для точных измерений. | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 25-1819. 0021-90 |Секундомір механічний "Слава" | 9.1; 9.2 |
| |с ДСПР 1-2-000. Технічні умови| |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 64-2-407-89 |Банки и флаконы с притертой | 8.2.1; |
| |пробкой. | 8.2.2; |
| | | 8.2.3; |
| | | 8.2.4; |
| | | 8.2.5 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 1770-74 |Посуда мерная лабораторная | 8.2.1; |
| |стеклянная. Цилиндры, | 8.2.2; |
| |мензурки, колбы, пробирки. | 8.2.4; |
| |Технические условия | 8.2.5 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 208 УССР 273-84 |Пробірки поліетиленові | 8.2.6; |
| | | 8.3; 8.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 98-891-021-91Е |Пробірки мірні лабораторні | 9.1; 9.2 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 6709-79 |Вода дистильована | 8.2.1; |
| | | 8.2.2; |
| | | 8.2.4; |
| | | 8.2.5 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГФХ, с. 140 |Каолін | 8.2.6 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 6-09-2082-78 |Натрій 5,5'- | 8.2.1 |
| |диетилбарбітуровокислий | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 4233-77 |Натрій хлористий | 8.2.1; |
| | | 8.2.2 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 22280-76 |Натрій лимоннокислый 5,5 | 8.2.4 |
| |водний | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 3118-77 |Фіксонал соляної кислоти | 8.2.1 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Мінхімпромом СРСР від |"Правила техніки безпеки при | 5 |
|27.07.77: |експлуатації електроустановок"| |
|НАОП 1.1.10-1.01-85 | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України від |"Про подальше удосконалення | 5 |
|19.12.97 N 359 |атестації лікарів" | |
|( z0014-98 ) | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України від |"Про атестацію середніх | 5 |
|23.10.91 N 146 |медичних працівників" | |
|( v0146282-91 ) | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України від |"Про затвердження медичної | 10.2 |
|04.01.01 N 1 |облікової документації, що | |
|( v0001282-01 ) |використовується в | |
| |лабораторіях | |
| |лікувально-профілактичних | |
| |закладів" | |
------------------------------------------------------------------
Міністерство охорони здоров'я України
ЗАТВЕРДЖЕНО
Наказ МОЗ України
15.11.2002 N 417
МЕТОДИКА ВИКОНАННЯ
АУТОКОАГУЛЯЦІЙНОГО ТЕСТУ МВВ 42.01-05-2002
ПОГОДЖЕНО
Головний метролог
МОЗ України
А.М.Ніколенко
10.10.2002
ПОГОДЖЕНО
Головний спеціаліст з
клінічної лабораторної
діагностики МОЗ України
В.А.Дєєв
10.10.2002
1. ГАЛУЗЬ ЗАСТОСУВАННЯ
Документ встановлює порядок виконання аутокоагуляційного тесту.
Методика призначена для використання у закладах охорони здоров'я.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА ПОХИБКИ ВИЗНАЧЕННЯ
Методика забезпечує виконання аутокоагуляційного тесту за наведеними характеристиками:
А - згортальна активність на 2-й хв вимірювань
2
(15,4+-2,9)%;
МА - максимальна сідаюча активність (100,0+-1,1)%;
Т - час досягнення половини МА норма (3,7+-0,2) хв;
1
Т - час досягнення МА - 10 хв;
2
3. ЗАСОБИ ВИМІРЮВАЛЬНОЇ ТЕХНІКИ, ДОПОМІЖНЕ ОБЛАДНАННЯ, РЕАКТИВИ І МАТЕРІАЛИ
3.1. Ваги 2 кл. точності ГОСТ 24104-88Е
3.2. Важки лабораторні 2 кл. точності ГОСТ 7328-82Е
3.3. Баня водяна ТУ 64.1.-2850-80
3.4. Дозатори медичні лабораторні ГОСТ 28311-89
3.5. Іономір універсальний ЕВ-74 ТУ 25-05.2147-78
3.6. Термометр скляний ртутний для точних вимірювань ГОСТ
13646-68
3.7. Секундомір механічний ТУ 25-1819.0021-90
3.8. Скло збільшувальне (лупа)
3.9. Центрифуга ЦЛР-1 ТУ 5-375-4215-77
3.10. Колби мірні від 100,0 до 1000,0 мл ГОСТ 1770-74
3.11. Пробірки поліетиленові місткістю (10-15) мл ТУ 208 УССР
273-84
3.12. Пробірки мірні лабораторні на 10 мл ТУ 98-891-021-91Е
3.13. Флакони із темного скла з притертим корком ТУ
64-2-407-89
3.14. Циліндри ГОСТ 1770-74
3.15. Білогарифмічний папір ТУ 13-0248643-794-89
3.16. Вода дистильована ГОСТ 6709-79
3.17. Кальцій хлористий ГОСТ 4161-77
3.18. Натрій 5,5'-диетилбарбітуровокислий ТУ 6-09-2082-78
3.19. Натрій лимоннокислий 5,5 водний ГОСТ 22280-76
3.20. Натрій хлористий ГОСТ 4233-77
3.21. Фіксанал кислоти соляної ГОСТ3118-77
Всі засоби вимірювальної техніки повинні бути повірені у встановленому порядку. Допускається застосовування іншого обладнання, лабораторного посуду, а також реактивів і матеріалів з метрологічними та технічними характеристиками не нижчими, ніж наведені.
4. МЕТОД ВИКОНАННЯ ВИМІРЮВАНЬ
Аутокоагуляційний тест - стандартизована методика, що відображає динаміку наростання, а потім, інактивації тромбопластин-тромбінової активності в плазмі крові при її рекальціфікації в присутності гемолізату еритроцитів. Стандартизація фосфоліпідної і контактної активації початкової стадії процесу зсідання крові досягається використанням гемолізату еритроцитів обстежуваного.
5. ВИМОГИ ТЕХНІКИ БЕЗПЕКИ
При виконанні вимірювань необхідно дотримуватись вимог НАОП 1.3.10-1.06-77 "Загальні правила безпеки роботи в хімічних лабораторіях", затверджених 27.07.77 Мінхімпромом СРСР: НАОП 1.1.10-1.01-85 "Правила техніки безпеки при експлуатації електроустановок", затверджено 10.09.85 Міненерго СРСР та ЦК галузевої профспілки; правил безпеки роботи, що представлені в експлуатаційній документації на засоби вимірювальної техніки та допоміжні пристрої.
6. ВИМОГИ ДО КВАЛІФІКАЦІЇ ВИКОНАВЦЯ
До виконання методики допускаються спеціалісти із спеціальною освітою, які відповідають кваліфікаційним вимогам відповідно до наказів МОЗ України від 19.12.97 N 359, від 23.10.91 N 146, та пройшли курси з клінічної лабораторної діагностики у державних навчальних закладах освіти системи МОЗ України різного рівня акредитації, наукових закладах або таких, що до них прирівняні, і мають право видавати документи державного зразка згідно з чинним законодавством України.
7. УМОВИ ВИКОНАННЯ ВИМІРЮВАНЬ
При проведені вимірювань повинні бути забезпечені наступні умови:
7.1. Температура середовища (22+-5) град. С.
7.2. Відносна вологість від 60% до 75%.
7.3. Атмосферний тиск від 84,0 до 106,7 кПа (від 600,0 до 800,3 мм рт.ст).
7.4. Напруга електромережі (220+-22) В.
7.5. Освітленість від 300 до 400 лк.
8. ПІДГОТОВКА ТА ВИКОНАННЯ ВИМІРЮВАНЬ
8.1. Усі засоби вимірювальної техніки та допоміжне обладнання привести в робочий стан згідно з інструкціями по експлуатації.
8.2. Приготування розчинів.
8.2.1. Приготування буферу Міхаеліса, (рН 7,4+-0,1).
Розчин А. Наважку (20,6+-0,01) г натрію 5,5'-диетилбарбітуровокислого (п. 3.18) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.10), розчиняють у дистильованій воді (п. 3.16) і об'єм розчину доводять до мітки. Розчин зберігається у флаконах з темного скла (п. 3.13) протягом одного місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
Розчин Б. Фіксанал кислоти соляної 0,1 моль/л (п. 3.21) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.10) і об'єм розчину доводять до мітки дистильованою водою (п. 3.16). Розчин зберігається у флаконах з темного скла (п. 3.13) протягом одного місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
Розчин В. Наважку (7,30+-0,01) г натрію хлористого (п. 3.20) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.10), відміряють циліндром (п. 3.14) 290 мл розчину А і 210 мл розчину Б, додають в колбу та об'єм доводять до мітки. рН буферу перевіряють на іономірі універсальному (п. 3.5). Буфер зберігають у флаконах з темного скла (п. 3.13) протягом місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
8.2.2. Приготування розчину натрію хлористого з концентрацією 8,5 г/л.
Наважку (8,5+-0,01) г натрію хлористого (п. 3.20) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.10), розчиняють у дистильованій воді (п. 3.16) і доводять об'єм розчину до мітки. Розчин зберігається у флаконах з темного скла (п. 3.13) протягом одного місяця при температурі від 4 до 8 град. С.
8.2.3. Приготування розчину забуференого фізіологічного, (рН 7,4+-0,1).
Змішують 4 об'єми розчину натрію хлористого (8,5 г/л) (п. 8.2.2) з 1 об'ємом буферу Міхаеліса (п. 8.2.1). Зберігати розчин при температурі від 4 до 8 град. С протягом місяця.
8.2.4. Приготування розчину натрію лимоннокислого (3,8 г на 100 г розчину).
Наважку (3,8+-0,01) г натрію лимоннокислого (п. 3.19) розчиняють у 96,2 г дистильованої води (п. 3.16). Зберігають розчин при температурі від 4 до 6 град. С протягом одного тижня.
8.2.5. Приготування розчину кальцію хлористого 0,025 моль/л.
Наважку (2,77+-0,1) г кальцію хлористого зневодненого (п. 3.17) переносять у мірну колбу місткістю 1000,0 мл (п. 3.10) та розчиняють у дистильованій воді (п. 3.16), об'єм розчину доводять до мітки. Розчин зберігають у флаконах темного скла з притертим корком (п. 3.13) при температурі від 4 до 6 град. С протягом місяця.
8.3. Одержання плазми крові.
Кров у хворого беруть натщесерце з вени гострою сухою голкою з широким діаметром, без шприца (для запобігання гемолізу). При заборі крові перші 5-6 крапель відкидають. Під час взяття крові не рекомендується накладати джгут і робити масаж передпліччя для запобігання активації зсідання крові і фібринолізу.
У пробірку поліетиленову (п. 3.11) дозатором лабораторним (п. 3.4) вносять 0,5 мл розчину натрію лимоннокислого (п. 8.2.4) та змішують відповідно з 4,5 мл крові (співвідношення 1:9). Пробірку з сумішшю щільно закривають корком і повільними рухами обережно декілька разів перемішують (не струшуючи).
Центрифугують (п. 3.9) протягом 10 хв з прискоренням 1200-1400 g. Плазму крові переносять дозатором лабораторним (п. 3.4) у пробірку поліетиленову (п. 3.11).
Вимоги до зразків плазми крові установлюються у розділах преаналітики посібників з клінічної лабораторної діагностики.
8.4. Одержання стандартної донорської плазми крові.
Для приготування стандартної донорської плазми крові необхідно змішати у рівних співвідношеннях плазму крові більш ніж 7 донорів, отриману, як вказано в п. 8.3, розфасувати по 1-2 мл у пробірки поліетиленові (п. 3.11), заморозити та зберігати протягом двох тижнів при температурі мінус 20 град. С.
9. ХІД ВИЗНАЧЕННЯ
9.1. Плазму крові, що досліджується (п. 8.3) дозатором лабораторним (п. 3.4) розливають по 0,2 мл у 10 пробірок скляних мірних лабораторних (п. 3.12). Пробірки поміщають на баню водяну лабораторну (п. 3.3) при температурі 37 град. С.
9.2. Для приготування гемолізат-кальцієвої суміші (ГКС) в окрему пробірку мірну лабораторну (п. 3.12) дозатором лабораторним вносять 2 мл розчину кальцію хлористого (п. 8.2.2) та 0,1 мл крові, що досліджується. Вмикають секундомір (п. 3.7). Пробірку з цією сумішшю струшують і поміщають у водяну баню (п. 3.3) при температурі 37 град. С.
9.3. Відбирають дозатором лабораторним (п. 3.4) 0,2 мл ГКС (п. 9.2 ) послідовно через 2, 4, 6, 8, 10, 20, 30, 40, 50, 60 хв з моменту її приготування і додають у кожну з пробірок з плазмою крові (п. 9.1), що знаходяться на водяній бані. Вмикають секундомір ( п. 3.7). Пробірки з реагентами нахиляють на 45 градусів і визначають час утворення згустку. Критерієм закінчення реакції є утворення гелю.
--------------
Примітка. На показники тесту впливають зміни гематокритного показника і вмісту в крові еритроцитів.
10. ОБРОБКА ТА ОФОРМЛЕННЯ РЕЗУЛЬТАТІВ
Отримані результати можна представити графічно на міліметровому папері (аутокоагулограма). На осі ординат відкласти показники активності, а по осі абсцис - час інкубації гемолізату (Рис. 1). Одержані результати в секундах переводять у процентні показники згортаючої активності відповідно до таблиці 1.
За даними АКТ у процентному вираженні на міліметровому папері накреслюють аутокоагулограму і визначають такі її параметри (Рис. 1):
------------------------------------------------
|Рис. 1 має графічне зображення (не наводиться)|
------------------------------------------------
Рис. 1. Вихідна частина кривої АКТ відображає динаміку наростання і максимальну активність (МА) тромбопластину і тромбіну в крові, що досліджується, при стандартизованій активації процесу зсідання. Низхідна частина кривої характеризує швидкість і інтенсивність інактивації тромбіну. Якщо дослідника цікавить лише величина максимальної тромбопластин-тромбінової активності крові, АКТ може виконуватися в скороченому варіанті, що зменшує час дослідження і втрату крові хворого. Так, для контролю за лікуванням гепарином достатньо дослідити згортальну активність лише на 10-й хв інкубації ГКС, для виявлення гіперкоагуляції - на 4, 6, 8, 10 хвилинах, для діагностики гемофілії - на 10, 20, 30 хвилинах.
Таблиця 4
------------------------------------------------------------------
|Час (с) |Показ- |Час (с)|Показ- |Час (с)|Показ- |Час (с)|Показ- |
| |ник,% | |ник,% | |ник,% | |ник,% |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| 7 | 108,0 | 35 | 36,0 | 63 | 12,5 | 91 | 4,4 |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| 8 | 105,0 | 36 | 34,0 | 64 | 11,8 | 92 | 4,2 |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| 9 | 103,0 | 37 | 33,0 | 65 | 11,3 | 93 | 4,0 |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| 10 | 100,0 | 38 | 31,5 | 66 | 10,8 | 94 | 3,9 |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| 11 | 93,0 | 39 | 30,5 | 67 | 10,5 | 95 | 3,7 |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| 12 | 88,0 | 40 | 29,5 | 68 | 10,1 | 96 | 3,6 |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| 13 | 85,0 | 41 | 28,0 | 69 | 9,8 | 97 | 3,4 |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| 14 | 82,0 | 42 | 27,5 | 70 | 9,4 | 98 | 3,3 |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| 15 | 79,0 | 43 | 26,0 | 71 | 9,0 | 99 | 3,2 |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| 16 | 76,0 | 44 | 25,5 | 72 | 8,6 | 100 | 3,1 |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| 17 | 73,0 | 45 | 24,5 | 73 | 8,2 | 101 | 3,0 |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| 18 | 70,0 | 46 | 23,5 | 74 | 8,0 | 102 | 2,8 |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| 19 | 68,0 | 47 | 23,0 | 75 | 7,7 | 103 | 2,7 |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| 20 | 65,0 | 48 | 22,0 | 76 | 7,4 | 104 | 2,6 |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| 21 | 62,0 | 49 | 21,0 | 77 | 7,2 | 105 | 2,5 |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| 22 | 59,0 | 50 | 20,5 | 78 | 7,0 | 106 | 2,4 |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| 23 | 58,0 | 51 | 19,5 | 79 | 6,7 | 107 | 2,3 |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| 24 | 56,0 | 52 | 18,5 | 80 | 6,5 | 108 | 2,2 |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| 25 | 54,0 | 53 | 18,0 | 81 | 6,2 | 109 | 2,1 |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| 26 | 51,0 | 54 | 17,3 | 82 | 6,0 | 110 | 2,0 |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| 27 | 49,0 | 55 | 16,5 | 83 | 5,8 | 111 | 1,9 |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| 28 | 47,0 | 56 | 16,0 | 84 | 5,6 | 112 | 1,8 |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| 29 | 46,0 | 57 | 15,5 | 85 | 5,4 | 113 | 1,6 |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| 30 | 44,0 | 58 | 14,8 | 86 | 5,2 | 114 | 1,5 |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| 31 | 43,0 | 59 | 14,5 | 87 | 5,0 | 115 | 1,4 |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| 32 | 41,0 | 60 | 13,8 | 88 | 4,9 | 116 | 1,3 |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| 33 | 39,0 | 61 | 13,5 | 89 | 4,7 | 117 | 1,2 |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| 34 | 36,0 | 62 | 12,8 | 90 | 4,5 | 118 | 1,2 |
|--------+-------+-------+-------+-------+-------+-------+-------|
| | | | | | | 119 | 1,1 |
------------------------------------------------------------------
10.1. За результат вимірювання приймають середнє значення
(х , с.) двох паралельних вимірювань, яке розраховується за
ср
формулою:
х = ( х + х )/2,
ср 1 2
де х , х - значення, отримані у двох паралельних
1 2
вимірюваннях.
10.2. Результати вимірювань заносяться до облікової медичної документації, затвердженої наказом МОЗ України від 04.01.01 N 1:
- форма 237/о - "Аналіз крові (показники системи згортання)";
- форма 238/о - "Аналіз крові (показники системи згортання - скорочений варіант)";
- форма 250/о - "Журнал реєстрації аналізів і їх результатів";
- форма 262/о - "Журнал обліку аналізів, зроблених в лабораторії".
11. КОНТРОЛЬ ПОХИБКИ ВИМІРЮВАНЬ
11.1. Визначення систематичної похибки вимірювань за даною методикою проводиться методом паралельних проб. Для цього проводять по два паралельних вимірювання 10 проб пацієнтів поточного дня.
11.2. Вимірювання часу зсідання плазми крові в тесті АКТ проводять відповідно до розділу 9.
11.3. Отримані дані заносять у таблицю 2.
Таблиця 2
------------------------------------------------------------------
| N | Х | Х | Х - Х |( Х - Х ) в степені 2|
| | 1 | 2 | 1 2 | 1 2 |
|---+---------+---------+----------------+-----------------------|
------------------------------------------------------------------
11.4. За отриманими результатами вимірювань розраховується середнє значення показників (п. 10.1), середньоквадратичне відхилення (дельта) та коефіцієнт варіації (V). Результати розрахунків порівнюються з величинами, наведеними в таблиці 1 розділу 2.
11.5. Будують контрольну карту кумулятивних сум.
11.6. Кожного дня різницю між двома паралельними вимірюваннями проб, відмічають на карті. Результати, які попадають за межі контрольних вимірювань (2дельта) вказують на наявність недоліків в системі вимірювання.
11.7. Якщо отримані результати вимірів не відповідають вимогам розділу 2 та п. 11.6, то виміри необхідно повторити.
11.8. Якщо результати повторного контролю незадовільні, то виконання вимірювань необхідно припинити, виявити та усунути причини, які до цього призвели.
12. ПОСИЛАННЯ НА НОРМАТИВНІ ДОКУМЕНТИ
------------------------------------------------------------------
| Документ | Найменування | N пункту |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 24104-88 Е |Весы лабораторные общего | 8.2.1; |
| |назначения и образцовые. | 8.2.2; |
| |Общие технические условия | 8.2.4; |
| | | 8.2.5; |
| | | 8.2.7 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 64.1.-2850-80 |Водяна баня | 8.2.5; |
| | | 8.2.7; |
| | | 9.1; 9.3;|
| | | 9.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 28311-89 |Дозаторы медицинские | 8.2.5; |
| |лабораторные | 8.2.7; |
| | | 8.3; |
| | | 9.3; 9.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 1770-74 |Посуда мерная лабораторная | 8.2.1; |
| |стеклянная. Цилиндры, | 8.2.2; |
| |мензурки, колбы, пробирки | 8.2.4; |
| |Технические условия. | 8.2.5; |
| | | 8.3; 9.1;|
| | | 9.3; 9.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 208 УССР 273-84 |Пробірки поліетиленові | 8.2.7; |
| | | 8.3; 8.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 25-05.2147-78 |Іономір універсальний ЕВ-74 | 8.2.1 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 13646-68 |Термометры стеклянные ртутные | 8.2.5; |
| |для точных измерений | 9.1; 9.3;|
| | | 9.4 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 25-1819.0021-90 |Секундомір механічний "Слава" | 9.3; 9.4 |
| |з ДСПР-1-2-000 | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 64-2-407-89 |Банки и флаконы с притертой | 8.2.1; |
| |пробкой | 8.2.2 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 5-375-4215-77 |Центрифуга ЦЛР-1 | 8.3; 9.1 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 6709-79 |Вода дистильована | 8.2.1; |
| | | 8.2.2; |
| | | 8.2.4; |
| | | 8.2.5 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ТУ 6-09-2082-78 |Натрій 5,5'- | 8.2.1 |
| |диетилбарбітуровокислий | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 4233-77 |Натрій хлористий | 8.2.1; |
| | | 8.2.2 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 22280-76 |Натрій лимоннокислій 5,5 | 8.2.4 |
| |водний | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ФС 42-2621-89 |Тромбін | 8.2.7 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|ГОСТ 3118-77 |Фіксонал соляної кислоти | 8.2.1 |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Мінхімпромом СРСР |"Правила техніки безпеки при | 5 |
|від 27.07.77: |експлуатації електроустановок"| |
|НАОП 1.1.10-1.01-85 | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України |"Про подальше удосконалення | 5 |
|від 19.12.97 N 359 |атестації лікарів" | |
|( z0014-98 ) | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України |"Про атестацію середніх | 5 |
|від 23.10.91 N 146 |медичних працівників" | |
|( v0146282-91 ) | | |
|----------------------+------------------------------+----------|
|Наказ МОЗ України |"Про затвердження медичної | 10.2 |
|від 04.01.01 N 1 |облікової документації, що | |
|( v0001282-01 ) |використовується в | |
| |лабораторіях | |
| |лікувально-профілактичних | |
| |закладів" | |
------------------------------------------------------------------
Міністерство охорони здоров'я України
ЗАТВЕРДЖЕНО
Наказ МОЗ України
15.11.2002 N 417
МЕТОДИКА ВИКОНАННЯ
ВИМІРЮВАННЯ ЧАСУ ЗСІДАННЯ ПЛАЗМИ КРОВІ ЛЮДИНИ В ТЕСТІ ТРОМБІНОВИЙ ЧАС МВВ 42.01-06-2002
ПОГОДЖЕНО
Головний метролог
МОЗ України
А.М.Ніколенко
10.10.2002
ПОГОДЖЕНО
Головний спеціаліст з
клінічної лабораторної
діагностики МОЗ України
В.А.Дєєв
10.10.2002
1. ГАЛУЗЬ ЗАСТОСУВАННЯ
Документ встановлює порядок виконання вимірювання часу зсідання плазми крові в тесті тромбіновий час (ТЧ).
Методика призначена для використання у закладах охорони здоров'я.
2. ХАРАКТЕРИСТИКА ПОХИБКИ ВИЗНАЧЕННЯ
Методика забезпечує вимірювання часу зсідання плазми крові в тесті тромбіновий час (ТЧ) за характеристиками, наведеними у таблиці 1.
Таблиця 1
------------------------------------------------------------------
|Діапазон вимірювань, | Середньоквадратичне | Коефіцієнт |
| с |відхилення, дельта (с) | варіації, V (%)|
| | | |
|---------------------+-------------------------+----------------|
| 9 - 20 | +-1,2 | 9 |
------------------------------------------------------------------