- центрифуга до 14000 об./хв. для пробірок типу "Епендорф";
- мікроцентрифуги-вортекси (для перемішування реакційної суміші);
- автоматичні дозатори змінного об'єму 1-канальні:
0,5-10 мкл - 2 шт;
5-50 мкл - 3 шт;
50-200 мкл - 2 шт;
200-1000 мкл - 2 шт;
- штативи для автоматичних дозаторів, штативи для пробірок на 2,0 мл і 0,2 мл;
- пробірки на 2,0 та 1,5 мл поліпропіленові, конічні, з маркіровкою "оброблені проти РНК-аз та ДНК-аз";
- пробірки 0,2 мл;
- обладнання для проведення горизонтального електрофорезу (джерело живлення, камера для електрофорезу, трансілюмінатор, система відеодокументації);
- наконечники для автоматичних дозаторів з фільтрами, різного об'єму, оброблені проти РНК-аз;
- дезінфікуючі засоби;
- 70% етиловий спирт;
- ізопропіловий спирт;
- гумові рукавички;
Перший етап - виділення ДНК з лімфоцитів.
Другий етап - ампліфікація певного фрагмента провірусної ДНК (специфічне розмноження геномної послідовності вірусу).
Облік результатів (третій етап) - проводять методом горизонтального електрофорезу у 2% агарозному гелі.
У разі визначення РНК ВІЛ, дослідження проводять так, як було описано вище (в розділі 3.2).
Алгоритм тестування на наявність провірусної ДНК ВІЛ.
Перше обстеження на наявність провірусної ДНК ВІЛ методом ПЛР проводять в 1-2 місяця життя дитини:
- при отриманні негативного результату проводять друге визначення провірусної ДНК у віці 6 місяців;
- при отриманні позитивного результату проводять аналіз другого зразка крові в термін не пізніше 2 тижнів.
Друге обстеження на визначення провірусної ДНК ВІЛ, для підтвердження діагнозу, проводять в віці 6 місяців:
- при отриманні негативного результату - зняття з обліку;
- при отриманні позитивного результату - підтвердження діагнозу ВІЛ-інфекція.
Чутливість та специфічність ПЛР-аналізу для діагностики ВІЛ-інфекції у дітей перших місяців життя становить:
- до 4 тижнів життя - 93%;
- з 4 до 8 тижнів - 98%;
- після 4 місяців приблизно 100%.
При підозрі на антенатальне інфікування для своєчасного початку ВААРТ бажано перше тестування на наявність провірусної ДНК ВІЛ методом ПЛР проводити через 48 годин після народження (забороняється досліджувати пуповинну кров, оскільки вона може бути забруднена кров'ю матері).
У разі отримання негативного результату для остаточного встановлення діагнозу у двомісячному віці слід повторити аналіз на виявлення провірусної ДНК ВІЛ.
Отримання позитивного результату дозволяє встановити попередній діагноз ВІЛ-інфекції. Остаточний діагноз ВІЛ-інфекції встановлюється після отримання повторного позитивного результату ПЛР на наявність ДНК ВІЛ, який проводять при дослідженні другого зразка крові.
Перелік посилань
1. Наказ МОЗ України від 25.05.2000 р. N 120 "Про удосконалення організації медичної допомоги хворим на ВІЛ-інфекцію/СНІД".
2. А.Г.Рахманова. ВИЧ-инфекция, клиника, лечение. Санкт-Петербург. - 2000 г.
3. Е.И.Змушко, Е.С.Белозеров. ВИЧ-инфекция. Санкт-Петербург. - 2000 г.
4. Г.И.Козинец, В.В.Высоцкий, В.М.Негорелов, А.А.Еровигенков, В.А.Малов. Кровь и инфекция. М. Триада-фарм, 2001 г.
5. Навчальний посібник з лабораторної діагностики. ВІЛ-інфекції/СНІДу, навчально-методичний посібник для лікарів. Київ. - 1999 р.
6. А.Г.Рахманова, Е.Е.Воронин, Ю.А.Фомин. ВИЧ-инфекция у детей. Санкт-Петербург, - 2003 г.
7. А.Я.Лысенко, М.Х.Туроянов, М.В.Лавдовская, В.М.Подольский. ВИЧ-инфекция и СПИД - ассоциируемые заболевания. М. - 1996 г.
8. В.В.Покровский, Т.Н.Ермак, В.В.Беляева, О.Г.Юрин. ВИЧ-инфекция: клиника, диагностика и лечение. М. - 2000 г.
9. А.А.Мельник. Референтные значения лабораторных показателей у детей и взрослых. Киев. - 2000 г.
10. В.С.Камышников. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике, том. 1, 2. Минск. - 2000 г.
11. В.И.Покровский, О.К.Поздив. Медицинская микробиология. М. - 1999 г.
12. Ю.П. Финогеев, Ю.В.Лобзин, Ю.А.Виникмен, С.М.Захарченко, Ю.Н.Громыко, А.Н.Усков. Клинико-лабораторная диагностика инфекционных болезней. Санкт-Петербург. - 2001 г.
13. А.В.Литвинов. Нормы в медицинской практике (справочное пособие). Москва. - 2002 г.
14. Ю.В.Хмелевский, О.К.Усатенко. Основные биохимические контакты человека в норме и при патологии. Киев. - 1987 г.
15. Г.И.Назаренко, А.А.Кишкун. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований. Москва. - 2002 г.
16. Европейские стандарты диагностики и лечения заболеваний, передаваемых половым путем. Москва: Медицинская литература. - 2003 г.
17. М.А.Базарнова. Руководство по клинической лабораторной диагностике, часть 1, 2. Киев. - 1982 г.
18. А.М. Базарнова, В.Т. Морозова. Руководство по клинической лабораторной диагностике, ч. 3, Клиническая биохимия. Киев. - 1990 г.
19. Н.М.Овчинников, В.Н.Беднова, В.В.Делекторский. Лабораторная диагностика заболеваний, передающихся половым путем. Москва. - 1987 г.
20. И.И.Мавров. Конктактные инфекции, передающиеся половым путем. Киев. - 1999 г.
21. Иммунологические методы. Перевод с немецкого А.П.Тарасова. Москва. - 1987 г.
22. З.С.Баркогон. Геморагические заболевания и синдромы. Москва. - 1988 г.
23. В.В.Меншиков. Лабораторные методы исследования в клинике. Справочник. Москва. - 1987 г.
24. А.В.Шабров и соавт. Профилактика и лечение оппортунистических инфекций, кандидозов и гельминтозов. Книга 1. Санкт-Петербург-Москва, - 2002 г.
25. Дифференциальная лабораторная иммунодиагностика вирусных гепатитов. Методические рекомендации. Министерство обороны Российской Федерации, Главное военно-медицинское управление. Москва. - 2002 г.
26. В.М.Бондаренко, Н.М.Грачева, Т.В.Мацулевич. Дисбактериозы кишечника у взрослых. Москва. - 2003 г.
27. Т.Я.Свищева. Атлас клеток крови и паразитов человека. Москва-Санкт-Петербург. - 2002 г.
28. В.В.Меншиков. Клиническая лабораторная аналитика. Москва. - 2002 г.
29. Увеличение масштабов применения антиретровирусной терапии в условиях ограниченных ресурсов: Руководство по применению методов общественного здравоохранения. ВОЗ, - апрель 2002 г.
30. John G.Bartlett, Joel E.Gallant. Medical Management of HIV-infection. - 2003. - p. 430.
31. Clinical Management of the HIV-infected Adult. A manual for midlevel clinicians. Originally published September 1993, revised March 2003
32. Guidelines for Performing Single-Platform Absolute CD4+ T-Cell Determinations with CD 45 Gating for Persons Infected with Human Immunodeficiency Virus. Recommendation and Reports: January 31, 2003
33. Пособие по разработке протоколов лечения ВИЧ-инфекции для Украины и других стран Содружества Независимых Государств, штаб-квартира ВОЗ, 5-6 мая 2003 г.
Додатки
Таблиця 1
ГРАФІК ТА ОБ'ЄМ
лабораторних досліджень ВІЛ-інфікованих, які знаходяться на диспансерному нагляді
Таблиця 2
ЗМІНА
лабораторних показників залежно від стадії ВІЛ-інфекції (дорослі)
Таблиця 3
ГРАФІК
диспансерного спостереження ВІЛ-інфікованого пацієнта на початку та продовженні ВААРТ
---------------
|початок ВААРТ|
---------------
|
----------------------------|-------------------------------------------
|Оцінка |тижня V місяці |
|--------------------+-------------------------------------------------|
| |-4|-2|0 |2 |4 |8 |3 |4 |5 |6 |7 |8 |9 |10 |11 |12|
|--------------------+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+---+---+--|
|Дотримання режиму |х |х |х |х |х |х |х |х |х |х |х |х |х |х |х |х |
|лікування | | | | | | | | | | | | | | | | |
|--------------------+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+---+---+--|
|Загальний стан |х | |х |х |х |х |х |х |х |х | | |х | | |х |
|--------------------+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+---+---+--|
|Супутні захворювання|х | |х |х |х |х |х |х |х |х | | |х | | |х |
|--------------------+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+---+---+--|
|Повний анамнез |х | |х |х |х |х |х |х |х |х | | |х | | |х |
|дійсного | | | | | | | | | | | | | | | | |
|захворювання | | | | | | | | | | | | | | | | |
|--------------------+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+---+---+--|
|Фізикальний огляд |х | |х |х |х |х |х |х |х |х | | |х | | |х |
|--------------------+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+---+---+--|
|Визначення | | | | | | | | | | | | | | | | |
|лабораторних | | | | | | | | | | | | | | | | |
|показників: | | | | | | | | | | | | | | | | |
|--------------------+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+---+---+--|
|Гемоглобін |* |* | |* |* |* |* |* |* |* | | |* | | |* |
|--------------------+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+---+---+--|
|Еритроцити |* |* | |* |* |* |* |* |* |* | | |* | | |* |
|--------------------+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+---+---+--|
|Тромбоцити |* |* | |* |* |* |* |* |* |* | | |* | | |* |
|--------------------+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+---+---+--|
|Загальна кількість |* |* | |* |* |* |* |* |* |* | | |* | | |* |
|лейкоцитів і | | | | | | | | | | | | | | | | |
|лейкоцитарна формула| | | | | | | | | | | | | | | | |
|--------------------+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+---+---+--|
|Показники функції |* |* | |* |* |* |* |* |* |* | | |* | | |* |
|печінки (АЛТ, АСТ, | | | | | | | | | | | | | | | | |
|білірубін) | | | | | | | | | | | | | | | | |
|--------------------+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+---+---+--|
|Креатини, | |* | | | | |* | | |* | | |* | | |* |
|сечовина крові | | | | | | | | | | | | | | | | |
|--------------------+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+---+---+--|
|ЛДГ крові | |* | | | | |* | | |* | | |* | | |* |
|--------------------+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+---+---+--|
|Альфа-амілаза крові | |* | | | | |* | | |* | | |* | | |* |
|--------------------+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+---+---+--|
|Глюкоза крові |* |* | |* |* |* |* |* |* |* | | |* | | |* |
|--------------------+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+---+---+--|
|Холестерин, | |* | | | | |* | | |* | | |* | | |* |
|тригліцериди крові | | | | | | | | | | | | | | | | |
|--------------------+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+---+---+--|
|Загальний білок та | |* | | | | |* | | |* | | |* | | |* |
|альбумін крові | | | | | | | | | | | | | | | | |
|--------------------+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+---+---+--|
|Загальний |* |* | |* |* |* |* |* |* |* | | |* | | |* |
|аналіз сечі | | | | | | | | | | | | | | | | |
|--------------------+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+---+---+--|
|Кал на яйця глистів | |* | | |* | |* | | |* | | |* | | |* |
|і найпростіші | | | | | | | | | | | | | | | | |
|--------------------+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+---+---+--|
|Кількість CD4+ |* |* | | | | |* | | |* | | |* | | |* |
|лімфоцитів | | | | | | | | | | | | | | | | |
|--------------------+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+---+---+--|
|Гінекологічний огляд|* | | | | | | | | |* | | | | | |* |
|--------------------+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+---+---+--|
|Рентгенографія |* | | | | | | | | | | | | | | |* |
|грудної клітки | | | | | | | | | | | | | | | | |
|--------------------+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+---+---+--|
|Туберкулінова проба |* | | | | | | | | |* | | | | | | |
|--------------------+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+---+---+--|
|Тест на вагітність* | |* | | | | | | | | | | | | | | |
|--------------------+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+--+---+---+--|
|Критерії початку АРТ|* | |* | | | | | | | | | | | | | |
|--------------------+-------------------------------------------------|
|Інші діагностичні | При необхідності, за рішенням лікуючого лікаря |
|дослідження і | |
|консультації | |
|фахівців (окуліста, | |
|невропатолога, | |
|дерматолога, | |
|психіатра, | |
|оториноларинголога, | |
|фтизіатра) залежно | |
|від наявності | |
|конкретних скарг чи | |
|симптомів | |
------------------------------------------------------------------------
_______________
* Тест на вагітність оптимально проводити не пізніше, ніж за три доби до початку АРТ.
Хоч кількісні методи визначення ВН у крові дозволяють найточніше оцінювати ефективність проведеного лікування і визначати момент, коли воно стає неефективним, їхнє систематичне застосування в хворих, що приймають антиретровірусні препарати, у початкову програму розширення масштабів застосування АРТ в Україні включено не було. Надалі, при впровадженні в Україні кількісних методик ВН, ця ситуація зміниться.
Таблиця 4
ЛАБОРАТОРНІ ДОСЛІДЖЕННЯ
при СНІД-асоційованих інфекціях
Таблиця 5
ЛАБОРАТОРНА ДІАГНОСТИКА
клінічних проявів СНІД-асоційованих інфекцій
Таблиця 6
МУТАЦІЇ СТІЙКОСТІ
(за матеріалами "Medical Management of HIV-infection" John G.Bartlett, Joel E.Gallant. - 2003)
Мутації стійкості
_______________
** Крупні мутації - розвиваються першими, пов'язані зі зниженням ефективності препаратів і підвищенням вірусної активності, впливають на фенотипову стійкість.
*** Дрібні мутації - з'являються пізніше і значно не впливають на фенотипову стійкість.
Таблиця 7
ВИМОГИ
до відбору матеріалу для проведення досліджень методом полімеразної ланцюговою реакції