Про затвердження галузевих стандартів

На виконання вимог Закону України "Про трансплантацію органів та інших анатомічних матеріалів людині" та відповідно до ДСТУ 1.0-93 "Державна система стандартизації України. Основні положення"

1. Затвердити галузеві стандарти ГСТУ 42.2-03-2001 "Органна культура сім'яників новонароджених поросят. Критерії визначення якості та методика одержання" та ГСТУ 42.1-04-2001 "Органна культура щитовидної залози новонароджених поросят. Критерії визначення якості та методика одержання" (додаються).

2. Міністру охорони здоров'я Автономної Республіки Крим, начальникам управлінь охорони здоров'я обласних державних адміністрацій, Головного управління охорони здоров'я Київської міської державної адміністрації та управління охорони здоров'я Севастопольської міської державної адміністрації, керівникам закладів охорони здоров'я, що підпорядковані МОЗ України, прийняти галузеві стандарти до відома та виконання.

3. Головному спеціалісту управління медичного страхування, нових медичних технологій та експлуатації медичних закладів Ніколенко А.М. забезпечити подання затверджених в п.1 галузевих стандартів на державну реєстрацію в Держстандарт України.

Контроль за виконанням наказу залишаю за собою.

1 РОЗРОБЛЕНО Координаційним центром трансплантації органів, тканин і клітин МОЗ України

ВНЕСЕНО Координаційним центром трансплантації органів, тканин і клітин МОЗ України

2 ЗАТВЕРДЖЕНО ТА НАДАНО ЧИННОСТІ МОЗ України, наказ від N

3 ВВЕДЕНО ВПЕРШЕ

4 РОЗРОБНИКИ: В.М.Бугаєв, І.С.Турчин, Г.А.Зубкова, Т.І.Давидова, І.І.Дроздович, О.П.Потіха, Л.М.Сидоренко, Р.О.Чернецька, Л.О.Кожевнікова.

1 Галузь використання

2 Нормативні посилання

3 Визначення

4 Позначення і скорочення

5 Вимоги

6 Методи контролю

Додаток А. Форма посвідчення якості ксенотрансплантату

Додаток Б. Форма посвідчення лікаря-ксенотрансплантолога

Стандарт розроблений на виконання статті 3 Закону України "Про трансплантацію органів та інших анатомічних матеріалів людини" від 16.07.99 N 1007-XIV [1].

1 Галузь використання

Цей стандарт поширюється на органну культуру сім'яників новонароджених поросят і установлює методику одержання та критерії якості органної культури сімя'ників новонароджених поросят. Органна культура сім'яників (далі - органна культура) новонароджених поросят використовується в експериментальних дослідженнях та медичній практиці.

Вимоги цього стандарту є обов'язковими для закладів, установ і організацій охорони здоров'я, незалежно від форми власності, що виконують роботи, пов'язані з трансплантацією [1, 2] .

2 Нормативні посилання

У цьому стандарті є посилання на такі стандарти

ГОСТ 4159-79 Йод кристаллический

ГОСТ 4201-66 Натрий гидрокарботат

ГОСТ 4204-77 Кислота серная

ГОСТ 4220-75 Калий двухромовокислый

ГОСТ 4233-77 Натрий хлористый

ГОСТ 5556-81 Вата стерильная

ГОСТ 177-88 Пергидроль

ГОСТ 6709-79 Вода дистиллированная

ГОСТ 8273-75 Бумага оберточная

ГОСТ 11109-90 Марля медицинская

ГОСТ 4204-77 Кислота серная

ГОСТ 4201-66 Натрий гидрокарботат

ГОСТ 13341-77 Бокс ламинарный

ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректифицированный

ГОСТ 25336-82 Чашки Петри

ГОСТ 20292-74 Пипетки мерные с делениями

ТУ 16-535.273-75 Лампы бактерицидные

ТУ3-3 ЭД1.828-78 Микроскоп МБИ - 6

ТУ3-3.ЭД1.4004-87 Микроскоп биологический "БИОЛАМ" типа И (исследовательский)

ТУ 64-1-1468-77 Аппарат для культивирования тканей во вращающихся пробирках

ТУ 5.375.4260-75 Центрифуга лабораторная медицинская ОПн-3

ТУ-3-01 України 005-93 Холодильник побутовий двокамерний "NORD-233"

ТУ У 2.760113-016-95 Термостат ТВ-80

ТУ У 42.76007113.004-93 Серилізатор повітряний ГП-20

ТУ 25-7410.603-86 Мілівольтметр рН-150М

ТУ 25.2010.001-89 Сушильна шафа для скляного посуду

ТУ 64-164-78 Ножиці хірургічні прямі, довжиною 150 мм

ТУ 64-164-78 Ножиці зігнуті для розтину м'яких тканин

ТУ 64-1-2934-80 Ножиці для мікрохірургії

ТУ 64-1433-77 Ножницы гильотинные

ТУ 64-1-37-78 Пінцети хірургічні загального призначення

ТУ 64-1-1993-77 Пінцети анатомічні загального призначення

ТУ У 6-0015225014-96 Пляшки скляні, закриті гумовими пробками

ТУ 6.01-4689387-16-89 Хлорамін Б технічний

ДФ, Х1, вып 2 Раствор Хенкса

ДФ, Х1, вып 2 Среда 199

Засіб миючий для миття скла за діючим НД

Пеніцилін за діючим НД

Сироватка великої рогатої худоби за діючим НД

Підноси емальовані за діючим НД

Кипятильник дезинфікаційний електричний за діючим НД

Горілки спиртові за діючим НД

3 Визначення

У цьому стандарті подані такі терміни та визначення:

ксенотрансплантація - пересадка анатомічного матеріалу особині яка належить до іншого виду;

ксенотрансплантат - анатомічний матеріал призначений для трансплантації особині, яка належить до іншого виду;

лікар-ксенотрансплантолог - фахівець з вищою медичною освітою, що атестований атестаційною комісією Координаційного центру трансплантації органів, тканин і клітин МОЗ України;

органна культура сім'яників - отримана певним чином суспензія тканин;

культивування - утримання клітин, тканин в певних умовах з метою збереження їх структури, життєздатності та властивостей;

живильне середовище - середовище у якому клітини, тканини зберігають структуру, властивості, життєздатність;

критерії якості - сукупність вимог, які мають задовольняти потреби ксенотрансплантації;

екстирпація - радикальне видалення органу;

стерильність - відсутність живих мікроорганізмів;

посвідчення якості ксенотрансплантату - документ встановленої форми який засвідчує якість трансплантату;

посвідчення лікаря-ксенотрансплантолога - документ встановленої форми виданий атестаційною комісією Координаційного центру трансплантації органів, тканин і клітин МОЗ України;

реципієнт - особа, для лікування якої застосовується трансплантація;

нативний - природній

4 Позначення і скорочення

КЦТОТіК МОЗ України - Координаційний центр трансплантації органів, тканин і клітин МОЗ України

СНІД - синдром набутого імунодефіциту

НД - нормативний документ

5 Вимоги

5.1. Критерії якості органної культури:

- наявність тестостерону;

- гістологічна будова;

- імуногенність.

5.1.1 Якість органної культури визначається наявністю тестостерону у культуральному середовищі, що визначається радіоімунологічним методом. Вміст тестостерону у культуральному середовищі має становити не менше (3,2+(-)0,02) нмоль/мл. [3]

5.1.2 Важливим показником якості органної культури є її гістологічна будова.

Органна культура має зберігати основні морфологічні та структурні елементи, властиві нативному сім'янику. У органній культурі повинна зберігатися канальцева будова, але епітелій може бути багатошаровим. Клітини Сертолі добре окреслені з округлими світлими ядрами. В інтерстиціальній тканині повинні визначатися скупчення клітин Лейдіга, які мають свідчити про високу функціональну активність органної культури.

5.1.3 Критерієм якості органної культури також є її імуногенність, яка дозволяє прогнозувати тривалість функціонування трансплантату в організмі реціпієнта. Імуногенність не повинна перевищувати показника зворотнього титру, що становить (2,44+(-)0,2) в реакції пасивної гемагглютинації.

5.2 Методика одержання органної культури сім'яників новонароджених поросят

5.2.1 Медико - біологічні вимоги до тварин

Для отримання ксенотрансплантату використовуються органи здорових новонароджених поросят (1,5+(-)0,5) год від народження, від особин, здоров'я яких підтверджено документами санітарно-епідеміологічної та ветеринарної служби.

5.2.2 Умови утримання тварин

Доставка тварин в організацію - виробника здійснюється в спеціальних стерильних контейнерах з додержанням санітарно-гігієнічних та ветеринарних вимог, з супровідними документами від ветеринарного лікаря про їх стан.

Тварини, відібрані для одержання матеріалу ксенотрансплантації, повинні утримуватися відповідно до санітарно-гігієнічних та ветеринарних вимог.

5.2.3 Порядок проведення робіт щодо вилучення сім'яників

Взяття матеріалу для виготовлення ксенотрансплантатів повинно здійснюватися з додержанням загальних принципів гуманного поводження з тваринами та правил асептики і антисептики.

5.2.3.1 Інструменти, обладнання і матеріали

Бокс ламінарний ГОСТ 13341-77, лампи бактерицидні ТУ 16-535.273-75, мікроскоп МБИ-6 ТУ3-3 ЭД1.828-78, мікроскоп "БИОЛАМ" ТУ3-3.ЭД1.4004-87, апарат для культивування тканин з обертанням пробірок ТУ 64-1-1468-77, центрифуга лабораторно-медична ОПн ТУ 5.375.4260-75 з швидкістю 2 об/хв, холодильник NORD ТУ-3-01 України 005-93 з температурою від 4 до мінус 18 о С , Термостат ТВ-80 ТУ У 2.760113-016-95, стерилізатор повітряний ГП-20 ТУ У 42.76007113.004-93, мілівольтметр рН-150М ТУ 25-7410.603-86, сушильна шафа для скляного посуду ТУ 25.2010.001-89, кипятильник дезинфікаційний електричний за НД,

ножиці хірургічні прямі, довжиною 150 мм ТУ 64-164-78 та ножиці зігнуті для розтину м'яких тканин ТУ 64-164-78, ножиці для мікрохірургії ТУ 64-1-2934-80, ножиці гильйотинні ТУ 64-1433-77, підноси емальовані за НД, пінцети хірургічні загального призначення ТУ 64-1-37-7, пінцети анатомічні загального призначення ТУ 64-1-1993-77, горілки спиртові за НД,

вата стерильна ГОСТ 5556-81, марля медична ГОСТ 11109-90, вода дистильована ГОСТ 5556-81,

пляшки скляні, закриті гумовими пробками ТУ У 6-0015225014-96 (далі - пляшки), чашки Петрі ГОСТ 25336-82, піпетки мірні з поділками ГОСТ 20292-74, папір обгортковий ГОСТ 20292-74,

спирт етиловий ректифікований ГОСТ 18300-87, засіб миючий для скла за НД, йод кристалевий ГОСТ 4159-79, пергідроль ГОСТ 177-88, натрій гідрокарбонат ГОСТ 4201-66, кислота сірчана ГОСТ 4204-77, калій двохромовокислий ГОСТ 4220-75 , натрій хлористий ГОСТ 4233-77, хлорамін Б технічний ТУ 6.01-4689387-16-89, розчин Хенкса ДФ, Х1, вып 2, середовище 199 ДФ, Х1, вып 2, сироватка великої рогатої худоби пеніцилін за НД.5.2.3.2

5.2.3.2 Підготовка посуду: Посуд закладають на 1 добу у підігрітий до 50 град. C 3%-ний розчин миючого засібу для скла, ретельно промивають проточною водою, після чого посуд переносять у 5%-ний розчин двохромовокислого калію в концентрованій сірчаній кислоті. Знову промивають проточною водопровідною а потім дистильованою водою. Посуд висушують у сушильній шафі при температурі 120 град. C, охолоджують до кімнатної температури, загортають у папір і стерилізують у сушильній шафі при температурі 180 град. C протягом (1,35+(-)0,3) год Підготовка боксу: перед роботою бокс ретельно миють 3%-ним розчином хлораміну, а потім піддають дії ультрафіолетових променів протягом (1+(-)0,2) год. Бактерицидні лампи слід вимкнути за (30+(-)0,3) хв до початку роботи. Поверхню столів у боксі безпосередньо перед початком роботи оброблюють згіднодіючої інструкції. Ріжучі інструменти на (1+(-)0,5) год до початку роботи кладуть у ємність з 96-градусним спиртом, усі інші інструменти стерилізують у кип'ятильнику дезинфікаційному протягом (3+(-)0,3) год.

5.2.3.3 Порядок вилучення сім'яників

Поросят забивають ножицями гільйотинними. Екстирпацію сім'яників здійснюють з дотриманням жорстких правил асептики і антисептики. Забиту тварину старанно миють проточною водою, температура якої становить (45+(-)1) град С та кладуть на спину на стерильний піднос. Шкіру в області мошонки обробляють спочатку спиртом міцністю 96 град. C , а потім 2,5% спиртовим розчином йоду. Стерильним інструментом роблять надріз шкіри по середній лінії вздовж довжиною (8,0+(-)0,5) см після чого розрізають піхвову оболонку, підшкірну клітковину разом з підшкірним м'язом. Обережно відпрепаровують від білкової оболонки та видаляють сім'яники. Видалені сім'яники поміщають у пляшки (по 3 у кожну) та подрібнюють ножицями до фрагментів розміром 1 мм х 1 мм.

5.2.4 Приготування органної культури

Подрібнений матеріал відмивають охолодженим до 4 град. C розчином Хенкса і вміщують у пляшки з повним живильним середовищем (середовище 199 у кількості (450+(-)0,5) мл., сироватка великої рогатої худоби (45+(-)2) мл., пеніцилін 100 од/мл). 5%-ним розчином натрію гідрокарбонату доводять рН до 7,4. Одержану суспензію по 1 мл розливають у пляшки в кожну до яких додають по (4+(-)0,1) мл живильного середовища. Суспензію залишають у холодильнику при температурі (4+(-)0,1) град. C на (30+(-)0,5) хв , а потім переносять у термостат де витримують (24+(-)0,1) год при температурі (32+(-)0,3) град. C, після чого зливають надосадову рідину, а осад заливають живильним середовищем. Пляшки встановлюють у апарат для культивування тканин з обертанням 2 об/хв та поміщають для культивування у термостат де витримують (24+(-)0,1) год при температурі (32+(-)0,3) град. C

Подальші три дні культивування заміну живильного середовища слід проводити вранці та ввечері через кожні (12+(-)0,1) год, а надалі - 1 раз на добу ввечері, в один і той же час. Щоденно контролювати стерильність органної культури. Загальний час культивування становить (5+(-)0,1) діб.

Перед введенням в організм реціпієнта органну культуру слід 7 разів відмити від живильного середовища фізіологічним розчином при температурі (32+(-)0,3) град. C, додавати (10+(-)0,2) мл фізіологічного розчину де витримувати до підсадки в організм реціпієнта, але не більше (15+(-)0,5) хв.

За добу до використання органної культури в клініці, обов'язково проводять її морфо-гормонально-імунологічний та бактеріо-вірусо-мікологічний контроль.

6 Методи контролю:

- бактеріологічний;

- вірусологічний;

- мікологічний.

Органна культура проходить тестування на стерильність згідно з діючою інструкцією. Бактеріологічний контроль проводиться з метою виключення забруднення органної культури грампозитивними та грамнегативними аеробними та анаеробними бактеріями згідно з діючою інструкцією [6,7].

Також здійснюється контроль за допомогою полімеразної ланцюгової реакції, яка дозволяє визначити та вилучити органну культуру, заражену мікроорганізмами мікоплазми, блідої трепонеми (сифиліс), токсоплазми, вірусами СНІДу (HIV-1/HIV-2), гепатиту (B і C), краснухи, цитомегаловірусу і герпеса [4,5]

Усі наведені вище роботи проводяться в умовах акредитованої лабораторії та за наявності атестованих методик виконання вимірювань згідно Закону України "Про метрологію та метрологічну діяльність" [7]

До виконання робіт з вирощування та визначення якості органних культур допускаються особи з вищою медичною чи біологічною освітою.

Вирощені органні культури реєструються в обліковому журналі установи - виробника органної культури.

Якість органної культури засвідчується посвідченням якості ксенотрансплантату.

Форма посвідчення якості ксенотрансплантату наведена у додатку А.

Посвідчення якості ксенотрансплантату видає фахівець з вищою медичною освітою, що атестований атестаційною комісією Координаційного центру трансплантації органів, тканин і клітин МОЗ України.

Форму посвідчення лікаря-ксенотрансплантолога наведено у додатку Б.

1. Закон України "Про трансплантацію органів та інших анатомічних матеріалів людині" від 16.07.99 N 1007-XIV.

2. Постанова Кабінету Міністрів України від 24.04.2000 р. N 695.

3. Методичні рекомендації МОЗ України "Трансплантація культур клітині тканин сім'яників при гіпогонадизмі", 1999.

4. Технологічний регламент, МОЗ України, 1995.

5. Наказ МОЗ СРСР від 03.09.91 N 254.

6. Закон України "Про метрологію та метрологічну діяльність" від 11.02.98 N 113/98-ВР.

7. Наказ Міністерства юстиції України від 25.09.2000 р. N 226.

Ключові слова: органна культура, сім'яники, новонароджені поросята, ксенотрансплантат.

1 РОЗРОБЛЕНО Координаційним центром трансплантації органів, тканин і клітин МОЗ України.

ВНЕСЕНО Координаційним центром трансплантації органів, тканин і клітин МОЗ України.

2 ЗАТВЕРДЖЕНО ТА НАДАНО ЧИННОСТІ МОЗ України, наказ від ______ N.

3 ВВЕДЕНО ВПЕРШЕ.

4 РОЗРОБНИКИ І.С.Турчин, В.М.Бугаєв, Г.А.Зубкова, Т.І.Давидова, І.І.Дроздович, Л.М.Сидоренко, Л.О.Кожевнікова, О.П.Потіха Р.О.Чернецька.

5 ЗАРЕЄСТРОВАНО УкрНДІССІ Держстандарту України від _____ N.

1 Галузь використання

6 Нормативні посилання

7 Визначення

8 Позначення і скорочення

9 Вимоги

6 Методи контролю

Додаток А. Форма посвідчення якості ксенотрансплантату

Додаток Б. Форма посвідчення лікаря-ксенотрансплантолога

Бібліографія

Стандарт розроблений на виконання статті 3 Закону України "Про трансплантацію органів та інших анатомічних матеріалів людини" від 16.07.99 N 1007-XIV [1].

1 Галузь використання

Цей стандарт поширюється на органну культуру щитовидної залози новонароджених поросят і установлює методику одержання та критерії якості органної культури щитовидної залози новонароджених поросят. Органна культура щитовидної залози (далі - органна культура) новонароджених поросят використовується в експериментальних дослідженнях та медичній практиці.

Вимоги цього стандарту є обов'язковими для закладів, установ і організацій охорони здоров'я, незалежно від форми власності, що виконують роботи, пов'язані з трансплантацією, згідно з чинним законодавством [1, 2].

2 Нормативні посилання

У цьому стандарті є посилання на такі стандарти

ГОСТ 4159-79 Йод кристаллический

ГОСТ 4201-66 Натрий гидрокарботат

ГОСТ 4204-77 Кислота серная

ГОСТ 4220-75 Калий двухромовокислый

ГОСТ 4233-77 Натрий хлористый

ГОСТ 5556-81 Вата стерильная

ГОСТ 177-88 Пергидроль

ГОСТ 6709-79 Вода дистиллированная

ГОСТ 8273-75 Бумага оберточная

ГОСТ 111009-90 Марля медицинская

ГОСТ 4204-77 Кислота серная

ГОСТ 4201-66 Натрий гидрокарботат

ГОСТ 13341-77 Бокс ламинарный

ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректифицированный

ГОСТ 25336-82 Чашки Петри

ГОСТ 20292-74 Пипетки мерные с делениями

ТУ 16-535.273-75 Лампы бактерицидные

ТУ3-3 ЭД1.828-78 Микроскоп МБИ-6

ТУ3-3.ЭД1.4004-87 Микроскоп биологический "БИОЛАМ" типа И (исследовательский)

ТУ 64-1-1468-77 Аппарат для культивирования тканей во вращающихся пробирках

ТУ 5.375.4260-75 Центрифуга лабораторная медицинская ОПн-3

ТУ-3-01 України 005-93 Холодильник побутовий двокамерний "NORD-233"

ТУ У 2.760113-016-95 Термостат ТВ-80

ТУ У 42.76007113.004-93 Серилізатор повітряний ГП-20

ТУ 25-7410.603-86 Мілівольтметр рН-150М

ТУ 25.2010.001-89 Сушильна шафа для скляного посуду

ТУ 64-1 64-78 Ножиці хірургічні прямі, довжиною 150 мм

ТУ 64-164-78 Ножиці зігнуті для розтину м'яких тканин

ТУ 64-1-2934-80 Ножиці для мікрохірургії

ТУ 64-1433-77 Ножницы гильотинные

ТУ 64-1-37-78 Пінцети хірургічні загального призначення

ТУ 64-1-1993-77 Пінцети анатомічні загального призначення

ТУ У 6-0015225014-96 Пляшки скляні, закриті гумовими пробками

ТУ 6.01-4689387-16-89 Хлорамін Б технічний

ДФ, Х1, вып 2 Раствор Хенкса

ДФ, Х1, вып 2 Среда 199

Засіб миючий для скла за діючим НД

Пеніцилін за діючим НД

Сироватка великої рогатої худоби за діючим НД

Підноси емальовані за діючим НД

Кипятильник дезинфікаційний електричний за діючим НД

Горілки спиртові за діючим НД

3 Визначення

У цьому стандарті подані такі терміни та визначення:

ксенотрансплантація - пересадка анатомічного матеріалу особині яка належить до іншого виду;

ксенотрансплантат - анатомічний матеріал призначений для трансплантації особині, яка належить до іншого виду;

лікар-ксенотрансплантолог - фахівець з вищою медичною освітою, що атестований атестаційною комісією Координаційного центру трансплантації органів, тканин і клітин МОЗ України;

органна культура щитовидної залози - отримана певним чином суспензія тканин;

культивування - утримання клітин, тканин в певних умовах з метою збереження їх структури, життєздатності та властивостей;

живильне середовище - середовище у якому клітини, тканини зберігають структуру, властивості, життєздатність;

критерії якості - сукупність вимог, які мають задовольняти потреби ксенотрансплантації;

екстирпація - радикальне видалення органу;

стерильність - відсутність живих мікроорганізмів;

посвідчення якості ксенотрансплантату - документ встановленої форми який засвідчує якість трансплантату;

посвідчення лікаря-ксенотрансплантолога - документ встановленої форми виданий атестаційною комісією Координаційного центру трансплантації органів, тканин і клітин МОЗ України;

реципієнт - особа, для лікування якої застосовується трансплантація.

4 Позначення і скорочення

НД - нормативний документ

СНІД - синдром набутого імунодефіциту

КЦТОТіК МОЗ УкраїниКоординаційний центр трансплантації органів, тканин і клітин МОЗ України

5 Вимоги

5.1 Критерії якості органної культури:

- наявність вільного тироксину;

- гістологічна будова;

- імуногенність.

5.1.1 Якість органної культури визначається наявністю вільного тироксину (Т4) у культуральному середовищі, що визначається радіоімунологічним методом. Вміст Т4 у культуральному середовищі має бути не меншим 40,3 пмоль/л [3].

5.1.2 Важливим показником якості органної культури є її гістологічна будова. Органна культура повинна зберігати основні морфологічні та структурні елементи тиреоїдної тканини. Середня висота тироцитів має бути такою ж, як до культивування: (9,7+(-)0,1) мкм та (10,7+(-)0,2) мкм, відповідно. Стан фолікулярного епітелію, колоїда, міжфолікулярної тканини та стромальних елементів мають свідчити про високу функціональну активність органної культури. У цитоплазмі тироцитів визначаються ультраструктурні еквіваленти синтезу гормону - секреторні гранули.

5.1.3 Критерієм якості органної культури також є її імуногенність, яка дозволяє прогнозувати тривалість функціонування трансплантату в організмі реціпієнта. Імуногенність не повинна перевищувати показника зворотнього титру, що становить (1,3+(-)0,2) в реакції пасивної гемагглютинації.

5.2 Методика одержання органної культури щитовидної залози новонароджених поросят

5.2.1 Медико-біологічні вимоги до тварин

Для отримання ксенотрансплантату використовуються органи здорових новонароджених поросят (1,5+(-)0,5) год від народження, від особин, здоров'я яких підтверджено документами санітарно-епідеміологічної та ветеринарної служби.

5.2.2 Умови утримання тварин

Доставка тварин в організацію - виробника здійснюється в спеціальних стерильних контейнерах з додержанням санітарно-гігієнічних та ветеринарних вимог, з супровідними документами від ветеринарного лікаря про їх стан.

Тварини, відібрані для одержання матеріалу ксенотрансплантації, повинні утримуватися відповідно до санітарно-гігієнічних та ветеринарних вимог.

5.2.3 Порядок вилучення ксенотрансплантатів

Взяття матеріалу для виготовлення ксенотрансплантатів повинно здійснюватися з додержанням загальних принципів гуманного поводження з тваринами та правил асептики і антисептики [1].

5.2.3.1 Інструменти, обладнання і матеріали

Бокс ламінарний ГОСТ 13341-77, лампи бактерицидні ТУ 16-535.273-75, мікроскоп МБИ-6 ТУ3-3 ЭД1.828-78, мікроскоп "БИОЛАМ" ТУ3-3.ЭД1.4004-87, апарат для культивування тканин з обертанням пробірок ТУ 64-1-1468-77, центрифуга лабораторно-медична ОПн ТУ 5.375.4260-75 з швидкістю 2 об/хв, холодильник NORD ТУ-3-01 України 005 - 93 з температурою від 4 до мінус 18 град. C, Термостат ТВ-80 ТУ У 2.760113-016-95, стерилізатор повітряний ГП-20 ТУ У 42.76007113.004-93, мілівольтметр рН-150М ТУ 25-7410.603-86, сушильна шафа для скляного посуду ТУ 25.2010.001-89, кипятильник дезинфікаційний електричний за НД,

ножиці хірургічні прямі, довжиною 150 мм ТУ 64-164-78 та ножиці зігнуті для розтину м'яких тканин ТУ 64-164-78, ножиці для мікрохірургії ТУ 64-1-2934 -80, ножиці гильйотинні ТУ 64-1433-77, підноси емальовані за НД, пінцети хірургічні загального призначення ТУ 64-1-37-7, пінцети анатомічні загального призначення ТУ 64-1-1993-77, горілки спиртові за НД,

вата стерильна ГОСТ 5556-81, марля медична ГОСТ 11109-90, папір обгортковий ГОСТ 20292-74,

пляшки скляні, закриті гумовими пробками ТУ У 6-0015225014-96 (далі - пляшки), чашки Петрі ГОСТ 25336-82, піпетки мірні з поділками ГОСТ 20292-74, вода дистильована ГОСТ 5556-81, спирт етиловий ректифікований ГОСТ 18300-87, засіб миючий для скла за НД, йод кристалевий ГОСТ 4159-79, пергідроль ГОСТ 177-88, натрій гідрокарбонат ГОСТ 4201-66, кислота сірчана ГОСТ 4204-77, калій двохромовокислий ГОСТ 4220-75, натрій хлористий ГОСТ 4233-77, хлорамін Б технічний ТУ 6.01-4689387-16-89, розчин Хенкса ДФ, Х1, вып 2, середовище 199 ДФ, Х1, вып 2, сироватка великої рогатої худоби пеніцилін за НД.

5.2.3.2 Підготовка посуду: Посуд закладають на 1 добу у підігрітий до 50 град. C 3%-ний розчин миючого засобу для скла, ретельно промивають проточною водою, після чого посуд переносять у 5%-ний розчин двохромовокислого калію в концентрованій сірчаній кислоті. Знову промивають проточною водопровідною а потім дистильованою водою. Посуд висушують у сушильній шафі при температурі 120 град. C, охолоджують до кімнатної температури, загортають у папір і стерилізують у сушильній шафі при температурі 180 град. C протягом (1,35+(-)0,3) год.

Підготовка боксу: перед роботою бокс ретельно миють 3%-ним розчином хлораміну, а потім піддають дії ультрафіолетових променів протягом (1+(-)0,2) год. Бактерицидні лампи слід вимкнути за (30+(-)0,3) хв до початку роботи. Поверхню столів у боксі безпосередньо перед початком роботи оброблюють згідно діючої інструкції. Ріжучі інструменти на (1+(-)0,5) год до початку роботи кладуть у ємність з 96-градусним спиртом, усі інші інструменти стерилізують у стерилізаторі протягом (3+(-)0,3) год.

5.2.3.3 Порядок вилучення ксенотрансплантатів

Поросят забивають гільйотинними ножицями. Екстирпацію щитовидних залоз здійснюють з дотриманням жорстких правил асептики і антисептики. Забиту тварину старанно миють проточною водою, температура якої становить (45+(-)1) град. C та кладуть на спину на стерильний піднос.

Шкіру в області шиї обробляють спочатку спиртом міцністю 96 град. C, а потім 2,5% спиртовим розчином йоду. Стерильним інструментом роблять надріз шкіри по середній лінії вздовж трахеї довжиною (7,0+(-)0,5) см, після чого розрізають підшкірну клітковину разом з підшкірним м'язом. Розділяють грудинно-сосковидні та грудинно-під'язичні м'язи, оголюючи трахею. Щитовидна залоза розміром (1х7х4) мм та вагою (155+(-)5) мг досить щільно прилягає до трахеї. Дуже обережно відпрепаровують щитовидну залозу від трахеї, не пошкоджуючи великих судин. Виділені щитовидні залози поміщають у пляшки (по 3 у кожну) та подрібнюють до фрагментів розміром (1х1) мм.

5.2.3.4 Приготування органної культури

Подрібнений матеріал відмивають охолодженим до 4 град. C розчином Хенкса і вміщують у пляшки з повним живильним середовищем (середовище 199 у кількості (450+(-)0,5) мл., сироватка великої рогатої худоби - (45+(-)2) мл., пеніцилін 100 од/мл). 5%-ним розчином натрію гідрокарбонату доводять рН до 7,4. Одержану суспензію по 1 мл розливають у пляшки в кожну до яких додають по (4+(-)0,1) мл живильного середовища. Суспензію залишають у холодильнику при температурі (4+(-)0,1) град С на (30+(-)0,5) хв, а потім переносять у термостат де витримують (24+(-)0,1) год при температурі (28+0,2) град. C, після чого зливають надосадову рідину, а осад заливають живильним середовищем. Пляшки встановлюють у ротаційний апарат з швидкістю обертання 2 об/хв та поміщають для культивування у термостат де витримують (24+(-)0,1) год. при температурі (28+(-)0,2) град. C.

Подальші три дні культивування заміна живильного середовища проводиться вранці та ввечері через кожні (12+(-)0,1) год, а надалі - 1 раз на добу, ввечері, в один і той же час. Щоденно контролювати стерильність органної культури. Загальний час культивування становить (5+(-)0,1) діб.

Перед введенням в організм реціпієнта органну культуру слід 7 разів відмити від живильного середовища фізіологічним розчином при температурі (28+(-)0,2) град. C, додавали (10+(-)0,2) мл фізіологічного розчину де витримувати до підсадки в організм реціпієнта, але не більше (15+(-)0,5) хв.

За добу до використання органної культури в клініці, обов'язково проводять її морфо-гормонально-імунологічний та бактеріо-вірусо-мікологічний контроль.

6 Методи контролю:

- бактеріологічний;

- вірусологічний;

- мікологічний.

Органна культура проходить тестування на стерильність згідно з діючою інструкцією. Бактеріологічний контроль проводиться з метою виключення забруднення органної культури грампозитивними та грамнегативними аеробними та анаеробними бактеріями згідно з діючою інструкцією.

Також здійснюється контроль з допомогою полімеразної ланцюгової реакції, яка дозволяє визначити та вилучити органну культуру, заражену мікроорганізмами мікоплазми, блідої трепонеми (сифиліс), токсоплазми, вірусами СНІДу (HIV-1/HIV-2), гепатиту (B і C), краснухи, цитомегаловірусу і герпеса [4, 5].

Усі наведені вище роботи проводяться в умовах акредитованої лабораторії та за наявності атестованих методик виконання вимірювань згідно Закону України "Про метрологію та метрологічну діяльність" [6].

До виконання робіт з вирощування та визначення якості органних культур допускаються особи з вищою медичною чи біологічною освітою.

Вирощені органні культури реєструються в обліковому журналі установи-виробника органної культури.

Якість органної культури засвідчується посвідченням якості ксенотрансплантату.

Форма посвідчення якості ксенотрансплантату наведена у додатку А.

Посвідчення якості ксенотрансплантату видає фахівець з вищою медичною освітою, що атестований атестаційною комісією Координаційного центру трансплантації органів, тканин і клітин МОЗ України [7].

Форму посвідчення лікаря-ксенотрансплантолога наведено у додатку Б

1. Закон України "Про трансплантацію органів та інших анатомічних матеріалів людині" від 16.07.99 N 1007-XIV.

2. Постанова Кабінету Міністрів України від 24.04.2000 р. N 695.

3. Методичні рекомендації МОЗ України "Трансплантація культур клітині тканин сім'яників при гіпогонадизмі", 1999.

4. Технологічний регламент, МОЗ України, 1995.

5. Наказ МОЗ СРСР від 03.09.91 N 254.

6. Закон України "Про метрологію та метрологічну діяльність" від 11.02.98 N 113/98-ВР.

7. Наказ Міністерства юстиції України від 25.09.2000 р. N 226.

Ключові слова: органна культура, сім'яники, новонароджені поросята, ксенотрансплантат.