При дезинфекции (методом замачивания в дезинфицирующих растворах или кипячением) изделия с заложенными в них тест-объектами размещают послойно в низу, в середине и в верхней части емкости, а при обеззараживании в камере - в разных местах ее.
5.5. По истечении экспозиции дезинфекции или цикла стирка - ополаскивание - отжим при использовании метода одновременного обеззараживания и стирки мешочки с тест-объектами помещают в стерильные чашки Петри и доставляют в лабораторию для исследования.
В лаборатории после извлечения из мешочка каждый тест-объект промывают 5 мин. в растворе соответствующего нейтрализатора (п. 2.4 Приложения 3) и стерильной водопроводной воде (или дважды в воде, если нейтрализатор неизвестен) и помещают в пробирку с соответствующей питательной средой. Если дезинфекцию проводили методом кипячения без добавления кальцинированной соды, дополнительного промывания тест-объектов не требуется.
5.6. При контроле качества дезинфекции по выделению кишечной палочки посев проводят в модифицированную среду Хейфеца или КОДА, для выделения стафиллококка - в солевой МПБ, для выделения антракоида - в МПБ (п.п. 3.1.2-3.1.4 Приложения 3).
5.7. Качество дезинфекции признают удовлетворительным при отсутствии роста тест-культуры во всех пробах.
6. Методы определения содержания действующего вещества в дезинфицирующих средствах и их растворах
6.1. Определение массовой доли натра едкого в препарате и его растворах
6.1.1. Аппаратура, реактивы и растворы
Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104-80 с наибольшим пределом взвешивания 500 г, третьего класса точности.
Колба (ГОСТ 1770-74) исполнения 1 или 3 вместимостью 500 куб.см.
Пипетки (ГОСТ 20292-74) вместимостью 20 и 25 куб.см.
Бюретка (ГОСТ 20292-74) вместимостью 50 куб.см, ценой деления 0,1 куб.см.
Кислота соляная (ГОСТ 3118-77, химически чистая (х.ч.) или чистая для анализа (ч.д.а.), раствор концентрации 1 моль/куб.дм.
Барий хлористый (ГОСТ 4108-72), х.ч. или ч.д.а., 10 - процентный раствор, предварительно нейтрализованный по фенолфталеину.
Фенолфталеин (ГОСТ 5850-72), 1 - процентный спиртовой раствор.
Вода дистиллированная, не содержащая CO (ГОСТ 4517-75).
6.1.2. Подготовка к анализу
6.1.2.1. Приготовление анализируемого раствора твердого препарата
Перед взятием навески с пробы препарата удаляют верхний выветрившийся слой. В стаканчик для взвешивания быстро отбирают около 20 г препарата и взвешивают. Навеску переносят в мерную колбу, приливают 300-400 куб.см воды, растворяют, охлаждают, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают (раствор А).
6.1.2.2. Приготовление анализируемого раствора жидкого препарата: 25 куб.см препарата отбирают в предварительно взвешенный стакан вместимостью 100 куб.см, взвешивают, количественно переносят в мерную колбу, разбавляют водой до метки и перемешивают (раствор Б).
Растворы А и Б готовят из двух параллельных навесок.
6.1.3. Проведение анализа
25 куб.см раствора А и Б помещают в коническую колбу вместимостью 250 куб.см, добавляют 20 куб.см раствора хлористого бария, перемешивают и закрывают пробкой. Через 5 мин. вводят две-три капли раствора фенолфталеина и титруют раствором соляной кислоты до обесцвечивания индикатора.
6.1.4. Обработка результатов
Массовую долю натра едкого (X) в процентах вычисляют по формуле:
V х 0,04 х 500 х 100
X = --------------------,
25m
где:
V - объем раствора соляной кислоты, израсходованный на титрование, куб.см;
m - масса навески, взятой для приготовления растворов А или Б, г;
0,04 - масса натра едкого, соответствующая 1 куб.см раствора соляной кислоты, г.
За результат анализа принимают среднее арифметическое двух параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не превышают 0,2%.
6.2. Определение содержания формальдегида в формалине техническом, параформе и их растворах
6.2.1. Реактивы и растворы
Кислота соляная (ГОСТ 3118-77), ч.д.а. или кислота серная (ГОСТ 4204-77), ч.д.а., растворы концентрации 1 и 0,1 моль/куб.дм.
Натрия гидроокись (ГОСТ 4328-77), ч.д.а., раствор концентрации 0,1 моль/куб.дм.
Натрий сернокислый - сульфит натрия (ГОСТ 195-77 или ГОСТ 429-76), ч.д.а., раствор безводного сульфита натрия 126 г или кристаллического 252 г растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 1 куб. дм с последующим тщательным перемешиванием.
Тимолфталеин (ГОСТ 4919-77), 0,2 - процентный раствор.
Вода дистиллированная (ГОСТ 6709-72).
6.2.2. Проведение анализа
1,5-1,8 г формалина или 0,5-0,6 г параформа взвешивают в колбе с пробкой, содержащей 10 куб.см дистиллированной воды, результат взвешивания записывают до четвертого десятичного знака. При определении содержания формальдегида в рабочих растворах для исследования берут 5-25 куб.см формалина или параформа в зависимости от предполагаемой их концентрации. К полученному раствору прибавляют две капли тимолфталеина и нейтрализуют раствором соляной или серной кислоты концентрации 0,1 моль/куб.дм до исчезновения голубой окраски или раствором гидроокиси натрия до появления бледно-голубой окраски.
Нейтральный раствор сульфита натрия переливают в колбу с навеской, перемешивают в течение 2 мин. и титруют раствором соляной или серной кислоты концентрации 1 моль/куб.дм до исчезновения голубой окраски.
6.2.3. Обработка результатов
Массовую долю формальдегида (X) в процентах вычисляют по формуле:
V х 0,03003 х 100
X = -----------------,
m
где:
V - объем раствора соляной или серной кислоты концентрации точно 1 моль/куб.дм, израсходованный на титрование, куб.см;
0,03003 - масса формальдегида, соответствующая 1 куб.см раствора соляной или серной кислоты концентрации 1 моль/куб.дм, г;
m - масса анализируемой пробы, г.
За результат анализа принимают среднее арифметическое двух параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не превышают 0,2%.
Результат округляют до первого десятичного знака.
6.3. Определение массовой доли углекислого натрия в кальцинированной соде (технической)
6.3.1. Реактивы и растворы
Кислота серная (ГОСТ 4204-77), раствор в концентрации 1 моль/куб.дм.
Метиловый оранжевый (индикатор), 0,1 - процентный водный раствор.
Вода дистиллированная (ГОСТ 6709-72).
6.3.2. Проведение анализа
Взвешивают 2,3-2,5 г кальцинированной соды, прокаленной при 270-300 град.С до постоянной массы, помещают в коническую колбу вместимостью 250 куб.см, растворяют в 20 куб.см воды и титруют раствором серной кислоты в присутствии метилового оранжевого до изменения окраски раствора из желтой в оранжево-розовую.
6.3.3. Обработка результатов
Массовую долю углекислого натрия (X) в процентах вычисляют по формуле:
V х 0,05299 х 100
X = -----------------,
m
где:
V - объем раствора серной кислоты концентрации 1 моль/куб.дм, израсходованный на титрование, куб.см;
0,05299 - масса углекислого натрия, соответствующая 1 куб.см раствора серной кислоты концентрации 1 моль/куб.дм;
m - масса навески кальцинированной соды, г.
За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не должны превышать 0,2%.
6.4. Определение массовой доли перекиси водорода в препарате и его растворах
6.4.1. Реактивы и растворы
Калий марганцово-кислый (ГОСТ 20490-76), х.ч., 0,1 н раствор.
Серная кислота (ГОСТ 4204-77), х.ч., раствор 1:4.
Вода дистиллированная (ГОСТ 6709-72).
6.4.2. Проведение анализа
0,15-0,20 г перекиси водорода или 1-2 мл рабочего раствора, взятые с погрешностью не более 0,0002 г (или 0,01 мл), помещают в коническую колбу вместимостью 250 куб.см. Вносят 25 куб.см воды, 20 куб.см серной кислоты и титруют раствором марганцово-кислого калия до розовой окраски, не исчезающей в течение 1 мин.
Одновременно проводят контрольный опыт в тех же условиях и с тем же количеством реактивов, но без анализируемого препарата.
6.4.3. Обработка результатов
Массовую долю перекиси водорода (X) в процентах вычисляют по формуле:
(V-V ) х 0,0017
1
X = --------------- 100,
m
где:
V - объем 0,1 н раствора марганцово-кислого калия,
израсходованный на титрование анализируемого раствора, куб.см;
V - объем 0,1 н раствора марганцово-кислого калия,
1
израсходованный на титрование контрольного опыта, куб.см;
0,0017 - масса перекиси водорода, соответствующая 1 куб.см
0,1 н раствора марганцово-кислого калия, г;
m - масса навески (г) или объем раствора (мл), взятых для
анализа.
За результат анализа принимают среднее арифметическое двух параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не должны превышать 0,1%.
6.5. Определение массовой доли глутарового альдегида в препарате и его растворах
6.5.1. Реактивы и растворы
Пиросульфит натрия - Na S O (ГОСТ 10575-76).
2 2 2
Йод (ГОСТ 4159-79), 0,1 н раствор.
Вода дистиллированная (ГОСТ 6709-72).
Раствор биосульфита натрия (NaHSO ) готовят путем растворения
3
в воде пиросульфита натрия из расчета 4 г Na S O на 1 куб.дм
2 2 5
воды. Пиросульфит натрия взвешивают и растворяют в
дистиллированной воде при тщательном перемешивании. Хранят в
посуде, плотно закрытой пробкой.
6.5.2. Проведение анализа
В три конические колбы мерной пипеткой вносят по 25 куб.см раствора бисульфита натрия, закрывают их притертыми пробками. Затем в колбы с бисульфитом натрия добавляют пробы анализируемого раствора глутарового альдегида (содержащие около 0,025 г глутарового альдегида), взвешенные на аналитических весах с погрешностью не более 0,0002 г. Колбы оставляют при комнатной температуре на 30 мин., после чего непрореагировавший бисульфит натрия оттитровывают 0,1 н раствором йода до появления желтой окраски раствора.
Параллельно с рабочим проводят контрольный опыт, для чего в три конические колбы вносят по 25 куб.см раствора бисульфита натрия и оттитровывают их 0,1 н раствором йода до появления желтого окрашивания. Ввиду большой смачиваемости стенок бюретки раствором йода (во избежание большой ошибки) титрование ведут при одинаковой скорости раствора йода во время рабочего и контрольного определений.
6.5.3. Обработка результатов анализа
Массовую долю глутарового альдегида определяют по формуле:
25 х N х K (V -V) 100 = 0,25 х K х (V -V)
х х
X = --------------------- -----------------,
1000 х m m
где:
X - массовая доля глутарового альдегида, %;
m - навеска раствора глутарового альдегида, г;
N - нормальность водного раствора йода;
K - поправочный коэффициент к титру раствора йода;
V - объем раствора йода, пошедший на титрование 25 куб.см
х
раствора
бисульфита натрия (контрольной пробы), куб.см;
V - объем раствора йода, пошедший на титрование рабочей пробы,
куб.см.
За результат анализа принимают среднее арифметическое трех определений, расхождение между максимальным и минимальным значениями которых не должно превышать 3%.
6.6. Определение массовой доли активного хлора в препаратах и их растворах
6.6.1. Реактивы и растворы
Вода дистиллированная (ГОСТ 6709-72).
Калий йодистый (ГОСТ 4232-74), 10 - процентный раствор.
Кислота серная (ГОСТ 4204-77), 5 - процентный раствор.
Крахмал растворимый (ГОСТ 10163-76), 1 - процентный раствор.
Натрий серноватистокислый (тиосульфат натрия) по стандарту СЭВ 223-75, 0,1 н раствор.
6.6.2. Определение массовой доли активного хлора в хлорной извести, кальция гипохлорите нейтральном и в натриевой соли дихлоризоциануровой кислоты 1-1,5 г натриевой соли дихлоризоциануровой кислоты (кальция гипохлорита нейтрального) или 2,2-2,8 г хлорной извести взвешивают с погрешностью не более 0,0002 г, переносят в фарфоровую ступку, добавляют 30-40 куб.см воды и растирают пестиком до образования однородной массы.
После отстаивания водный слой декантируют в мерную колбу вместимостью 600 куб.см. К остатку в ступке добавляют около 20 куб.см воды, тщательно растирают и переносят всю массу в ту же колбу. В случае исследования натриевой соли дихлоризоциануровой кислоты навеску сразу переносят в мерную колбу. Объем жидкости в колбе доводят до метки водой, тщательно перемешивают и, не давая осадку осесть, отбирают пипеткой 50 куб.см раствора в коническую колбу вместимостью 500 куб.см. В эту же колбу вносят 10 куб.см раствора йодистого калия, перемешивают, прибавляя 50 куб.см раствора серной кислоты, закрывают колбу пробкой, снова перемешивают и помещают в темное место. Через 5 мин. выделившийся йод титруют раствором серноватистокислого натрия до соломенножелтого цвета, добавляют 1-2 куб.см раствора крахмала и продолжают титрование до обесцвечивания раствора.
6.6.3. Определение массовой доли активного хлора в растворах вышеуказанных препаратов (п. 6.6.2) и гипохлорите натрия 10 куб.см раствора отбирают пипеткой и переносят в мерную колбу вместимостью 250 куб.см, доводят объем раствора водой до метки и тщательно перемешивают.
10 куб.см приготовленного раствора переносят пипеткой в коническую колбу вместимостью 250 куб.см, прибавляя 10 куб.см йодистого калия и 20 куб.см серной кислоты, перемешивают, закрывают колбу пробкой и ставят в темное место.
Через 5 мин. титруют выделившийся йод до обесцвечивания раствора.
6.6.4. Обработка результатов
Массовую долю активного хлора (X) в процентах вычисляют по формуле:
V х 0,0035453 х A х 100
X = -----------------------,
m Б
где:
V - объем 0,1 н раствора серноватистокислого натрия, израсходованный на титрование анализируемой пробы, куб.см;
0,0035453 - масса активного хлора, соответствующая 1 куб.см 0,1 н раствора серноватистокислого натрия, г;
A - исходный объем приготовленного раствора, куб.см;
m - масса навески препарата, г;
Б - масса раствора, взятого для титрования, куб.см.
За результат анализа принимают среднее арифметическое двух параллельных определений, допускаемые расхождения между которыми не должны превышать 0,3%.
7. Приготовление нейтрализующих растворов
Нейтрализующие растворы готовят в концентрации в 10 раз меньше, чем концентрация использованного дезинфицирующего средства.
Раствор делают на стерильной воде в стерильной посуде и разливают в пробирки или флаконы с соблюдением правил стерильности (растворы уксусной кислоты и бикарбоната натрия можно стерилизовать автоклавированием). Раствор аммиака стерилизации не подлежит. Готовые пробирки (флаконы) можно хранить в течение пяти дней при комнатной температуре.
8. Приготовление тампонов
Ватные или марлевые тампоны для взятия смывов монтируют на алюминиевой проволоке, пропущенной через резиновую пробку. В пробирки разливают по 10 мл физиологического раствора, закрывают резиновыми пробками с вмонтированными тампонами и автоклавируют при 1 атм. в течение 30 мин.
9. Подготовка материалов для исследования методом отпечатков
9.1. Подготовка предметных стекол
Для исследования используют предметные стекла (размером 2,5 х 7,5 см) или стекла, разрезанные вдоль на две половинки (1,2 х 7,5 см). Стекла предварительно кипятят 10-15 мин. В 2-5 - процентном растворе моющего порошка ("Лотос", "Новость" и т.п.). Затем поверхность предметных стекол с двух сторон натирают с помощью зубной щетки или ерша этим же порошком, слегка увлажненным водой, после чего тщательно промывают в проточной воде, ополаскивают дистиллированной водой и высушивают на воздухе. Подготовленные стекла хранят в банке с притертой крышкой в сухом виде.
9.2. Обработка ванн и пробирок, предназначенных для транспортировки, хранения и инкубирования проб-отпечатков
При взятии проб на широкие стекла используют пластмассовые ванны для окраски мазков крови на предметном стекле (ТУ 64-1), на узкие - бактериологические пробирки, закрытые резиновыми пробками.
Пластмассовые ванны разбирают и тщательно моют горячим мыльным раствором, после чего ополаскивают вначале водопроводной водой, затем 65-70 - процентным этиловым спиртом или кипящей дистиллированной водой и обрабатывают 2 ч ультрафиолетовыми лучами. На дно подготовленной ванны помещают стерильную фильтровальную бумагу, затем ванны собирают и закрывают крышками.
Бактериологические пробирки и резиновые пробки моют и стерилизуют общепринятым способом. Перед стерилизацией на дно пробирки помещают небольшой ватный тампон.
9.3. Подготовка предметных стекол со средой
В стерильном боксе на предметные стекла наносят тонкий слой расплавленной питательной среды: для выделения группы бактерий кишечной палочки используют агар Эндо, стафиллококков - 8,5 - процентный солевой мясопептонный агар (pH 7,2-7,4). Количество нанесенной среды должно соответствовать 0,15 мл (четыре капли) для узкого предметного стекла и 0,33 мл (восемь капель) - для широкого.
Перед нанесением на стекло среду, находящуюся в пробирках, ставят в водяную баню и расплавляют. Затем в нее погружают стерильную пастеровскую пипетку. Температуру воды в бане поддерживают в пределах 80-90 град.C.
Прогретые над пламенем горелки предметные стекла (берут корнцангом) раскладывают на ровной, строго горизонтальной поверхности стола. На них пипеткой наносят указанное количество питательной среды, отступив на 2-2,5 см от поперечного края стекла. Затем, расположив горизонтально пастеровскую пипетку, питательную среду быстро распределяют по средней трети поверхности стекла и подсушивают при комнатной температуре до появления вокруг питательной среды высушенной полосы шириной 0,5-1 мм. Широкие стекла со средой помещают в пластмассовые ванны, узкие - в пробирки.
Ванны и пробирки предварительно увлажняют путем внесения на дно 1 мл, 0,1 мл стерильной водопроводной воды соответственно.
Для удобства транспортировки ванны устанавливают в бюксы, пробирки - в металлические пеналы или в специально приспособленную сумку.
Подготовленные предметные стекла с солевым агаром хранят при температуре 4 град.С до десяти суток, со средой Эндо - двое-трое суток (если нет видимого изменения цвета среды).
10. Подготовка стекол для микрокультивирования микобактерий
Предметные стекла разрезают вдоль на узкие полоски размером 1,2 х 7,5 см, моют и помещают на 2 ч в хромпик (40 г двухромовокислого калия высыпают в фарфоровую кружку или эксикатор и растворяют в небольшом количестве воды, затем осторожно добавляют концентрированную серную кислоту до общего объема 1 л).
После хромпика стекла вновь моют дистиллированной водой, протирают чистой льняной тканью, стерилизуют сухим жаром (160 град.С) 2 ч и хранят в закрытых сосудах (эксикаторах).
11. Приготовление питательных сред
11.1. Среды для выделения кишечной палочки
11.1.1. Модифицированная среда Хейфеца
К 1 л дистиллированной воды добавляют 10 г пептона, 5 г хлорида натрия и 4 г лактозы. Смесь доводят до кипения, затем фильтруют и после остывания определяют pH, который должен быть 7,4-7,8. Затем к среде добавляют в качестве индикатора 1 мл 5 - процентного спиртового раствора розоловой кислоты и 2,3 мл 0,1 - процентного водного раствора метиленовой сини. Среду разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют в автоклаве при 0,5 атм. 15 мин. Исходный цвет среды - красновато-сиреневый.
11.1.2. Питательная среда КОДА сухая
Состав и способ приготовления приведены в этикетке на упаковке среды.
11.2. Среды для выделения стафиллококка
11.2.1. Солевой мясопептонный бульон
К обычному МПБ с pH 7,2-7,4 добавляют 6% натрия хлорида, х.ч. или ч.д.а., перемешивают до полного растворения соли, разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют при 1 атм. 20-30 мин.
11.2.2. Солевой мясопептонный агар
К расплавленному МПА добавляют 8% натрия хлорида, х.ч. или ч.д.а., перемешивают до полного растворения соли, разливают в колбы и стерилизуют при 1 атм. 20-30 мин. Перед использованием солевой агар разливают в стерильные бактериологические чашки по 10-15 см. После застывания среду подсушивают в термостате 1 ч.
11.3. Дифференциально-диагностическая среда для индикации Bac. anthracis
11.3.1. Приготовление растворов ингредиентов
Полимиксина М сульфат во флаконе растворяют в стерильной дистиллированной воде, а затем последовательными разведениями стерильным 0,9 - процентным раствором натрия хлорида доводят до концентрации 10000 ЕД/мл.
Невиграмон переносят в стеклянный флакон или пробирку и растворяют в 25 - процентном водном растворе аммиака при тщательном перемешивании стеклянной палочкой. Затем последовательно разводят стерильным 0,9 - процентным раствором натрия хлорида до концентрации 100 мкг/мл.
Моющее средство "Прогресс" растворяют стерильной дистиллированной водой до 0,1 - процентной концентрации.
Гризеофульвин (в таблетках) тщательно растирают в ступке, затем растворяют в стерильной дистиллированной воде до содержания 100 мкг препарата в 1 мл.
Фенолфталеинфосфат натрия (заводской 10 - процентный раствор) стерилизуют 30 мин. на водяной бане при 56 град.C.
11.3.2. Приготовление дифференциально-диагностической среды
100 мл питательного агара (в колбах) расплавляют в кипящей водяной бане и охлаждают до температуры 46-60 град.C. Затем в агар добавляют 0,5 мл полимиксина М сульфата, столько же невиграмона, гризеофульвина(*), такое же количество моющего средства "Прогресс" и 0,1 мл фенолфталеинфосфата натрия.
_______________
(*) Гризеофульвин добавляют в среду при подозрении на загрязнение материала грибами.
После перемешивания среду разливают в чашки Петри (крышки открыты) и подсушивают 1,5-2 ч. Дифференциально-диагностическую среду после разлива можно хранить в холодильнике в течение одних-двух суток.
Готовую дифференциально-диагностическую среду выпускает Ставропольская научно-исследовательская ветеринарная станция (355100, г. Ставрополь, ул. Биологическая, 20).
11.4. Среда Сотона для выделения микобактерий
В 940 мл дистиллированной воды растворяют 4 г аспарагина, 2 - лимонной кислоты, 0,5 - калия фосфорнокислого двузамещенного, 0,5 - сернокислой магнезии и 0,05 г лимоннокислого аммиачного железа. Затем добавляют 60 мл нейтрального глицерина. После полного растворения аспарагина и солей pH среды должен быть 7,4. Среду разливают по 200 мл в колбы вместимостью 250 мл и стерилизуют 30 мин. в автоклаве при 1,5 атм.
Перед использованием в колбу со средой Сотона добавляют 30 мл стерильной сыворотки крови крупного рогатого скота и разливают в стерильные пробирки по 7-8 мл.
12. Приготовление индикаторных пробирок для контроля качества дезинфекции аэрозолями формальдегида
Индикаторные пробирки - это стеклянные трубки диаметром 4-8 мм и длиной 40-50 мм. В качестве таких пробирок могут быть использованы пробирки Уленгута или отрезки пастеровских пипеток, запаянные с одного конца. Пробирки заливают расплавленной индикаторной средой до уровня обреза пробирок, запечатывают парафином и хранят 1 мес. (со дня изготовления) при температуре 0-5 град.C.
Для учета результатов без линейки на индикаторные пробирки при их изготовлении можно нанести две риски на расстоянии 18 и 30 мм от среза пробирки.
Для экспресс-метода контроля качества аэрозольной дезинфекции помещений используют среду Эндо, выпускаемую биологической промышленностью в сухом виде; 2 - процентную взвесь сухой среды в дистиллированной воде доводят до кипения и пропускают через ватный фильтр, после чего среду заливают в пробирки при помощи пипеток.
13. Подготовка тест-объектов для контроля качества дезинфекции спецодежды
В качестве тест-культур используют музейные штаммы кишечной палочки, золотистого стафиллококка (St. aureus - штамм 209-Р) и антракоида (Bac. anthracoides - штамм 96).
Музейные культуры (после лиофильной сушки) хранят при температуре минус 4 град.C не более двух лет; в виде посевов на МПА (посев уколом) под слоем стерильного вазелинового масла (толщина слоя 1,5-3 мм) не более шести месяцев.
Батистовую ткань стирают, гладят, нарезают на кусочки размером 5 х 10 мм, которые раскладывают по 50 шт. в чашки Петри. Чашки завертывают в плотную бумагу и стерилизуют 30 мин. в автоклаве при температуре 110 град.C (0,5 атм.).
Стерильные тест-объекты в той же чашке Петри заливают смесью двухмиллиардной взвеси тест-культуры и инактивированной сыворотки крови (или 40-50 - процентной эмульсии кала животных), взятых в соотношении 1:1 (из расчета 1 мл на 1 тест-объект). Чашку Петри закрывают крышкой и оставляют при комнатной температуре на 20 мин. Затем тест-объекты переносят в другую чашку Петри на поверхность стерильной фильтрованной бумаги, положенной в два слоя на дно чашки, покрывают сверху листом стерильной фильтровальной бумаги, чашку закрывают крышкой. Через 10 мин. тест-объекты переносят на поверхность листа стерильной фильтровальной бумаги в чашке Петри, подсушивают 20-30 мин. в термостате при 37 град.C.