Про затвердження методичних рекомендацій "Застосування тестових наборів Colilert(R)-18 для санітарно-бактеріологічного контролю якості води"

Відповідно до статті 40 Закону України "Про забезпечення санітарного та епідемічного благополуччя населення"

1. Затвердити методичні рекомендації "Застосування тестових наборів Colilert(R)-18 для санітарно-бактеріологічного контролю якості води" (додаються).

2. Департаменту державного санітарно-епідеміологічного нагляду (Пономаренко А.М.) довести цей наказ до відома керівників центральних органів виконавчої влади, установ і закладів державної санітарно-епідеміологічної служби, наукових установ для використання в роботі під час здійснення державного санітарно-епідеміологічного нагляду.

3. Контроль за виконанням наказу покласти на директора Департаменту державного санітарно-епідеміологічного нагляду Пономаренка А.М.

Методичні рекомендації "Застосування тестових наборів COLILERT(R)-18 для санітарно-бактеріологічного контролю якості води" (далі - методичні рекомендації) встановлюють методи проведення лабораторних досліджень води по прискореному якісному і кількісному визначенню загальних коліформних бактерій і E.coli з використанням тестових наборів COLILERT(R)-18.

Методичні рекомендації розроблені з метою наближення методів контролю якості води за мікробіологічними показниками, що застосовуються в Україні до методів, прийнятих в Європейському регіоні.

Методичні рекомендації призначені для застосування в лабораторіях установ та закладів державної санітарно-епідеміологічної служби, що здійснюють вибірковий контроль за якістю різних типів вод (як чистих, включаючи воду фасовану (бутильовану), так і забруднених питних, а також води водойм і стічних вод) за мікробіологічними показниками, при розслідуванні причин виникнення епідускладнень, пов'язаних з водним шляхом передачі. Методичні рекомендації носять рекомендаційний характер і можуть використовуватися у лабораторіях інших організацій, акредитованих у встановленому порядку на право проведення контролю безпеки питної води за мікробіологічними показниками та в організаціях, що здійснюють виробничий контроль питної води.

Для цілей цих методичних рекомендацій застосовуються наступні визначення.

Загальні коліформні бактерії - мікроорганізми родини Enterobacteriaceae, які характеризуються наявністю ферменту бета-галактозидази, здатного до розщеплення специфічних хромогенних субстратів.

E.Coli - коліформні бактерії, які характеризуються наявністю ферменту бета-глюкуронідази, здатного до розщеплення специфічних хромогенних або флуорогенних субстратів.

E.Coli - як індикатор фекального забруднення регламентований Директивою Європейського Союзу (ЄС) 98/83/ЄЕС від 3 листопаду 1998 року щодо якості води, призначеної для споживання населенню, на зміну термотолерантних бактерій.

Застосування Colilert(R)-18 дозволяє одночасно визначити наявність загальних коліформних бактерій і E.coli у досліджуваному зразку води в об'ємі 100 куб. см. Технологія запатентована компанією IDEXX Laboratories (USA).

Метод базується на виявленні коліформних бактерій та E.coli в визначеному об'ємі досліджуваного зразка по наявності специфічних ферментативних активностей з використанням флуорогенних та хромогенних субстратів.

Принцип дії Colilert(R)-18 полягає:

1) при виявленні загальних коліформних бактерій - у взаємодії поживного індикатору ONPG з ферментом бета-галактозидазою коліформних бактерій з утворенням забарвленого продукту, в наслідок чого колір зразка змінюється на жовтий. Тобто, коли загальні коліформні бактерії засвоюють поживний індикатор Colilert(R)-18 ONPG, зразок стає жовтим.

2) при виявленні E.coli - на взаємодії поживного індикатору MUG з ферментом бета-глюкуронідазою E.coli з утворенням флуоресцуючого (при дії УФ) продукту. Тобто, коли E.coli засвоюють поживний індикатор Colilert-18, MUG, зразок, під дією ультрафіолетових променів починає флуоресціювати.

Чутливість методу. Colilert(R)-18 може одночасно визначити навіть поодинокі коліформні бактерії і E.coli в 100 куб. см досліджуваного зразка протягом 18 годин, навіть якщо на кожні 100 куб. см припадає 2 мільйони гетеротрофних бактерій.

Переваги методу Colilert(R)-18

- Стандартизація процесу санітарно-бактеріологічних досліджень води.

- Виключає суб'єктивну інтерпретацію результату.

- Прискорення одержання результатів досліджень води за показниками загальні коліформні бактерії і E.coli до 18 годин.

- Зниження собівартості досліджень і рівня ручної праці в лабораторіях (виключення матеріальних та трудовитрат на миття, підготовку та стерилізацію лабораторного посуду, виготовлення, стерилізацію і перевірку поживних середовищ, підготовку проб до дослідження).

- Не потребує використання поживних середовищ.

- Можливість продовження дослідження для отримання ізольованих колоній навіть при масивному бактеріальному забрудненні.

Реєстрація в Україні. Тестовий набір для визначення коліформних бактерій у воді Colilert(R)-18 зареєстрований в Україні, внесено до Державного реєстру медичної техніки та виробів медичного призначення України і дозволено до використання в медичній практиці згідно з наказом Державної служби лікарських засобів та виробів медичного призначення від 21 листопада 2006 року N 666. Свідоцтво про державну реєстрацію N 5738/2006.

Баня водяна

Термостат електричний сухоповітряний з автоматичним терморегулятором температур до 55 град. С, що дозволяє підтримувати в камері температуру, що задана, з точністю +-1 град. С

Стерилізатор паровий (автоклав електричний)

Герметизатор IDEXX Quanti-Tray Sealer.

Системи (Піддони) Quanti-Tray, Quanti-Tray/2000

Р/А компаратор (Colilert Presence/Absence Comparator)

УФ лампа потужністю 6 Ват, 365 нм

Тестові набори Colilert(R)-18 (WP020 - 18, WP200 - 18)

Флакони на 100 куб. см з прозорого, не флуоресцуючого матеріалу

Маркери по склу

Контейнери (сумки) для транспортування проб (посівів) в лабораторію.

Система Quanti-Tray - являє собою панель з лунками, по яких розподіляється досліджуваний зразок з попередньо внесеним тест-набором Colilert(R)-18. Містить 51 лунку і дозволяє визначити від 1 до 200 мікробних одиниць в 100 куб. см досліджуваного зразка. Використовується для дослідження чистих вод.

Система Quanti-Tray/2000 - панель з лунками, по яких розподіляється досліджуваний зразок з попередньо внесеним тест-набором Colilert(R)-18. Містить 97 лунок і дозволяє визначити від 1 до 2,419 мікробних одиниць в 100 куб. см досліджуваного зразка. Використовується для дослідження забруднених питних вод, води відкритих водойм та стічних.

Ці дві вищезазначені системи є аналогом титраційного методу, але за рахунок значно більшої кількості повторностей результати, отримані за допомогою систем Quanti-Tray є більш точними.

P/A компаратор (Colilert Presence/Absence Comparator) пластиковий флакон, що містить підфарбовану рідину суворо визначеного (стандартизованого) кольору застосовується для інтерпретації якісних результатів тестових наборів Colilert-18 для порівняння кольору.

Тестовий набір Colilert(R)-18 - являє собою ліофілізований поживний субстрат в індивідуальній упаковці для проби об'ємом 100 куб. см і призначений для проведення санітарно-бактеріологічних досліджень якості води за показниками: загальні коліформні бактерії і E.coli в одній пробі.

Термін та умови зберігання - 12 місяців з дати випуску, при температурі (2-25) град. С, уникаючи дії прямих сонячних променів (термін придатності вказаний на етикетці).

Склад тестового набору та каталожні номера надані в додатку.

Виробник "IDEXX Laboratories, Inc., One IDEXX Drive Westbrook, maine 04092 USA тел. 1-207-856-0496; 1-800-321-0207, факс 1-207-856-0630.

Фірма постачальник ТОВ "Симедика УА" Україна, 04655, м. Київ, Кудрявський узвіз, 7, оф. 204, тел/факс (044) 451 88 61

Проведення досліджень за допомогою тестових наборів Colilert(R)-18 складається з трьох етапів: посів, інкубація, облік результатів за зміною кольору зразка та флуоресценції, якісна оцінка результатів або визначення найбільш вірогідного числа (далі - НВЧ) за таблицями. Результати дослідження реєструють у робочих журналах встановленої форми.

У необхідних випадках арбітражним методом є класичний бактеріологічний метод з ідентифікацією колоній, що виросли, типуванням виділених збудників, за загально прийнятими методами, відповідно до чинної нормативної документації.

5.1. Відбір та зберігання проб води для мікробіологічних досліджень проводять згідно діючої нормативної документації.

5.2. Відбір проб проводить спеціаліст після проходження інструктажу з техніки відбору проб для мікробіологічного дослідження.

5.3. При відборі проб в одній і тій же точці для різних цілей першими відбираються проби для мікробіологічного дослідження.

Проби можна відбирати безпосередньо у флакони з міткою 100 куб. см, або стерильний лабораторний посуд.

5.4. Проби, що відібрані, маркують на місці і супроводжують актом відбору та направленням встановленої форми із зазначенням місця, дати, часу відбору, прізвища та посади спеціаліста, який відбирав пробу, мети дослідження та іншої інформації.

5.5. Тестові набори Colilert(R)-18 після закінчення терміну придатності використанню на підлягають.

5.6. При роботі з Colilert-18 необхідно користуватися стерильними матеріалами, відповідно до внутрішніх лабораторних вимог.

Увага! При використанні тестових наборів Colilert-18 для дослідження хлорованої води дехлоратор у флакони не додають.

6.1. Якісне визначення загальних коліформних бактерій і E.coli

6.1.1. До 100 куб. см проби води (при необхідності досліджують 3 об'єми по 100 куб. см) додати вміст одного пакетика Colilert(R)-18, надломивши верхню частину пакету. Закрити флакон і перемішати до повного розчинення. При додаванні Colilert-18 до зразка може спостерігатися легке забарвлення.

Якщо температура зразка не досягає 33-38 град. С, флакон поміщають у водяну баню з температурою 35 град. С на 20 хвилин або у водну баню з температурою 44,5 град. С на 7-10 хвилин.

6.1.2. Після підігріву посів інкубують при температурі (35 +- 1) град. С протягом часу, що залишився до 18 годин.

6.1.3. Через 18 годин інкубації посіви дістають з термостату і відмічають наявність зміни кольору середовища шляхом порівняння з компаратором (див. таб. 1).

6.1.3.1. Відсутність зміни кольору середовища, або інтенсивність жовтого кольору менше ніж в компараторі - враховуються як відсутність в досліджуваному зразку води коліформних бактерій і E.coli.

6.1.3.2. Зміна кольору середовища на жовтий, як у компараторі, або ще більш інтенсивний - підтверджує наявність коліформних бактерій в досліджуваному зразку води, враховується як позитивний результат.

6.1.3.3. Флакони з пробами, що змінили колір на жовтий перевіряють на наявність флуоресценції, проглядаючи в ультрафіолетовому світлі. Флуоресценція середовища указує на наявність в досліджуваному зразку E.coli.

Для перегляду в ультрафіолетовому світлі використовують УФ лампу потужністю 6 Ват, 365 нм в на відстані близько 12-15 см, в темному приміщенні. Лампу тримають зворотною стороною до очей, а лицьовою до зразка.

6.2. Кількісне визначення загальних коліформних бактерій і E.coli (Quanti-Tray(R)

6.2.1. До 100 куб. см проби води (при необхідності досліджують 3 об'єми по 100 куб. см) додати вміст одного пакетика Colilert(R)-18, надломивши верхню частину пакету. Закрити флакон і перемішати до повного розчинення.

6.2.2. Одержаний розчин вилити в панель (піддон) Quanti-Tray або Quanti-Tray/2000 і запаяти в герметизаторі IDEXX Quanti-Tray Sealer.

Якщо при роботі з Quanti-Tray виникають проблеми з надмірним піноутворенням, можна використовувати Антипінний розчин IDEXX (N у Каталозі WAFDB) або судини IDEXX об'ємом 120 куб. см з антипінною речовиною (N у Каталозі WV120BAF-200).

6.2.3. Запаяну панель (піддон) поміщують в інкубатор з температурою 35 + 1 град. С на 18 годин (заздалегідь підігрівати до 35 град. С не потрібно).

6.2.4. Через 18 годин інкубації панелі проводять облік результатів. рахують кількість лунок, що змінили колір на жовтий і по таблиці НВЧ, яка йде і комплекті з панелями (піддонами), визначають кількість загальних коліформних бактерій в досліджуваному зразку.

6.2.5. Для визначення кількості E.coli панелі проглядають в ультрафіолетовому світлі. Рахують кількість лунок, що флуоресцують. Результати оцінюють по таблиці НВЧ. Для систем Quanti-Tray - таблиця 2, для систем Quanti-Tray/2000 - таблиця 3. Зазначені таблиці додаються до кожного набору Quanti-Tray.