|ситниковий, волосинець) | | |
|- усі види | | |
|Elymus junceus Fisch | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Просо посівне | 10000 | 150 |
|Panicum miliaceum L. | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Пшениця м'яка та тверда | 25000 | 1000 |
|Triticurn aestivum | | |
|L. Т. durum Desf | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Ревінь | 5000 | 50 |
|Rheum rhaponticum | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Редиска | 10000 | 100 |
|Raphanus sativus | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Редька | 10000 | 100 |
|Raphanus sativus | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Рижій посівний | 10000 | 40 |
|Camelina sativa (L.) | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Рис посівний | 25000 | 400 |
|Oriza sativa L. | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Рицина звичайна | 20000 | 1000 |
|Ricinus communis L. | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Pina | 2000 | 50 |
|Brassica rapa | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Ріпак | 10000 | 100 |
|Brassica napus L. | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Салат | 10000 | 50 |
|Lactuca sativa | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Селера | 2000 | 25 |
|Nym. exhort Kew. | | |
|Ahium graveolens | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Серадела посівна | 10000 | 90 |
|Ornithopus sativus Brot | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Скорцонер | 2000 | 50 |
|Scorconera hispanica | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Соняшник | 25000 | 1000 |
|Helianthus annuus L | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Copro | 10000 | 900 |
|Sorghum bicolor | | |
|(L.) Moench | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Copro-суданкові | 10000 | 300 |
|гібриди Sorghum | | |
|bicolor x | | |
|x S.sudanense | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Сочевиця | 10000 | 600 |
|Lens culinaris Medik | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Соя | 25000 | 1000 |
|Glycine max Merr | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Спаржа | 5000 | 100 |
|Asparagus officinalis | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Стоколос (кострець) | 10000 | 90 |
|безостий та прямий | | |
|Bromus inermis Leys | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Суданська трава | 10000 | 250 |
|Sorghum sudanense | | |
|(Piper) Stapf. | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Суріпиця | 10000 | 100 |
|Brassica napus L. | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Тимофіївка лучна | 10000 | 25 |
|Phleum pratense L. | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Тим'ян | 2000 | 25 |
|Thymus vulgaris | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Томат | 100000 | 50 |
|Lycopersicon | | |
|lycopersicum | | |
|(esculentum) | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Тонконіг болотний та | 10000 | 25 |
|звичайний | | |
|Poa palustris L. | | |
|P. trivialis L. | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Тонконіг лучний | 10000 | 25 |
|Poa pratensis L. | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Тритікапе | 25000 | 10000 |
|ТгiticoseсаІе | | |
|(Triticale) | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Турнепос | 2000 | 50 |
|Brassica rapa | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Твтюн | 10000 | 25 |
|Nicotiana tabacum L. | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Фацелія | 10000 | 50 |
|Phacelia tanacetifolia | | |
|L. | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Фенхель | 5000 | 100 |
|Foeniculum vulgare | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Фізаліс | 2000 | 25 |
|Physalis | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Цибуля (всі види) | 10000 | 50 |
|Allium spp. | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Цикорій кореневий | 2000 | 25 |
|салатний Cichorium | | |
|intybus | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Чабер | 2000 | 50 |
|Satureja hortensis | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Чина посівна | 200000 | 1000 |
|Lathyrus sativus L. | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Шпинат | 5000 | 100 |
|Spinacia oleraceae | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Щавель | 10000 | 50 |
|Rumex acetosa | | |
|---------------------------+-------------------+----------------|
|Ячмінь звичайний | 25000 | 1000 |
|Hordeum vulgare L. | | |
------------------------------------------------------------------
Додаток 2
до Методики відбирання проб
насіння (зерна)
для перевірки відповідності
сорту критеріям заборони
до поширення в Україні
АПАРАТУРА, ОБЛАДНАННЯ, МАТЕРВАЛИ,
що їх застосовують під час відбирання проб
------------------------------------------------------------------
| Назва |Відбирання проб |Вологість |
|----------------------------------------------------------------|
| Прилади та обладнання |
|----------------------------------------------------------------|
|Ваги циферблатні з межею | + | + |
|зважування не менше 2 кг | | |
|------------------------------------+----------------+----------|
|Вологомір (точність | | + |
|вимірювання до 18% - +-1,5%, | | |
|вище 18% +-2,0). | | |
|------------------------------------+----------------+----------|
|Пробовідбирачі (різних конструкцій) | + | |
|----------------------------------------------------------------|
| Дрібний інвентар |
|----------------------------------------------------------------|
|Голки швацькі | + | |
|------------------------------------+----------------+----------|
|Лупа (х7) | + | |
|------------------------------------+----------------+----------|
|Лупа зернова (х4, х5) | + | |
|за ГОСТ 25706 | | |
|------------------------------------+----------------+----------|
|Набір гир за ГОСТ 7328 | + | |
|------------------------------------+----------------+----------|
|Пінцети за ГОСТ 21241 | + | |
|------------------------------------+----------------+----------|
|Плівка поліетиленова | + | |
|------------------------------------+----------------+----------|
|Пломбір | + | |
|------------------------------------+----------------+----------|
|Посуд місткістю на менше 3 дм куб. | + | |
|------------------------------------+----------------+----------|
|Респіратори за ГОСТ 17269 | + | |
|------------------------------------+----------------+----------|
|Скальпель або лезо | + | |
|------------------------------------+----------------+----------|
|Совки лабораторні | + | + |
|------------------------------------+----------------+----------|
|Сургучна печатка | + | |
|------------------------------------+----------------+----------|
|Торбинки з вологонепроникної плівки | + | |
|------------------------------------+----------------+----------|
|Торбинки з тканини різної місткості | + | |
|------------------------------------+----------------+----------|
|Пакети з цупкого паперу | + | |
|------------------------------------+----------------+----------|
|Шпателі | + | + |
|------------------------------------+----------------+----------|
|Щупи конусні, циліндричні, мішкові | + | |
------------------------------------------------------------------
_______________
Примітка.Рекомендовано використовувати довідники, визначники, атласи, колекції насіння культурних і дикорослих рослин, шкідників.
Додаток 3
до Методики відбирання проб
насіння (зерна)
для перевірки відповідності
сорту критеріям заборони
до поширення в Україні
ІНСТРУМЕНТИ
для відбирання проб
1. Циліндричний щуп складається з двох порожнистих, уставлених одна в одну, припасованих трубок з нержавіючого металу, з ретельно відполірованими всередині і зовні поверхнями. Верхня трубка (футляр) має тверде вістря, а внутрішня (для зручності користування) - ручку на протилежному кінці. Обидві трубки мають наскрізні прорізи однакових розмірів, а внутрішня ще й перетинки біля кожного, які утворюють чарунки. Якщо прорізи збігаються, насіння заповнює чарунки; під час обертання внутрішньої трубки на півоберт чарунки зачиняються.
Циліндричний щуп придатний для відбирання точкових (первинних) проб насіння більшості культур (за винятком плівчастих з поганою сипкістю) з буртів, транспортних засобів, контейнерів великої місткості.
2. Щуп мішковий типу Ноббе - це прилад у вигляді порожнистої добре відполірованої трубки з нержавіючого металу, загальною довжиною близько 500 мм, з загостреним кінцем (біля 60 мм) з одного боку і дерев'яною насадженою ручкою (біля 100 мм) - з іншого. Робоча частина (близько 340 мм) з боку вістря (або на всю її довжину) має проріз (отвір), через який насіння проникає у жолобок щупу і висипається через відчинений отвір на ручці трубки. Внутрішній діаметр щупу: 14 мм для зернових культур і 10 мм для дрібнонасінних (типу конюшини).
3. Конічний щуп - прилад, який складається з металевої штанги з ручкою. На протилежному кінці прикріплений конусний стакан, щоб штанга у його порожнині мала вільний рух, і накривка, що глухо прикріплена до штанги. Коли щуп вертикально вводять в зернову масу накривка щільно затуляє стакан; коли необхідну глибину насипу досягнено, штангу піднімають, накривка відчиняє стакан і насіння заповнює його. Такий щуп придатний для відбирання точкових (первинних) проб насіння з необхідної глибини насипу, транспортних засобів, незашитих мішків та інших розкритих контейнерів великої місткості.
Додаток 4
до Методики відбирання проб
насіння (зерна)
для перевірки відповідності
сорту критеріям заборони
до поширення в Україні
АКТ N _______
відбирання середніх (репрезентативних) проб насіння для визначення посівних якостей "___" _________200__р.
Мною, інспектором, уповноваженим Держсортслужбою ____________
_________________________________________________________________
(району, області)
згідно з ДСТУ 4138-2002 проведено огляд насіннєвих партій і
відібрано середні проби від насіння, яке належить _______________
_________________________________________________________________
(назва господарства, району, області)
Відбирання проб проведено у присутності представників
господарств:
___________________ ___________________
(посада) (П.І.Б.)
1. Відомості про насіння
---------------------------------------------------------------------
|N з/п|Культура|Сорт| Рік |Категорія|Походження| N | Маса |
| | | |врожаю| та | | партії, |партії,|
| | | | |генерація| |контрольної| т |
| | | | | | | одиниці | |
|-----+--------+----+------+---------+----------+-----------+-------|
| | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
---------------------------------------------------------------------
-----------------------------------------------------------------------------
|Кількість| Місце |Призначеність| Відомості про | Кількість |
| місць, |зберігання| партії |--------------------------|представлених|
| шт. | | |етикетування,|опечатування| проб |
| | | | маркування | | |
|---------+----------+-------------+-------------+------------+-------------|
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
-----------------------------------------------------------------------------
2. Проби направлено до Держсортслужби для дослідження таких
показників: _____________________________________________________
_________________________________________________________________
3. Додаткові відомості __________________________________________
4. Схема розташування контрольних одиниць _______________________
_________________________________________________________________
5. Зауваження та вказівки інспектора ____________________________
_________________________________________________________________
Інспектор___________________
М.П.
Підписи представників господарства, присутніх під час відбирання
проб
__________________ _________________
(посада) (П.І.Б.)
___________________ _________________
(посада) (П.І.Б.)
Гарантія. Збереження партій від змішування, засмічування,
зниження посівних якостей, а також збереження та надання
дублікатних проб на випадок арбітражного аналізування, гарантую.
Керівник господарства _____________ _________________
М.П. (посада) (П.І.Б.)
Додаток 5
до Методики відбирання проб
насіння (зерна)
для перевірки відповідності
сорту критеріям заборони
до поширення в Україні
СЕРЕДНЯ ПРОБА НАСІННЯ
згідно з актом N _________ від _______________200_р.
1. Назва господарства __________________________________________
2. Культура ____________________________________________________
3. Сорт ________________________________________________________
4. Етап насінництва (категорія) ________________________________
5. Генерація (репродукція) _____________________________________
6. Рік урожаю __________________________________________________
7. N партії (контрольної одиниці) ______________________________
8. Маса партії _________________________________________________
9. Кількість місць _____________________________________________
10. На який вид аналізування ____________________________________
Інспектор __________________ __________________
(посада) (П.І.Б.)
ЗАТВЕРДЖЕНО
Наказ Мінагрополітики
України
30.12.2008 N 907
МЕТОДИКА
визначення наявності генетичної модифікації стійкості до Раундапу в насіннєвому лоті товарної сої за допомогою імунострипів
1. Сфера застосування
1.1. Ця методика поширюється на призначене для сівби та товарне насіння сої. Методика не поширюється на насіння зразків сортів сої, що передається до сховища Держсортслужби з метою державного сортовипробування.
1.2. Методика встановлює правила аналізу зразків товарного насіння сої та насіння, призначеного для сівби на наявність генетичної модифікації стійкості до Раундапу за допомогою імунострипів. Методика не поширюється на аналізи з визначення інших генетичних конструкцій, крім тієї, що зазначено у назві методики. Методика не поширюється на інші методи аналізу ГМО, ніж той (метод аналізу за допомогою імунострипів), що зазначений у назві методики.
1.3. Вимоги цієї методики є обов'язкові у процесі контролю за поширенням генетично модифікованих рослин сої, стійкої до Раундапу.
2. Принцип реакції імунострипу та його призначення
2.1. Імунострип призначений для експрес аналізу наявності білка CP4 EPSPS на рівні, що типово експресується в насінні сої, що містить генетичну конструкцію стійкості до Раундапу, методом імуноферментного аналізу.
2.2. Межа чутливості імунострипу 0,1% сої з генетичною конструкцією стійкості до Раундапу (тобто 1 насінина на 1000 насінин, що не містять цієї генетичної модифікації).
3. Прилади, обладнання, реагенти
3.1. Прилади та обладнання
- лабораторні стакани (посуд), придатні для стерилізації об'ємом 100 та 250-300 мл.;
- лабораторні ваги до 250 г., з ціною поділки до 0,01 г.;
- шпателі для зважування, придатні до стерилізації;
- автоклав;
- мікромлин типу Grindomix GM200 (Retsch, Німеччина), або аналогічний млин чи подрібнювач, із складовими частинами (ножі, стакани, гравітаційні кришки);
- Дистилятор (або в разі його відсутності дистильована вода);
- Мірний циліндр до 100 мл з ціною поділки 0,1мл.;
- Стерильні рукавиці.
3.2. Імунострипи фірми Envirologix (або іншої фірми з подібними характеристиками, які прописані в інструкції фірми).
4. Хід аналізу
4.1. Для об'єктивної характеристики насіннєвого матеріалу згідно з рекомендаціями міжнародної асоціації з тестування насіння ISTA для аналізу беруть лабораторну пробу з 3000 насінин (SEEDCALC), що була відібрана із робочої проби, яка в свою чергу була відібрана відповідно до Методики відбирання проб насіння (зерна) для перевірки відповідності сорту критеріям заборони до поширення в Україні.
4.2. Оскільки межа чутливості імунострипу 1 насінина на 1000 насінин лабораторну пробу поділяють на три рівні субпроби по 1000 насінин в кожній. (Можна використовувати механічний поділювач проб але для цього партія зерна має бути ретельно очищена від домішок та інертної маси).
4.3. Насіння субпроби переносять у лабораторний посуд відповідного об'єму (місткістю не менше 250-300 мл), що придатний до стерилізації.
4.4. Після цього насіння кожної окремої субпроби розмелюють на мікромлині типу Grindomix GM200 (Retsch, Німеччина) *
_______________
Примітка: Основні характеристики мікромлина повинні бути наступними: усі складові частини (ножі, стакани, гравітаційні кришки) повинні вільно розбиратися, прочищатися та стерилізуватися після кожного розмелу, щоб уникнути потенційного забруднення залишками з наявністю генетичної модифікації. За розмелювання шроту насіннєвий матеріал не повинен нагріватися, щоб не призвести до денатурації маркерного білка.
4.5. Для розмелу субпробу переносять у відповідний стакан для подрібнення з встановленим попередньо ножем та закривають гравітаційною кришкою. Режим розмелу повинен бути підібраний таким чином, щоб отримати шрот з найменшою тонкістю розмелу. Наприклад, для Grindomix GM200 це становить 25 сек. при 5000 обертів на хвилину. За необхідності тривалість розмелу можна збільшити.
4.6. Після подрібнення субпроби зважують наважку отриманого шроту від 10 до 20 грамів в залежності від маси 100 зерен, переносять наважку в лабораторний стакан відповідного обсягу (не менший 100 мл) та додають дистильованої води в об'ємі, розрахованому за формулою:
кількість грамів наважки шроту сої х 5 = кількість мілілітрів води.
Тобто:
(100 х 0,15г) = 15г х 5 = 75 мл.
4.7. Після доливання дистильованої води пробу ретельно перемішати до утворення суспензії (20-30 сек. залежно від об'єму проби) та залишити до утворення осаду.
4.8. Спеціальною одноразовою піпеткою з набору для імунострипів, відібрати необхідну для проведення реакції порцію рідини та перенести до реакційної пробірки (реакційні одноразові пробірки з набору).
4.9. З попередньо нагрітого до кімнатної температури контейнеру з імунострипами обережно (бажано в стерильних умовах) дістати імунострип
_______________
Примітка: При маніпуляції з імунострипом запобігати його перегинанню та негайно закрити контейнер.
4.10. Опустити імунострип у рідину реакційної пробірки та чекати поки рідина не підніметься за допомогою капілярних сил до верхнього кінця імунострипу. Зачекати 5 хвилин та лише після цього проводити кінцеву інтерпретацію результату.
4.11. Після отримання результату залишок шроту за необхідності подальшого аналізу на вміст інших генетичних конструкцій або аналізу зразка іншими методами зберегти у герметичному лабораторному посуді.
4.12. Складові частини мікромлина ретельно вичищають, промивають та стерилізують. І лише після стерилізації всіх компонентів переходять до аналізу наступної субпроби, починаючи з пункту 4.4.
4.13. Інтерпретація результату на імунострипі.
4.13.1. Наявність однієї контрольної смужки на імунострипі свідчить про те, що імунострип працює належним чином, а проба має негативну реакцію на наявність специфічного білка - продукту експресії генетичної конструкції, що викликає стійкість до Раундапу.
4.13.2. Наявність двох смужок (контрольної та нижчої від неї тест-смужки) на імунострипі свідчить про те, що імунострип працює належним чином, а проба має позитивну реакцію на наявність специфічного білка - продукту експресії генетичної конструкції, що викликає стійкість до Раундапу з точністю не менше 0,1%).
4.13.3. Відсутність будь-яких смужок на імунострипі свідчить про те, що імунострип не працює належним чином і його необхідно вилучити з проведення аналізу, а аналіз повторити з іншим імунострипом.
4.14. Інтерпретація результату аналізу лабораторної проби.
4.14.1. У разі, коли усі три проаналізовані субпроби мали негативну реакцію на присутність білка, що зумовлює стійкість до Раундапу, лабораторну пробу і всю партію насіння вважають такою, яка не містить генетичної модифікації, що зумовлює стійкість до Раундапу.
4.14.2. У разі, коли одна з трьох проаналізованих субпроб мала позитивну реакцію на присутність білка, що зумовлює стійкість до Раундапу лабораторну пробу і всю партію насіння вважають такою, яка містить насіння з генетичною модифікацією, що зумовлює стійкість до Раундапу до 0,04%.
4.14.3. У разі, коли дві з трьох проаналізованих субпроб мали позитивну реакцію на присутність білка, що зумовлює стійкість до Раундапу лабораторну пробу і всю партію насіння вважають такою, яка містить насіння з генетичною модифікацією, що зумовлює стійкість до Раундапу до 0,11%.
4.14.4. У разі, коли всі три проаналізовані субпроби мали позитивну реакцію на присутність білка, що зумовлює стійкість до Раундапу лабораторну пробу і всю партію насіння вважають такою, яка містить насіння з генетичною модифікацією, що зумовлює стійкість до Раундапу у кількості, що перевищує 0,11%.
Відсотки обчислюються за програмою SEEDCALC, створеною фахівцями з ISTA.
В основі цієї програми лежить формула:
ГМ % = ( 1(1 - d/n)1/m) x 100, де
d - кількість субпроб, в яких виявлено ГМО,
n - загальна кількість субпроб,
m - кількість зерен в субпробі
| Директор Департаменту ринків рослинництва | О.А.Демидов |
