Нормативи і методи мікробіологічного контролю продуктів дитячого харчування, виготовлених на молочних кухнях системи охорони здоровя. СанПін 42-123-4423-87

триптофан по ТУ 6-09-1492-80;

пептон сухой ферментативный по ГОСТ 1385-76.

3.4. Дополнительные материалы и реактивы для определения коагулазоположительного стафилококка;

плазма кролика сухая, выпускаемая Белорусским ИЭМ или др. производства;

яйцо куриное диетическое;

сухой питательный агар на основе ферментативного гидрозолита кормовых дрожжей;

*** теллурит, 2%-й раствор стерильный, производства Объединения "Мосхимфармпрепараты" им. Семашко;

литий хлористый, х. ч. ТУ 6-09-3751-74; 1-водный;

натрия пируват, ч., ТУ 6-09-08-990-75;

изотонический раствор натрия хлорида, стерильный.

3.5. Дополнительные материалы и реактивы для определения сальмонелл:

бутыли стеклянные по ГОСТ 5717-81;

кастрюли эмалированные по ГОСТ 24788-81;

целлофан (пленка полиэтиленцеллофановая) ОСТ 6-06-114-79;

дрожжи прессованные по ГОСТ 171-81;

висмут-сульфитный агар по ТУ42 14127-78;

железо сернокислое;

д-глюкоза, ч., по ГОСТ 6038-79;

д-лактоза, 1-водная ч., ТУ 6-09-2293-79;

магний хлористый, 6-водный, ч., х. ч., ч. д. а., по ГОСТ 4209-77;

мел химически осажденный по ГОСТ 6253-72;

мочевина, ч., по ГОСТ 6691-77;

натрий хлористый, *, ч. д. а., х. ч., Гост 4233-77;

натрий серноватистокислый, ч. д. а., СТ СЭВ 223-75;

сахароза, ч. д. а., по ГОСТ 5833-75;

среда Плоснирева по МРТУ 42-154-67;

соль Мора, ч., ГОСТ 4208-724

среда Клиглера;

сыворотка сальмонеллезная О-агглютинирующая адсорбированная по ГОСТ 16449-78;

феноловый красный ТУ 6-09-4530-77;

хлороформ технический по ГОСТ 20015-74;

культура бактерий рода сальмонелла (контрольный штамм);

бриллиантовый зеленый, ч., по ТУ 6-09-4279-76;

желчь сухая по ОСТ 49 278-75 или желчь нативная кр. рог. скота, стерильная;

натрий кислый селенистокислый;

натрий фосфорнокислый двузамещенный, безводный;

натрий фосфорнокислый однозамещенный;

вода дистиллированная;

йод металлический;

калий йодистый, ч. д. а., ГОСТ 4232-74;

изотонический раствор натрия хлорида, стерильный.

4.1. Питательные среды и реактивы общего назначения.

4.1.1. Изотонический 0,85% раствор хлористого натрия. Для приготовления изотонического раствора с рН 6.9-7,0 используют дистиллированную воду, рН которой проверяют индикатором бромтимолблау, при его добавлении цвет воды должен быть бутылочно-зеленым. В иных случаях воду не используют. Изотонический раствор разливают в пробирки или флаконы необходимых количествах, стерилизуют при 1 атм. 20 мин.

4.1.2. 0,1%-й водный раствор пептона (пептонная вода). К 1 л дистиллированной воды добавляют 1 г пептона.

После размешивания среду кипятят, фильтруют и разливают по пробиркам и флаконам в неохбодимых количествах, стерилизуют при 1 атм. 30 мин.

4.1.3. Приготовление раствора двууглекислого натрия для нейтрализации проб кисломолочных продуктов, реактивов для окраски по Граму, мясо-пептонного бульона (МПБ), мясо-пептонного агара (МПА) производят согласно ГОСТ 9225-84; ГОСТ 18963-73.

4.2. Специальные питательные среды и реактивы.

4.2.1. Среда для определения общего количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.

Сухой питательный агар производства - 35 г

ДагНИИ питательных сред

Экстракт кормовых дрожжей производ - 2,5 г *** МНИИВС им.Мечникова

Глюкоза - 1.0 г

Вода дистилированная - 1000,0 куб. см

pH - 7,0

Стерилизация в автоклаве при (121+-2) град.С в течение (21+-3) мин.

4.2.2. Среды и реактивы для выделения бактерий группы кишечных палочек и эшерихий коли.

4.2.2.1. Среда Кесслер с лактозой.

К 1 куб. дм водопроводной воды добавляют (10,0+-0,1) г пептона в 50 куб. см желчи крупного рогатого скота. Смесь кипятят на водяной бане при помешивании 20-30 мин. Затем фильтруют ее через ватно-марлевый фильтр, добавляют 2,5 г лактозы: доводят объем водой до 1 куб. дм. Устанавливают рН 7,4-7,6 используя 1 н растворы NaOH или HCL и проверяя значение рН на потенциометре или универсальной индикаторной бумаге. Добавляют 4 куб. см 1%-ного раствора генцианового фиолетового, разливают в колбы по 90 куб. см и в пробирки по 10 куб. см, закладывают поплавки (пробирки Уленгута) отверстием книзу.

Стерилизуют при (121+-2) град.С в течение 15 мин.

4.2.2.2. 1% раствор генцианового (кристаллического) фиолетового.

Взвешивают (1,0+-0,01) г генцианового (кристаллического) фиолетового, помещают в мерную колбу: вместимостью 100 куб. см и доливают до метки дистиллированной водой. Раствор хранят при температуре (4+-1) град.С в течение 7 суток.

4.2.2.3. Среда Кесслер с лактозой из сухих питательных сред.

Среда готовится согласно прописи на этикетке банки.

4.2.2.4. Среда Эндо.

Среду Эндо производства ДагНИИ питательных сред готовят согласно прописи на этикетке банки. Изготовленную и разлитую в стерильные чашки Петри среду можно хранить при температуре (4+-1) град.С до 10 суток.

4.2.2.5. Среда на индол.

Взвешивают (10,0+-0,1) г сухого панкреатического гидлизата казеина (или 100,0 куб. см жидкого панкреатического гидролизата казеина с содержанием 500 мг% аминного азота). (5,0+-0,1)г хлористого натрия, (1,0+-0,01) г ДЛ-триптофана, растворяют в 1000 куб. см дистиллированной воды. Доводят рН до 7.0+-0.1 и растворами NaOH или HCL и измеряя значение рН на потенциометре или по универсальной индикаторной бумаге. Разливают в пробирки по 5 куб. см, стерилизуют 15 мин. при (121+-2) град.С.

4.2.2.6. Реактив па индол (Эрлиха).

Взвешивают (5,0+-0,1) г пара-диметиламинооензальдегида в стеклянном стакане вместимостью 100 см, помещают в коническую колбу вместимостью 200 куб. см и растворяют в (50+-1) куб. см этилового спирта. С помощью мерного цилиндра вместимостью 100 куб. см медленно добавляют (50+-1) куб. см концентрированной соляной кислоты. Раствор хранят в колбе с притертой пробкой при температуре (4+-1) град.С.

4.2.2.7. Среда Кларка.

Взвешивают (5,0+-0,1) г пептона, (5,0+-0,1) г глюкозы, (5,0+-0,1) г двузамещенного фосфорнокислого калия. Растворяют ингредиенты в 950 куб. см дистиллированной воды, устанавливают рН 6,9+-0,1, используют 1 н растворы NaOH или HCL, проверяя значение рН на потенциометре или универсальной индикаторной бумагой. Доводят общий объем до 1 куб. дм дистиллированной водой и фильтруют при необходимости. Разливают в пробирки по 5 куб. см, стерилизуют в течение 20 мин при (115+-2) град.С.

4 2.2.8. 90% раствор этилового спирта.

Добавляют к (900+-5) куб.см 96%-ного этилового спирта (60+-1) куб. см дистиллированной воды в колбе емкостью 1000 куб. см.

4.2.2.9. Раствор индикатора метилового красного.

Взвешивают (0,1+-0,001) г индикатора метилового красного, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 500 куб. см, растворяют в (300+-1) куб. см 90%-ного раствора этилового спирта (п. 4.2.2.8), добавляют до 500 куб. см дистиллированной водой. Хранят раствор з колбе с притертой пробкой при температуре (4+-1) град.С.

4.2.2.10. 5% раствор альфа-нафтола.

Взвешивают (5,0+-0,1) г а-нафтола, растворяют в (100+-1) куб. см абсолютного этилового спирта. При отсутствии абсолютного этилового спирта можно использовать ректификованный этиловый спирт 96 град.С. Раствор должен быть свежеприготовленным.

4.2.2.11. 40%-ный раствор гидроокиси калия.

Взвешивают (40,0+-0,1) г гидроокиси калия в стакане вместимостью 100 куб. см, переносят в мерную колбу вместимостью 100 куб. см, растворяют в (60,0+-1) см дистиллированной воды, затем доводят до метки дистиллированной водой. Раствор хранят при температуре (4+-1) град.С.

4.2.2.12. Среда Козера.

Взвешивают (1,5+-0,1) г натрия-аммония фосфорнокислого, (1,0+-0,01) г калия фосфорнокислого двузамещенного, (0,2+-0,01) г магния сульфата, (3,0+-0,1) г натрия лимоннокислого трехзамещенного. Растворяют в 950 куб. см дистиллированной воды. Добавляют 10 куб. см 0,5%-ного спиртового раствора бромтимолового синего. Устанавливают рН 6.8 1 н растворами NaOH или HCL, проверяя значение рН на потенциометре. Доводят объем дистиллированной водой до метки (1 куб. дм). Разливают по 10 куб. см в пробирки, стерилизуют в течение 15 мин при (121+-2) град.С.

4.2.2.13. 0,5%-ный раствор бромтимолового синего в спирте.

Взвешивают (0,5+-0,01) г бромтимолового синего, помещают в мерную колбу вместимостью 100 куб. см и доводят этиловым спиртом до метки. Раствор хранят при температуре (4+-1) град.С в течение 30 суток.

4.2.2.14. Среда Симмонса.

Среда готовится аналогично среде Козера (п. 4.2.2.12). Но после измерения рН в нее добавляют (20+-0,1) г агара на 1 куб. дм, прогревают на водяной бане до растапливания агара, стерилизуют в течение 15 мин при (121+-2) град.С. Разливают в стерильные чашки Петри или пробирки.

4.2.3. Среды и реактивы для выделения стафилококков.

4.2.3.1. Солевой бульон.

К (100+-1) куб. см мясопептонного бульона (МПБ) с рН 7,2-7,4 в колбе вместимостью 200 куб. см добавляют (6,5+-0,1) г хлористого натрия и разливают в пробирки по (10,0+-0,1) куб. см. Стерилизуют в автоклаве при (121+-2) град.С в течение (20+-3) мин.

4.2.3.2. Агар типа Байрд-Паркер.

30 г сухого питательного агара на основе ферментативного гидролизата кормовых дрожжей, производства Да*станского НИИ питательных сред, размешивают в 1 куб. дм дистиллированной воды, добавляют 10 г пирувата натрия, 5 г хлористого лития, тщательно перемешивают, Смесь нагревают при помешивании и кипятят в течение 1 минуты до полного растворения ингредиентов. Устанавливают рН 7,2. Разливают во флаконы объемами 100-200-300 куб. см в зависимости от потребности и стерилизуют при 121 град.С 15 мин. Среда может хранится в течение месяца в условиях холодильника. Перед употреблением в растопленную и охлажденную до 45-59 град.С среду с соблюдением правил асептики прибавляют (из расчета на 100 куб. см среды) 0,5 куб. см 2% раствора теллурита калия в 5 куб. см эмульсии яичного желтка. Среду тщательно перемешивают н разливают в чашки Петри в объеме не менее 20 куб. см на чашку. Чашки со средой могут быть использованы в течение 24 часов, максимум 48 часов. Перед посевом чашки со средой подсушивают в термостате общепринятым способом.

4.2.3.3. Желточно-солевой агар (ЖСА).

Основа-солевой агар: к мясо-пептонному бульону (МПБ) с рН 7,2-7,4 добавляют 2% агара и 6,5% хлористого натрия, расплавляют на водяной бане, при необходимости фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают мерным цилиндром по (100+-1) куб. см в колбы вместимостью 250 куб. см и стерилизуют при (121+-2) град.С в течение (30+-3) мин. Получают солевой агар. Вместо мясо-пептонного бульона можно использовать сухой питательный агар, добавив к нему только 6.5% хлористого натрия.

ЖСА: на (100+-1) куб. см стерильного расплавленного и остуженного до (45+-2) град.С солевого агара добавляют (20+-0,1) куб. см эмульсии яичного желтка. После полного размешивания желточно-солевой агар разливают в стерильные чашки Петри по 20-25 куб. см и хранят в холодильнике до 5-7 дней.

4.2.3.4. Эмульсия яичного желтка.

На дно стерильной чашки Петри помешают куриное яйцо, которое тщательно протирают ватой, смоченной этиловым спиртом. Стерильным пинцетом пробивают с двух противоположных сторон яйца два отверстия. Через одно из этих отверстий полностью удаляют белок, а затем несколько увеличив отверстие, выливают желток в стерильную колбу вместимостью 200 куб. см. К желтку постепенно добавляют (частями по 20-30 куб. см) 180-200 куб. см стерильного физиологического раствора, затем содержимое тщательно встряхивают до получения гомогенной массы.

4.2.3.5. Цитратная плазма кролика.

Цитратная плазма кролика для реакции плазмокоагуляции выпускается в сухом виде. Готовят непосредственно перед употреблением согласно прописи в прилагаемом наставлении.

4.2.4. Среды и реактивы для выделения бактерий рода Salmonella.

4.2.4.1. Магниевая среда.

Среда готовится из трех растворов (*):

I раствор:

II раствор:

III раствор:

После растворения всех ингредиентов растворы соединяют, разливают приготовленную таким образом среду в колбы и флаконы. Среду стерилизуют при (112+-1) град.С в течение 30 мин.

4.2.4.2. 0,5%-ный водный раствор бриллиантового зеленого.

Для приготовления 0.5%-ного раствора взвешивают (0,5+-0,01) г индикатора бриллиантового зеленого, вносят в стерильную мерную колбу вместимостью 100 куб. см доводят стерильной дистилированной водой до метки. Раствор хранят в холодильнике в течение 7 суток.

4.2.4 3. Дрожжевой диализат.

Взвешивают (1000+-10) г свежих хлебных (прессованных) дрожжей, размешивают в (1000+-1) куб. см дистиллированной воды в кастрюле до состояния гомогенной массы, которую переливают целлофановый мешок, предварительно промыты дистиллированной, водой. Мешок завязывают, обмывают под струей питьевой воды, а затем дистиллированной водой и погружают в эмалированную кастрюлю, в которую предварительно наливают (1300+-1) куб. см дистиллированной воды. Мешок должен быть полностью погружен в жидкость. Диализ ведут при температуре 60-80 град.С в течении (6+-0.5) ч. 3а это время количество жидкости в кастрюле должно уменьшиться примерно в 2 раза. Затем жидкость из кастрюли переливают в стерильную бутыль и добавляют хлороформ (0,5% к объему жидкости) и сохраняют при (6+-1) град.С до 7 месяцев.

4.2.4.4. Среда Мюллера.

К 90 куб. см стерильного мясо-пептонного бульона добавляют:

а) 4,5 г мела, предварительно простерилизованного во флаконе сухим жаром (при 160 град.С в течение 2 ч);

б) 10 куб. см раствора гипосульфита натрия (50 г чистого кристаллического гипосульфита натрия в 100 куб. см дистиллированной воды стерилизуют текучим, паром в течение 30 мин);

в) 2 куб. см раствора Люголя (металлического йода 25 г, йодистого калия 20 г, дистиллированной воды 100 куб. см).

4.2.4.5. Среда Кауфмана.

К 100 мл среды Мюллера добавляют 1 мл водного раствора бриллиантового зеленого (1:1000) и 5 мл стерильной бычьей желчи. Приготовленную смесь стерилизуют текучим паром в течение 30 мин. Среда сохраняется длительное время. До стерилизации среда зеленого цвета, после стерилизации она приобретает зеленовато-коричневый тон.

4.2.4.6. Селенитовая среда накопления Лейфсона:

Среду готовят из двух основных растворов. Прежде всего экспериментально определяют точную пропорцию двузамещенного и однозамещенного фосфата натрия, которая с используемым образцом пептона и кислого селенистокислого натрия дает рН не выше 6,9-7,1, что регулируется изменением соотношения фосфатов. Такая предварительная подтитровка производится всякий раз, когда меняется серия любого из входящих в среду основных ингредиентов (пептон, кислый селенистокислый натрий, фосфаты).

После установления указанных соотношений к приготовленному раствору фосфатов добавляют пептон и лактозу, разливают во флаконы по 50 мл и стерилизуют текучим паром 2 дня по 30 мин или при 112 град.С однократно в течение 30 мин.

Отдельно на стерильной воде готовят 10% раствор кислого селенита натрия. Перед началом работы на каждый флакон с 50 мл основного раствора добавляют 2 мл раствора кислого селенита натрия. Приготовленную среду разливают, в стерильные пробирки по 5-7 мл и закрывают плотно пригнанными пробками.