Про затвердження методичних рекомендацій по застосуванню тест-систем НоваСтрік

Відповідно до статті 40 Закону України "Про забезпечення санітарного та епідемічного благополуччя населення"

1. Затвердити рекомендовані Комітетом з питань гігієнічного регламентування Міністерства охорони здоров'я України методичні рекомендації "Застосування тест-систем НоваСтрік для санітарно-бактеріологічного контролю об'єктів довкілля", розроблені Центральною санітарно-епідеміологічною станцією МОЗ України (додається).

2. Департаменту державного санітарно-епідеміологічного нагляду Міністерства охорони здоров'я України методичні рекомендації довести до установ та закладів державної санітарно-епідеміологічної служби, міністерств, інших центральних органів виконавчої влади у встановленому порядку.

3. Контроль за виконанням цього наказу покладаю на першого заступника головного державного санітарного лікаря України Бережнова С.П.

Методичні рекомендації призначені для застосування в лабораторіях установ державної санітарно-епідеміологічної служби України, що здійснюють вибірковий контроль за якістю продовольчої сировини, харчових продуктів, санітарно-гігієнічним станом інвентарю та обладнання на підприємствах, дослідження харчових продуктів, продовольчої сировини та інших об'єктів довкілля при розслідуванні причин виникнення епідускладнень, пов'язаних з харчовим шляхом передачі, також у лабораторіях інших організацій, акредитованих у встановленому порядку на право проведення контролю безпеки харчової продукції і продовольчої сировини; в організаціях, що здійснюють виробничий контроль продовольчої сировини і харчових продуктів у процесі промислового виробництва і випуску продукції.

1. Основи законодавства України про охорону здоров'я.

2. "Положення про державний санітарно-епідеміологічний нагляд в Україні" затверджене Постановою Кабінету Міністрів України 22.06.99 N 1109, в редакції Постанови Кабінету Міністрів України від 19.08.02. N 1217.

3. Закон України "Про забезпечення санітарного та епідемічного благополуччя населення".

4. Закон України "Про захист населення від інфекційних хвороб".

5. ДСП N 9.9.5.035.99 "Безпека роботи з мікроорганізмами I-II груп небезпеки".

6. ДСП N 9.9.5.064.2000 "Порядок видачі дозволів на роботу із мікроорганізмами I-IV груп патогенності та рекомбінантними молекулами ДНК".

7. ДСП N 9.9.5.-080-2002 "Правила влаштування і безпеки роботи в лабораторіях (відділах, відділеннях) мікробіологічного профілю".

8. ГОСТ 26669-85 Продукты пищевые и вкусовые. Подготовка проб для микробиологических анализов.

З розвитком високих технологій, зростанням обсягу виробництв і з ростом попиту на їх продукцію, стає усе сутужніше і дорожче простежити за її якістю на основі вже застарілих традиційних методів бактеріологічного дослідження. Як правило, одержання остаточного результату при такому трудомісткому і неекономічному способі займає три і більше днів. Сучасні досягнення в науці і технології зробили процес виявлення й ідентифікації санітарно-показової мікрофлори та патогенних мікроорганізмів більш швидким, безпечним і зручним. Ці нові методи стали називати "швидкими методами" через їх здатність значно прискорювати одержання остаточних результатів, різко знижуючи при цьому собівартість самого дослідження.

3.1. Призначення. Тест-системи НоваСтрік призначені для прискорення одержання результатів санітарно-бактеріологічних досліджень продуктів харчування та продовольчої сировини, води, робочих поверхонь на виробництвах за показниками біологічної безпеки, а також зниження рівня ручної праці в лабораторіях.

3.2. Застосування. Тест-системи НоваСтрік застосовуються для напівавтоматичного посіву рідких та напіврідких проб безпосередньо на місці забору, а твердих - у лабораторіях, транспортування їх у лабораторію та одноетапного кількісного і якісного визначення бактеріального забруднення харчових, в тому числі молочних продуктів, продовольчої сировини, води і поверхонь.

Проведення досліджень за допомогою тест-систем НоваСтрік складається з трьох етапів: посів, інкубація і облік результатів.

Посівний механізм тест-систем НоваСтрік, у випадку рідких і напіврідких проб, забезпечує ріст ізольованих колоній у пробах з високим ступенем бактеріального забруднення, навіть без попереднього розведення (понад 107 мікроорганізмів у куб. см).

В Україні зареєстровані і дозволені до застосування тест-системи НоваСтрік призначені для визначення показників біологічної безпеки: загальної кількості мезофільних аеробних та факультативно-анаеробних мікроорганізмів (МАФАМ), загальних коліформних бактерій, дріжджових та пліснявих грибів, стафілококів, ентерококів, сальмонел та шигел (номери за каталогом: BD 507, BD 508, BD 511, BD 521), сертифікат державної реєстрації N 414/03 - 3002 00 000 від 29.12.03.

3.3. Принцип методу та загальна процедура проведення дослідження. Тест-система НоваСтрік являє собою пластикову лопатку покриту по обидва боки відповідними агаризованими поживними середовищами в залежності від показників, для визначення яких призначена тест-система (див. додаток 1). Використовуються поживні середовища та компоненти виробництва США (Becton Dickinson microbiology systems, Difco Laboratories, Biorapid Laboratories, Remel Inc.) та Великої Британії (LAB.M , Oxoid Ltd) та ін.

Лопатка вставлена одним кінцем у кришку, що загвинчується, і поміщена в прозору пластикову пробірку. Пластикове кільце з подовженими зубцями прикріплено до іншого кінця лопатки таким чином щоб над кожною її стороною розташовувалося по три зубця. Кінці зубців занурюються безпосередньо у нерозведену рідку пробу, що досліджується, або у розведену 1:1 або 1:10 пептонно-сольовим розчином у разі дослідження твердих продуктів. У процесі повернення лопатки у вихідну пробірку кільце з зубцями застряє в отворі пробірки і, поверхні агарів, проходячи між кінцями застряглих зубців, протирають їх, роблячи в такий спосіб розсів матеріалу по своїй поверхні поживного середовища. В наслідок цього, з кожної сторони агару, виходить серія смужок-штрихів зі зменшуваною бактеріальною концентрацією, що дозволяє отримати ізольовані колонії, навіть при високих концентраціях мікроорганізмів у пробі. Кількісний облік проводять порівнюючи кількість колоній, що виросли з графіками щільності проросту колоній, що прикладаються до кожній упаковки тест-системи.

При необхідності, подальшу ідентифікацію колоній, що виросли, та типування збудників, що виділені, проводять за загально прийнятими методами відповідно до чинної нормативної документації.

Результати дослідження реєструють у робочих журналах встановленої форми.

В необхідних випадках арбітражним методом є класичний бактеріологічний метод.

Культури патогенних мікроорганізмів, що виділені, підлягають направленню на підтвердження та подальше вивчення до Кримської Республіканської, обласних, Київської, Севастопольської міських, Центральної на водному транспорті санепідстанцій та Центральної санепідстанції МОЗ України у встановленому порядку.

Методика використання тест-систем НоваСтрік змінюється в залежності від характеру і властивостей досліджуваного матеріалу.

1. Метод НАПІВАВТОМАТИЧОГО ШТРИХОВОГО ПОСІВУ застосовується при дослідженні наступних матеріалів:

a. рідкі і напіврідкі молочні і кисломолочні продукти (за винятком незбираного молока) без попереднього розведення проб або молочні продукти твердої консистенції (сири, олія, маргарин тощо); сирі, охолоджені і заморожені продукти (м'ясо, м'ясопродукти, птиця, риба, продукти моря, напівфабрикати, овочі, фрукти, сиропи і пасти), а також збезводнені продукти (яєчний порошок, сухе молоко, порошкові супи, швидкорозчинні десерти, какао тощо) після попереднього роздрібнення і розведення проб стерильною водою в співвідношенні 1:1 або 1:10;

b. вода, стічні води і т.д.) з передбачуваним високим змістом мікроорганізмів у пробах без попереднього їх розведення;

c. змиви з робочих поверхонь, устаткування або рук персоналу з передбачуваним високим змістом мікроорганізмів у пробах.

2. Метод ЗАНУРЕННЯ СЛАЙДА В ПРОБУ застосовується при дослідженні наступних матеріалів:

Незбиране молоко, стічні води, і т. ін.) з передбачуваним низьким змістом мікроорганізмів без попереднього розведення проб.

3. КОНТАКТНИЙ метод застосовується при дослідженні наступних об'єктів:

поверхні (контроль за якістю очисних процедур і дезінфекції робочих поверхонь, інструментів і устаткування в чистих виробництвах); шкіра рук; спецодяг.

3.4. Переваги методу НоваСтрік.

- Скорочення термінів дослідження.

- Зниження собівартості досліджень (виключення матеріальних та трудовитрат на підготовку та стерилізацію лабораторного посуду, виготовлення та стерилізацію поживних середовищ, підготовку проб до дослідження).

- Використання стандартних поживних середовищ, промислового виготовлення.

- Виключення етапу попереднього розведення досліджуваних рідких проб.

- Можливість отримання ізольованих колоній навіть при масивному бактеріальному забрудненні.

3.5. Форма випуску. Пластмасові штативи з пробірками НоваСтрік по 10 одиниць, вкладені у картонні промарковані коробки.

3.6. Термін та умови зберігання - 6 місяців при температурі (6+-2) град. С, уникаючи прямого світла. (термін придатності вказаний на етикетці).

3.7. Виробник "Новамед Лтд", Ізраїль, Єрусалим 93469, вул. П'ер Кенінг, 28; тел. 972 2 6781883; факс 972 2 6781852.

3.8. Фірма постачальник ТОВ. "Дніпро-Інвест", України, 02152, м. Київ, пр-т П. Тичини, 1/323, тел/факс (044) 558 53 22, 550 14 15.

Термостати електричні сухоповітряні з автоматичним терморегулятором температур до 55 град. С, що дозволяють підтримувати в камері температуру, що задана, з точністю +-1 град. С

Гомогенізатор

Стерилізатор паровий (автоклав електричний)

Холодильники побутові

Лупа вимірювальна 4-10х

Мікроскоп біологічний

Бактеріологічні петлі

Скельця предметні для мікроскопів

Пальник газовий або спиртівка

Тест-системи НоваСтрік

Пептонно-сольовий розчин

Середовище Кесслер

Магнієве середовище

Сольовий бульйон

Маркери по склу

Контейнери (сумки) для транспортування проб (посівів) в лабораторію.

5.1. Відбір проб (посів на місці) проводить спеціаліст після проходження інструктажу з техніки відбору проб для мікробіологічного дослідження та роботи з тест-системами НоваСтрік.

5.2. При відборі проб в одній і тій же точці для різних цілей першими відбираються проби для мікробіологічного дослідження.

5.3. Проба, що відібрана, або посіви на тест-системи НоваСтрік, маркуються на місці і супроводжуються направленням встановленої форми із зазначенням місця, дати, часу відбору, прізвища та посади спеціаліста, який відбирав пробу, мети дослідження та іншої інформації.

5.4. Тест-системи НоваСтрік після закінчення терміну придатності використанню на підлягають.

6.1. Встановити пробірку НоваСтрік вертикально на рівній поверхні. Однією рукою утримуючи пробірку, відкрутити іншою рукою кришку і швидким рухом витягти лопатку.

У випадках коли неможливо установити пробірку НоваСтрік на рівній поверхні, посів здійснюють утримуючи НоваСтрік у руці. При цьому, ретельно дотримуються однієї площини при витягуванні та вставлянні лопатки стосовно пробірки.

6.2. Утримуючи лопатку чітко вертикально, занурити зубці на декілька секунд, приблизно до половини їх довжини у контейнер із досліджуваним зразком, без попереднього його розведення.

Застереження: не торкатися руками до внутрішніх стерильних елементів лопатки і пластикового кільця!

6.3. Вставити зубці лопатки в отвір вихідної пробірки НоваСтрік, а потім швидким, вертикальним і тривалим зусиллям (ударом долоні або пальця) заштовхнути лопатку в пробірку, не допускаючи перекосу, і закрутити кришку. Пробірку промаркувати.

6.4. Відправити засіяний НоваСтрік із направленням на санітарно-мікробіологічне дослідження (ф. 205/0) у лабораторію для наступної інкубації і подальшого дослідження. Якщо негайне відправлення засіяного НоваСтріка в лабораторію неможливо, дозволяється, як виключення, зберігати його в закритому стані при кімнатній температурі до першої можливості відправлення в лабораторію (до 48 годин).

Застереження: не поміщати засіяний НоваСтрік у холодильник!

6.5. При надходженні в лабораторію, засіяну тест-систему зареєструвати в реєстраційному журналі і перед тим, як поставити в термостат відкрутити кришку НоваСтрік на півоберту. Інкубувати НоваСтрік у вертикальному положенні, у режимі, відповідно до мети дослідження, що відзначена в направленні на аналіз (див. додаток 1).

6.6. По закінченню терміну інкубації провести облік результатів. Визначити концентрацію мікроорганізмів у 1 куб. см зразка порівнюючи щільність колоній, що виросли на кожній стороні тест-системи, з прикладеним до кожної упаковки НоваСтріка, графіком А щільності проросту колоній (див. додаток 2).

7.1. Відкрутити кришку НоваСтріка і швидким рухом витягти лопатку.

7.2. Негайно вставити зубці лопатки у отвір вихідної пробірки НоваСтріка і швидким рухом із зусиллям вставити лопатку в пробірку для того, щоб встановити зубці у верхній позиції.

7.3. Вийняти лопатку із пробірки і утримуючи її чітко вертикально, занурити на кілька секунд у контейнер з досліджуваною пробою до повного покриття агару.

Застереження: не торкатися руками до внутрішніх стерильних елементів лопатки.

7.4. Витягти лопатку з проби, стряхнути надлишок проби в контейнер, уставити лопатку в пробірку і закрутити кришку. Пробірку промаркувати.

7.5. Відправити засіяний НоваСтрік із направленням на санітарно-мікробіологічне дослідження (ф. 205/0), у лабораторію для наступної інкубації і подальшого дослідження. Якщо негайне відправлення засіяного НоваСтріка в лабораторію неможливе, дозволяється, як виняток у виключних випадках, зберігати його в закритому стані при кімнатній температурі до першої можливості відправлення в лабораторію (до 48 годин).

Застереження: не поміщати засіяний НоваСтрік у холодильник!

7.6. При надходженні в лабораторію, зареєструвати засіяну тест-систему в реєстраційному журналі, перед розміщенням в термостат відкрутити кришку НоваСтріка на півоберту і інкубувати НоваСтрік у вертикальному положенні, у режимі, відзначеному в направленні на дослідження відповідно до мети дослідження (див. додаток 1).

7.7. По закінченню терміну інкубації провести облік результатів. Визначити концентрацію мікроорганізмів у 1 куб. см проби порівнюючи щільність колоній, що виросли на кожній стороні агару з прикладеним до кожної упаковки НоваСтріка, графіком Б щільності проросту колоній (див. додаток 2).

8.1. Як правило, посів продуктів твердої консистенції здійснюється безпосередньо в лабораторії.

8.2. Загальні вимоги до підготовки проб до дослідження згідно ГОСТ 26669-85.

8.3. Продукт попередньо подрібнюють дотримуючись правил асептики і розводять пробу стерильним пептонно-сольовим розчином у співвідношенні 1:1 або 1:10.

8.4. Відкрутити кришку пробірки НоваСтріка і швидким рухом витягти лопатку.

8.5. Негайно вставити зубці лопатки у отвір вихідної пробірки НоваСтріка і швидким рухом із зусиллям вставити лопатку в пробірку для того, щоб встановити зубці у верхній позиції.

8.6. Вийняти лопатку із пробірки і утримуючи її чітко вертикально, занурити на кілька секунд у контейнер з попередньо подрібненою і розведеною стерильним пептонно-сольовим розчином 1:10 чи 1:1 пробою, до повного покриття агару.

У випадках, коли кількість проби обмежена, дозволяється, з дотриманням правил асептики, облити пробою по черзі обидві сторони лопатки, до повного покриття агарів.

Застереження: не торкатися руками до внутрішніх стерильних елементів лопатки!

8.7. Витягти лопатку з проби, стряхнути надлишок проби в контейнер, вставити лопатку в пробірку і закрутити кришку. Пробірку промаркувати.

8.8. Перед розміщенням в термостат відкрутити кришку НоваСтріка на півоберту і інкубувати НоваСтрік у вертикальному положенні, у режимі, відзначеному в направленні на дослідження відповідно до мети дослідження (див. додаток 1).

8.9. Після закінчення терміну інкубації провести облік результатів. Визначити концентрацію мікроорганізмів у 1 г проби, порівнюючи щільність колоній, що проросли на кожній стороні агару з прикладеним до кожної упаковки НоваСтріка, графіком Б щільності проросту колоній.

При визначенні концентрації мікроорганізмів у 1 г зразка продуктів слід враховувати розведення 1:1 або 1:10, збільшуючи результат у 2-10 разів.

9.1. Відкрутити кришку НоваСтріка і швидким рухом витягти лопатку.

9.2. Негайно вставити зубці лопатки у отвір вихідної пробірки НоваСтріка і швидким рухом із зусиллям вставити лопатку в пробірку для того, щоб встановити зубці у верхній позиції.

9.3. Вийняти лопатку із пробірки і утримуючи рукою за кришку, легким зусиллям притулити лопатку однією стороною агару до досліджуваної поверхні протягом декількох секунд. Перевернути лопатку і повторити маніпуляцію з другою стороною НоваСтріка.

Застереження: не доторкатися руками до внутрішніх стерильних елементів лопатки!

9.4. Вставити лопатку в пробірку, закрутити кришку, промаркувати пробірку.

9.5. Відправити засіяний НоваСтрік із направленням на санітарно-мікробіологічне дослідження (ф. 205/0), у лабораторію для наступної інкубації і подальшого дослідження. Як виключення, у випадку ускладнень у негайному відправленні засіяного НоваСтріка в лабораторію, дозволяється зберігати його в щільно закритому стані, при кімнатній температурі до першої можливості відправлення в лабораторію.

Застереження: не поміщати засіяний НоваСтрік у холодильник!

9.6. При надходженні в лабораторію, зареєструвати засіяну тест-систему і перед поміщенням в термостат відкрутити кришку НоваСтріка на півоберту Інкубувати НоваСтрік у вертикальному положенні, у режимі, відзначеному в направленні на дослідження відповідно до мети дослідження (див. додаток 1).

9.7. Визначити концентрацію мікроорганізмів на досліджуваній ділянці поверхні, порівнюючи щільність колоній, що проросли на кожній стороні тест-системи з прикладеним до кожної упаковки НоваСтріка, графіком В, Г, Д щільності проросту колоній.

10.1. Визначення мезофільних аеробних і факультативно-анаеробних мікроорганізмів

Кількість колонієутворюючих одиниць (КУО) мезофільних аеробних і факультативно-анаеробних мікроорганізмів (МАФАМ) в 1 г (куб. см) продукту визначається штриховим методом посіву на тест-систему НоваСтрік (шляхом занурення зубців, що засівають, у пробу без попереднього її розведення). Результат визначається за допомогою графіка А щільності проросту колоній при посіві методом НоваСтріка.

Для твердих продуктів та для води кількість колонієутворюючих одиниць (КУО) мезофільних аеробних і факультативно-анаеробних мікроорганізмів (МАФАМ) в 1 г (куб. см) продукту визначається методом занурення НоваСтріка в відповідне розведення проби. Результат визначається за допомогою графіка Б щільності проросту колоній при посіві методом НоваСтріка.

10.2. Визначення БГКП (коліформи)

10.3. Визначення Staphylococcus aureus

Не допускається присутність мікроорганізмів у 0,1; 0,01 і 0,001 г (куб. см) досліджуваного зразка або не допускається концентрація в 10 в ступ. 3 ; 10 в ступ. 2 чи 10 КУО, відповідно, у г (куб. см) досліджуваного зразка. Методика посіву аналогічна такий у БГКП. Як середовище накопичення використовується сольовий бульйон.

10.4. Визначення патогенних мікроорганізмів, у тому числі сальмонел

Необхідну кількість 25 г (куб. см) досліджуваного продукту поміщають в середовище накопичення (225 куб. см магнієвого середовища), інкубують 18-24 год. Після цього засівають на НоваСтрік методом занурення агарової пластинки в пробу на середовище збагачення (метод дипслайда). Попередній облік результатів через 18 год., остаточний - через 24 год.

Дослідження із застосуванням тест-систем НоваСтрік проводять з дотриманням правил біологічної безпеки відповідно до вимог ДСП 9.9.5.-080-2002 "Правила влаштування і безпеки роботи в лабораторіях (відділах, відділеннях) мікробіологічного профілю".

Знезараження використаної тест-системи НоваСтрік проводиться стандартними методами, що застосовуються для біологічно небезпечних відходів.