МІНІСТЕРСТВО ОХОРОНИ ЗДОРОВ'Я УКРАЇНИ
Н А К А З
26.11.2003 N 547
Про затвердження галузевих стандартів
На виконання вимог Закону України "Про трансплантацію органів та інших анатомічних матеріалів людині" та відповідно до Закону України "Про стандартизацію" та ДСТУ 1.0-93 "Державна система стандартизації України. Основні положення"
НАКАЗУЮ:
1. Затвердити галузеві стандарти ГСТУ 42.4-06-2003 "Органна культура надниркової залози новонароджених поросят. Критерії визначення якості та методика одержання" та ГСТУ 42.5-07-2003 "Органна культура прищитоподібної залози новонароджених поросят. Критерії визначення якості та методика одержання" (не наводиться), що додаються.
2. Міністру охорони здоров'я Автономної Республіки Крим, начальникам управлінь охорони здоров'я обласних державних адміністрацій, Головного управління охорони здоров'я та медичного забезпечення Київської міської державної адміністрації та управління охорони здоров'я Севастопольської міської державної адміністрації, керівникам закладів охорони здоров'я, що підпорядковані МОЗ України, прийняти галузеві стандарти до відома та виконання.
3. Головному спеціалісту управління справами Ніколенко А.М. забезпечити подання затверджених в п. 1 галузевих стандартів на державну реєстрацію в Держспоживстандарт України.
4. Контроль за виконанням наказу покласти на заступника Міністра Загороднього В.В.
Перший заступник Міністра Ю.В.ПоляченкоЗАТВЕРДЖЕНО
Наказ Міністерства охорони
здоров'я України
26.11.2003 N 547
ГСТУ 42.4-06-2003
ГАЛУЗЕВИЙ СТАНДАРТ УКРАЇНИ
------------------------------
Трансплантація
ОРГАННА КУЛЬТУРА НАДНИРНИКОВОЇ ЗАЛОЗИ НОВОНАРОДЖЕНИХ ПОРОСЯТ
Критерії визначення якості та методика одержання
Міністерство охорони здоров'я України
2003
ПЕРЕДМОВА
1 Організація-розробник Координаційний центр трансплантації органів, тканин і клітин МОЗ України
2 ЗАТВЕРДЖЕНО І НАДАНО ЧИННОСТІ наказом МОЗ України, від 26.11.2003 N 547
3 УВЕДЕНО ВПЕРШЕ.
4 РОЗРОБНИКИ: І.Турчин, Г.Зубкова, Т.Давидова, І.Дроздович, Л.Сидоренко, Л.Кожевнікова.
5. Зареєстровано від 200 N
ЗМІСТ
1 Сфера застосування
2 Нормативні посилання
3 Терміни та визначення понять
4 Позначення і скорочення
5 Критерії якості органної культури
6 Методика одержання органної культури
7 Методи контролю отриманої органної культури
Додаток А. Форма заключення щодо якості ксенотрансплантата
Додаток Б. Форма посвідчення лікаря на право видачі
заключення щодо якості ксенотрансплантата
Додаток В. Бібліографія
ВСТУП
Цей стандарт розроблено на виконання статті 3 Закону України "Про трансплантацію органів та інших анатомічних матеріалів людині" від 16.07.99 N 1007-XIV [1].
ЗАТВЕРДЖЕНО
Наказ Міністерства охорони
здоров'я України
26.11.2003 N 547
ГСТУ 42.4-06-2003
ГАЛУЗЕВГАЛУЗЕВИЙ СТАНДАРТ УКРАЇНИЙ СТАНДАРТ УКРАЇНИ
------------------------------
Трансплантація
ОРГАННА КУЛЬТУРА НАДНИРНИКОВОЇ ЗАЛОЗИ НОВОНАРОДЖЕНИХ ПОРОСЯТ
Критерії визначення якості та методика одержання
Трансплантация
ОРГАННАЯ КУЛЬТУРА НАДПОЧЕЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ НОВОРОЖДЕННЫХ ПОРОСЯТ
Критерии определения качества и методика получения
Чинний від 2003.
1 СФЕРА ЗАСТОСУВАННЯ
Цей стандарт поширюється на органну культуру наднирникової залози новонароджених поросят і встановлює методику одержання та критерії якості органної культури наднирникової залози новонароджених поросят. Органна культура наднирникової залози новонароджених поросят (далі - органна культура) використовується в експериментальних дослідженнях та медичній практиці.
Вимоги цього стандарту є обов'язковими для закладів, установ і організацій охорони здоров'я, незалежно від форми власності, що виконують роботи, пов'язані з трансплантацією в межах Закону та постанови [1, 2].
2 НОРМАТИВНІ ПОСИЛАННЯ
У цьому стандарті є посилання на такі нормативні документи ДСТУ 3276-95 Посуд сталевий емальований. Загальні технічні умови
ГОСТ 177-88 Водорода перекись. Технические условия
ГОСТ 4159-79 Йод. Технические условия
ГОСТ 4201-79 Натрий углекислый кислый. Технические условия
ГОСТ 4204-77 Кислота серная. Технические условия
ГОСТ 4220-75 Калий двухромовокислый. Технические условия
ГОСТ 4233-77 Натрий хлористый. Технические условия
ГОСТ 5556-81 Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 8273-75 Бумага оберточная. Технические условия
ГОСТ 9412-93 Бутылки стеклянные для крови, трансфузионных и инфузионных препаратов. Технические условия
ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректифицированный технический.
Технические условия
ГОСТ 22649-83 Стерилизаторы воздушные медицинские. Общие технические условия
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 22649-83 Стерилизаторы воздушные медицинские. Общие технические условия
ГОСТ 29227-91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки
(ИСО 835-1-81) градуированные. Часть 1. Общие требования
ТУ 16-535.273-75 Лампы ртутные бактерицидные. Технические условия
ТУ 3-3 ЭД 1.828-78 Микроскоп биологический МБИ-И. Технические условия
ТУ 3-3 ЭД 1.4004-87 Микроскоп биологический "БИОЛАМ И" Технические условия
ТУ 64-1-1468-77 Аппарат для культивирования тканей во вращающихся пробирках. Технические условия
ТУ У 29.2-02071010.049-2001 Центрифуга настільна лабораторна ЦНЛ-6
ТУ-3-01 України 005-93 Холодильник побутовий двокамерний "NORD 233"
ТУ 64.1-1382-83 Термостати електричні сухоповітряні ТС-80 М2.
Технічні умови ТУ У 42.76007113.004-93 Стерилізатор повітряний ГП-20
ТУ 25-7410.003-86 рН-метр-милливольтметр типа рН-150М.
Технические условия
ТУ 25.2010.001-89 Шкафы сушильные електрические. Технические условия
ТУ 64-1433-77 Ножницы гильотинные. Технические условия
ТУ 64-1-2934-80 Ножницы для микрохирургии
ТУ 64-1-37-78 Пинцеты пластинчатые медицинские. Технические условия
ТУ У 6-001522 5 014-96 Пляшки скляні
ТУ 6.01-4689387-16-89 Хлорамин Б. Технические условия
3 ТЕРМІНИ ТА ВИЗНАЧЕННЯ ПОНЯТЬ
Нижче подано визначення термінів, використаних у цьому стандарті:
3.1 ксенотрансплантація - пересадка анатомічного матеріалу особині, яка належить до іншого виду;
3.2 ксенотрансплантат - анатомічний матеріал, призначений для трансплантації особині, яка належить до іншого виду;
3.3 органна культура наднирникової залози новонароджених поросят - суспензія тканин, отримана певним чином;
3.4 культивування - утримання клітин і тканин в певних умовах з метою збереження їх структури, життєздатності та властивостей;
3.5 живильне середовище - середовище, у якому клітини і тканини зберігають структуру, властивості, життєздатність;
3.6 критерії якості - сукупність вимог, яким повинен відповідати трансплантат;
3.7 екстирпація - радикальне видалення органу;
3.8 стерильність - відсутність живих мікроорганізмів;
3.9 заключення щодо якості ксенотрансплантата - документ встановленої форми, який засвідчує якість трансплантата;
3.10 посвідчення лікаря на право видачі заключення щодо якості ксенотрансплантата - документ встановленої форми, виданий атестаційною комісією Координаційного центру трансплантації органів, тканин і клітин МОЗ України;
3.11 реципієнт - особа, для лікування якої застосовується трансплантація;
3.12 нативний - природний
4 ПОЗНАЧЕННЯ ТА СКОРОЧЕННЯ
КЦТОТіК МОЗ України - Координаційний центр трансплантації органів, тканин і клітин МОЗ України
СНІД - синдром набутого імунодефіциту
НД - нормативний документ
5 КРИТЕРІЇ ЯКОСТІ ОРГАННОЇ КУЛЬТУРИ
5.1. Критеріями якості органної культури є:
- гормональна активність;
- гістологічна будова;
- імуногенність.
5.1.1 Якість органної культури визначають за наявністю кортизолу у культуральному середовищі, що визначаються радіоімунологічним методом та 11-оксікортикостероїдів [3]. Вміст 11-оксікортикостероїдів у культуральному середовищі має становити не менше 220 ммоль/л, а кортизолу 200 ммоль/л.
5.1.2 Важливим показником якості органної культури є її гістологічна будова. У органній культурі є фрагменти в яких зберігається сполучнотканинна капсула. Безпосередньо під капсулою виявляються численні сплющені клітини клубочкової зони. Фрагменти коркової речовини зберігають систему епітеліальних тяжів. Життєздатні адреноцити розташовуються як по периферії, так і в центральній частині тканинних фрагментів. Щільність розташування адреноцитів дорівнює (253+-34) клітин/мм.кв. Визначаються ознаки мітотичного поділу клітин, 4 мітоза на 100 клітин [4].
5.1.3 Критерієм якості органної культури також є її імуногенність, яка дозволяє прогнозувати тривалість функціонування трансплантата в організмі реципієнта. Імуногенність не повинна перевищувати показника зворотнього титру, що становить (1,9+-0,15) в реакції пасивної гемаглютинації.
6 МЕТОДИКА ОДЕРЖАННЯ ОРГАННОЇ КУЛЬТУРИ
6.1 Медико-біологічні вимоги до тварин, відібраних для одержання ксенотрансплантата
Для отримання ксенотрансплантата використовують органи здорових новонароджених поросят (1,5+-0,5 ) год. від народження від особин, здоров'я яких підтверджено документами санітарно-епідеміологічної та ветеринарної служб.
6.2 Умови утримання тварин
Доставку тварин в організацію-виробника здійснюють в спеціальних стерильних контейнерах з дотриманням санітарно-гігієнічних та ветеринарних вимог з супровідними документами від ветеринарного лікаря про їх стан.
Тварини, відібрані для отримання ксенотрансплантатів, треба утримувати відповідно до санітарно-гігієнічних та ветеринарних вимог.
Тушки відпрацьованих тварин здають для утилізації до санітарної служби господарства постачальника тварин.
6.3 Порядок вилучення наднирникової залози
Забір матеріалу для виготовлення ксенотрансплантатів необхідно здійснювати з додержанням загальних принципів гуманного поводження з тваринами та правил асептики і антисептики.
6.3.1 Обладнання, інструменти, матеріали, посуд, реактиви, середовища, сироватки
Обладнання:
бокс ламінарний згідно з чинним НД;
лампи ртутні бактерицидні згідно з ТУ 16-535.273;
мікроскоп МБИ-11 згідно з ТУ 3-3 ЭД 1.828;
мікроскоп "БИОЛАМ И" згідно з ТУ 3-3.ЭД 1.4004;
апарат для культивування тканин згідно з ТУ 64-1-1468;
центрифуга настільна лабораторна ЦНЛ-6 згідно з ТУ У 29.2-02071010.049;
холодильник NORD згідно з ТУ-3-01 України 005;
стерилізатор повітряний ГП-20 згідно з ТУ У 42.76007113.004;
рН-мерт-мілівольтметр типу рН-150М згідно з ТУ 25-7410.003;
термостат ТС-80 М2 згідно з ТУ 64.1-1382
шафа сушильна електрична згідно з ТУ 25.2010.001;
кип'ятильник дезинфікаційний електричний згідно з НД;
горілки спиртові згідно з НД;
Інструменти:
ножиці для мікрохірургії згідно з ТУ 64-1-2934;
ножиці гильйотинні згідно з ТУ 64-1433;
пінцети пластинчаті медичні згідно з ТУ 64-1-37;
Матеріали:
вата медична гігроскопічна згідно з ГОСТ 5556;
марля медична згідно з ГОСТ 9412-77;
папір обгортковий згідно з ГОСТ 8273;
засіб миючий для скла згідно з чинним НД;
Посуд:
пляшки скляні, закриті гумовими пробками згідно з ТУ У 6-001522 5 014 (далі - пляшки);
чашки Петрі згідно з ГОСТ 25336;
піпетки мірні поділками згідно з ГОСТ 29227;
підноси емальовані згідно з ДСТУ 3276-95;
Реактиви:
спирт етиловий ректифікований згідно з ГОСТ 18300;
йод згідно з ГОСТ 4159;
водню перекис згідно з ГОСТ 177;
натрій гідрокарбонат згідно з ГОСТ 4201;
кислота сірчана згідно з ГОСТ 4204;
калій двохромовокислий згідно з ГОСТ 4220;
натрій хлористий згідно з ГОСТ 4233;
вода дистильована ГОСТ 6709-72;
хлорамін Б технічний згідно з ТУ 6.01-4689387-16;
пеніцилін згідно з чинним НД;
лактальбумін гідролізат з чинним НД;
Середовища:
розчин Хенкса ДФ, Х1, вып 2;
середовище 199 ДФ, Х1, вып 2;
Сироватки:
сироватка великої рогатої худоби згідно з чинним НД;
сироватка теляча ембріональна згідно з чинним НД;
6.3.2 Підготовлення посуду:
Посуд закладають на 1 добу у підігрітий до 50 град. С 3%-ний розчин миючого засобу для скла, ретельно промивають проточною водою, після чого посуд переносять у 5%-ний розчин двохромовокислого калію в концентрованій сірчаній кислоті. Знову промивають проточною водопровідною, а потім дистильованою водою. Посуд висушують у сушильній шафі за температури 120 град. С, охолоджують до кімнатної температури, загортають у папір і стерилізують у сушильній шафі за температури 180 град. С протягом (1,35+-0,3) год.
Підготовлення боксу:
Перед роботою бокс ретельно миють 3%-ним розчином хлораміну, а потім піддають дії ультрафіолетових променів протягом (1+-0,2) год. Бактерицидні лампи слід вимкнути за (30+-0,3) хв. до початку роботи. Поверхню столів у боксі безпосередньо перед початком роботи обробляють згідно діючої інструкції. Ріжучі інструменти на (1+-0,5) год. до початку роботи кладуть у ємність з 96-градусним спиртом, усі інші інструменти стерилізують у кип'ятильнику дезинфікаційному протягом (3+-0,3) год.
6.3.3 Порядок вилучення наднирникової залози
Поросят забивають ножицями гільйотинними. Екстирпацію наднирникової залози здійснюють з дотриманням жорстких правил асептики і антисептики. Забиту тварину старанно миють проточною водою, температура якої становить (30+-1) град. С та кладуть на правий бік на стерильний піднос. Шкіру лівого боку обробляють спочатку 96-градусним спиртом, а потім 2,5%-ним спиртовим розчином йоду. Стерильним інструментом роблять надріз шкіри та підшкірно-жирової клітковини: праворуч - до краю хребта, вниз - до рівня гребінця клубової кістки таза, ліворуч - до середньої лінії, вверх - до рівня VIII-IX ребра. В області лівої нирки відкривають очерево і видаляють сегмент очеревини. Посувають ліворуч селезінку, підшлункову залозу та кишечник. З медіального боку верхнього полюсу нирки розсікають паранефральну жирову клітковину і з неї вилучають наднирник. Тварину перевертають на правий бік та аналогічно видаляють другий наднирник. Видалені наднирники відокремлюють від жиру та мозкової речови, поміщають у пляшки з (3+-0,05) мл. розчину гідролізата лактальбуміна та пеніциліном 100 од/мл і подрібнюють ножицями до фрагментів розміром 1 мм х 1 мм.
6.3.4 Приготування органної культури
Подрібнений матеріал відмивають шість разів охолодженим до (4+-0,1) град. С розчином Хенкса з антибіотиком і вміщують у пляшки з (5+-0,1) мл. повного живильного середовища.
_______________
Примітка. Склад повного живильного середовища: середовище 199 у кількості (200+-0,5) мл, лактальбумін гідролізат (200+-0,5) мл, сироватка великої рогатої худоби (40+-2) мл, пеніцилін 100 од/мл. Розчином натрію гідрокарбонату 5%-ним доводять рН до 7.
Суспензію поміщають у холодильник за температури (4+-0,1) град. С, на (60+-1,5) хв., після чого пляшки вставляють у апарат для культивування клітин з швидкістю обертання 2 об/хв та поміщають для культивування у термостат, де витримують за температури (28+-0,2) град. С.
Перші три дні культивування заміну живильного середовища слід проводити вранці та ввечері через кожні (12+-0,1) год., а надалі - 1 раз на добу ввечері, в один і той же час. Необхідно щоденно контролювати стерильність органної культури. Загальний час культивування становить (5+-0,1) діб.
Перед введенням в організм реципієнта органну культуру слід 7 разів відмити від живильного середовища фізіологічним розчином за температури (28+-0,3) град. С, додати (10+-0,2) мл. фізіологічного розчину та утримувати в ньому до підсадки в організм реципієнта, але не більше (15+-0,5) хв.
За добу до використання органної культури в клініці обов'язково проводять її морфо-гормонально-імунологічний та бактеріо-вірусо-мікологічний контроль.
7 МЕТОДИ КОНТРОЛЮ ОТРИМАНОЇ ОРГАННОЇ КУЛЬТУРИ
Органна культура проходить тестування на:
- бактеріологічний контроль;
- вірусологічний контроль;
- мікологічний контроль.
Органна культура проходить тестування на стерильність згідно з чинною інструкцією. Бактеріологічний контроль проводиться з метою виключення забруднення органної культури грампозитивними та грамнегативними аеробними та анаеробними бактеріями згідно з чинною інструкцією [5].
Також здійснюють контроль за допомогою полімеразної ланцюгової реакції, яка дозволяє визначити та вилучити органну культуру, заражену мікроорганізмами мікоплазми, блідої трепонеми (сифиліс), токсоплазми, вірусами СНІДу (HIV-1/HIV-2), гепатиту (В і С), краснухи, цитомегаловірусу і герпеса [5].
Усі наведені вище роботи проводять в умовах акредитованої лабораторії та за наявності атестованих методик виконання вимірювань відповідно до Закону України "Про метрологію та метрологічну діяльність" [6].
До виконання робіт з вирощування та визначення якості органних культур допускаються особи з вищою медичною чи біологічною освітою.
Вирощені органні культури реєструють в обліковому журналі установи-виробника органної культури.
Якість органної культури засвідчується заключенням щодо якості ксенотрансплантата.
Форма заключення щодо якості ксенотрансплантата наведена у додатку А.
Заключення щодо якості ксенотрансплантата видає фахівець з вищою медичною освітою, що атестований на право видачі такого заключення атестаційною комісією Координаційного центру трансплантації органів, тканин і клітин МОЗ України.
Форму посвідчення лікаря на право видачі заключення щодо якості ксенотранспланта наведено у додатку Б.
Додаток А
(обов'язковий)
ЗАКЛЮЧЕННЯ ЩОДО ЯКОСТІ КСЕНОТРАНСПЛАНТАТА
Зареєстровано у обліковому журналі
__________________________________
__________________________________
(назва установи, фахівець якої
видає посвідчення)
за N ___ від ___________ 200 р.
Цей документ посвідчує, що виготовлений в
__________________________________________________________________
(назва установи-виробника ксенотрансплантата)
ксенотрансплантат ________________________________________________
(назва ксенотрансплантата)
відповідає вимогам ГСТУ 42.4-06-2003
Лікар _____________ _________________________
(підпис) (ініціали, прізвище)
МП
Додаток Б
(обов'язковий)
КООРДИНАЦІЙНИЙ ЦЕНТР ТРАНСПЛАНТАЦІЇ
ОРГАНІВ, ТКАНИН І КЛІТИН МОЗ УКРАЇНИ
ПОСВІДЧЕННЯ ЛІКАРЯ НА ПРАВО ВИДАЧІ ЗАКЛЮЧЕННЯ ЩОДО ЯКОСТІ КСЕНОТРАНСПЛАНТАТА
Внесене до реєстру КЦТОТіК
МОЗ України "____"_____ 200 р
N ___________________________
Дійсний до "___"_______ 200 р
Цей документ посвідчує, що __________________________________
(прізвище, ім'я, по батькові)
атестований на право видачі заключень щодо якості
ксенотрансплантата.
Посвідчення лікаря видане на підставі рішення атестаційної
комісії КЦТОТіК МОЗ України
від "___" ____________ 200 р
Директор _____________ _________________________
(підпис) (ініціали, прізвище)
Секретар атестаційної комісії ___________ ______________________
(підпис) (ініціали, прізвище)
Додаток В
(довідковий)
БІБЛІОГРАФІЯ
1. Закон України "Про трансплантацію органів та інших анатомічних матеріалів людині" від 16.07.99 N 1007-XIV.
2. Постанова Кабінету Міністрів України від 24.04.2000 року N 695.
3. Резников А.Г. Методы определения гормонов. Справочное пособие. К., 1980. Наукова думка с. 258-259.
4. Турчин І.С. Проблеми трансплантації культур клітин і тканин залоз внутрішньої секреції хворим з різними формами ендокринопатії. Ендокринологія. - 1996. - Т. 1, N 2. - С. 6-13.
5. Технологічний регламент, МОЗ України, 1995.
6. Закон України "Про метрологію та метрологічну діяльність" від 11.02.98 N 113/98-ВР
Ключові слова: ксенотрансплантат, органна культура наднирникової залози, новонароджені поросята, критерії якості, методика одержання.